嗜黏蛋白阿克曼菌对大鼠胰岛细胞瘤细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌功能的影响

  目的  探讨嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila, A. muciniphila）对大鼠胰岛细胞瘤细胞（INS-1）增殖、凋亡及胰岛素分泌功能的影响。  方法  将INS-1细胞分为正常组、修复组和保护组,每组均用3种A. muciniphila干预物（活菌、灭活菌和分泌物）处理48 h,并设不干预的空白对照。正常组INS-1细胞直接干预;修复组INS-1细胞先用链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）造模再加干预物;保护组INS-1细胞先用干预物作用再加STZ造模。干预结束,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测细胞增殖;使用葡萄糖刺激,用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测胰岛素分泌水平;实时荧光定量PCR技术检测胰岛素分泌相关基因和凋亡基因表达,Western blot检测Bax凋亡蛋白的表达。  结果  A. muciniphila干预物对INS-1细胞作用48 h后,其细胞形态无明显变化。A. muciniphila活菌干预的修复组INS-1细胞增殖活性较空白对照降低（P<0.005）。A. muciniphila干预物对正常组、修复组和保护组INS-1细胞的胰岛素分泌没有影响（P>0.05）。A. muciniphila分泌物可促进正常组、修复组和保护组INS-1细胞葡萄糖转运蛋白2基因(glucose transporter 2, Glut2)和修复组葡萄糖激酶基因 (glucokinase, GCK)的表达（P<0.05）。3种A. muciniphila干预物处理后的正常组INS-1细胞Bcl₂-associated X基因 (Bax)的表达量减少（P<0.001）,A. muciniphila死菌干预的修复组INS-1细胞Bax基因表达量减少（P<0.05）。A. muciniphila干预物处理的细胞Bax蛋白表达减少。  结论  A. muciniphila可促进INS-1细胞胰岛素分泌相关基因的表达,抑制凋亡基因和凋亡蛋白Bax的表达,为研究如何用A. muciniphila改善2型糖尿病提供了新的方向。     

嗜黏蛋白阿克曼菌及Amuc_1100对高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的保护作用

目的 探究嗜黏蛋白阿克曼菌活菌、巴氏灭活菌及Amuc_1100蛋白干预对高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠的预防保护作用.方法 将96只SD大鼠随机分成8组,包括6组实验组和2组对照组,每组12只.采用高脂饲料喂养联合STZ注射模拟大鼠2型糖尿病进展.同时用不同剂量的嗜黏蛋白...     

12株腹泻病人粪便样本中弓形杆菌全基因组结果分析

目的 了解腹泻病人粪便中弓形杆菌菌株的遗传信息,分析其毒力和耐药基因,了解其MLST型别。方法 采用双孔滤膜法从腹泻病人粪便中分离弓形杆菌,分离到的菌株进行全基因组测序,对其种属信息、毒力基因、耐药基因和MLST分型进行分析。结果 12株弓形杆菌中,布氏弓形杆菌7株,嗜低温弓形杆菌5株,基本含有弓形杆菌属常见的毒力基因,耐药基因中外排泵相关基因占多数,ST型均为新型。结论 腹泻病人中分离得到的弓形杆菌毒力基因含量丰富,耐药基因预测结果提示其可能具有一定的耐药性。     

佩戴时长和空气质量对口罩细菌污染影响的实验研究

目的 探究佩戴时长和空气质量对口罩细菌污染的影响,同时调查普通人群口罩佩戴情况,为人们正确使用口罩提供参考。方法 招募45名健康志愿者,分组佩戴不同类型口罩及佩戴天数,记录每日气温及空气质量指数,检测口罩大肠菌群和细菌菌落总数。在成都市两个地铁站口观察并访谈路人,了解人群口罩佩戴情况。结果 共检测口罩51只（45只实验口罩+6只空白口罩）,均未检出大肠菌群;3种口罩细菌数量随佩戴天数增加而增加,呈显著正相关关系（相关系数r分别为0.954、0.899、0.943,P<0.05）;细菌总数较高的口罩,佩戴过程中的平均空气质量指数较高;口罩细菌菌落总数与气温无明显相关。共计观察了489人口罩佩戴情况,正确使用者占29.45%,随机访谈的100名口罩佩戴者中,94人有访谈所提及的口罩使用不当或认知错误。结论 人们在口罩的佩戴、保存方式及使用时长上缺乏足够认识,正确使用率不高;选择合理的佩戴时长有助于减少口罩细菌污染;空气质量可能是口罩上细菌滋生的影响因素。     

嗜黏蛋白阿克曼菌益生菌潜力的初步评估

目的 评估嗜黏蛋白阿克曼菌（Akkermansia muciniphila）DSM 22959的益生菌潜力。方法 通过吸光度测定和菌落计数探究Akkermansia muciniphila耐受低pH和胆盐的能力,通过吸光度测定探究其自聚、共聚能力和疏水性,K - B法测定其抗生素敏感性和抑菌活性,菌落计数评价其黏附能力,动物实验初步评判其安全性。结果 Akkermansia muciniphila在pH≤4时,生长明显受到抑制,在pH = 4时存活率为64%,添加0.3%胆盐后存活率为98%。自聚力随时间延长而增加,与不同的细菌共聚力不同,疏水性为75.82%,对万古霉素、红霉素和卡那霉素耐药,对氨苄西林和四环素敏感,无抑菌活性,能够黏附HT - 29细胞,黏附指数为15,能够在一定程度上抑制条件致病菌的黏附。动物实验结果提示灌胃两个月后无不良反应。结论 Akkermansia muciniphila能够耐受一定浓度的胆盐,对不同种类的抗生素耐药程度不同,大鼠灌胃试验结果提示其安全性较好,其表现的自聚、共聚能力与疏水性以及黏附能力提示其具有一定的益生菌特性。     

TaqMan实时荧光定量PCR检测肠道细菌Akkermansia Muciniphila

目的 建立Akkermansia muciniphila(A.muciniphila)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,实现粪便中A.muciniphila的定量检测。方法 根据GenBank公布的A.muciniphila 16S rRNA基因高保守序列,设计合成特异引物和TaqMan探针,构建重组质粒作为标准品,通过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,同时将建立的方法用于10份成年人粪便标本的检测。结果 TaqMan实时荧光定量PCR检测A.muciniphila,仅需1.5h,该方法线性好,相关系数R²=0.9991,扩增效率E=94.7%;重复性好,组内和组间变异系数均小于3%;灵敏度可达到5×10³拷贝/μl;特异性良好。10份成年人粪便标本共检出9份为阳性,阳性粪便标本中A.muciniphila平均含量为2.70×108cells/g粪便。结论 本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR能够快速、灵敏、特异地定量检测粪便标本中A.muciniphila。