日本血吸虫22.6kDa膜相关蛋白Th1型表位的免疫学鉴定

目的鉴定日本血吸虫22.6 kDa膜蛋白（Sj22.6）的Th1型表位,为构建短肽疫苗奠定基础。方法采用合成肽Sj22.6-P4、无关肽（对照）及PBS免疫C57BL/6小鼠2次（间隔7 d）,末次免疫后7～10 d取脾分离单个核细胞,用合成肽Sj22.6-P4、无关肽及PBS刺激培养,3H-TdR掺入法检测淋巴细胞的增殖效果,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其细胞培养上清中IFNγ-、IL-4及IL-2水平。运用流式细胞技术三色标记法检测经合成肽Sj22.6-P4、无关肽及PBS免疫2次的C57BL/6小鼠脾淋巴细胞内的Th1、Th2细胞因子。结果合成肽Sj22.6-P4可刺激经该抗原肽免疫2次的C57BL/6小鼠淋巴细胞增殖,与PBS组相比,增殖指数（SI）均〉2。与无关肽对照组相比,细胞培养上清中IL-2、IFN-γ分泌水平增高,其中IL-2分泌水平差异有统计学意义（P〈0.05）,IFN-γ差异无统计学意义（P〉0.05）,而IL-4分泌水平明显降低（P〈0.05）。合成肽Sj22.6-P4免疫组小鼠脾脏CD4＋T细胞中分泌IFN-γ细胞的百分比显著增高,分泌IL-4细胞的百分比显著降低（P均〈0.05）。结论合成肽Sj22.6-P4是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。     

日本血吸虫副肌球蛋白合成肽的免疫学鉴定

目的 鉴定日本血吸虫副肌球蛋白合成肽Sj97-P22。 方法 27只雌性C57BL/6小鼠随机均分为合成肽Sj97-P22免疫组、无关肽免疫组和PBS免疫组,分别于尾基部皮下注射与完全福氏佐剂等体积充分混匀的合成肽Sj97-P22（100 μg）乳化物、无关肽（100 μg）乳化物和PBS乳化物,抗原免疫剂量为100 μg/（只·次）,共免疫2次,间隔1周。于免疫后7~10 d分离各组小鼠脾单个核细胞,运用流式细胞技术三色标记法检测其CD4^＋ T细胞胞内因子干扰素γ（IFN-γ）和白介素4（IL-4）。将Sj97-P22免疫小鼠或PBS免疫小鼠的脾单个核细胞分别与Sj97-P22、无关肽或PBS共培养,采用3H-TdR掺入法观察细胞增殖效果,并用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2、IFN-γ和IL-4的浓度。 结果 Sj97-P22免疫组小鼠脾脏CD4⁺ T细胞中胞内分泌IFN-γ的细胞百分率为（8.05±0.54）%,显著高于无关肽免疫组[（4.74±1.04）%]和PBS免疫组[（6.51±0.49）%] （P＜0.05）;而分泌IL-4的细胞百分率[（0.60±0.11）%]显著低于PBS免疫组[（1.31±0.27）%]（P＜0.05）,与无关肽免疫组[（0.84±0.08）%]间的差异则无统计学意义（P＞0.05）。Sj97-P22可明显刺激Sj97-P22免疫小鼠脾单个核细胞增殖,增殖指数达到3.12±1.59,细胞培养上清中IL-2和IFN-γ浓度分别为（9.13±1.54）和（39.75±9.69）pg/ml,与无关肽和PBS刺激相比显著升高（P＜0.05）,而IL-4浓度在3个刺激物间的差异无统计学意义（P＞0.05）。Sj97-P22不能刺激PBS免疫鼠脾单个核细胞增殖及培养上清中IL-2、IFN-γ及IL-4浓度变化。 结论 Sj97-P22可能是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。     

蕲蛇蛇毒对胶原诱导性关节炎大鼠血管生成的影响

目的： 研究蕲蛇蛇毒对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠血管生成的影响及其机制。 方法： 采用牛Ⅱ型胶原（1 g·L^-1）诱导大鼠CIA模型。建模21 d后,实验分正常组、模型组、美洛昔康组（0.72 mg·kg^-1, ig）、蕲蛇蛇毒低、中、高剂量组（0.1, 0.33, 1 mg·kg^-1, ip）,每天1次,连续治疗21 d。采用HE染色对大鼠踝关节滑膜组织进行病理学评分,免疫组化法检测滑膜微血管密度和血管内皮细胞生长因子（VEGF）的蛋白表达,ELISA法检测血清中血管生成素1（Ang-1）的含量。 结果： 与正常组比较,模型组大鼠踝关节滑膜病理评分和微血管密度显著增加（P<0.01）,滑膜组织VEGF表达量及血清Ang-1含量亦显著增加（P<0.01）;与模型组比较,蕲蛇蛇毒中、高剂量能显著降低大鼠踝关节滑膜的病理评分（P<0.05,P<0.01）,蕲蛇蛇毒高剂量能明显降低滑膜微血管密度、VEGF表达和血清Ang-1含量（P<0.05或P<0.01）。 结论： 蛇毒能减轻CIA大鼠的关节病理损伤和血管新生,其机制可能与降低VEGF表达和减少Ang-1含量有关。     

白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞周期影响及其机制研究

目的:研究白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞的抗肿瘤作用,并探讨其分子机制.方法:用MTT法检测白藜芦醇对鼠纤维肉瘤细胞系S180增殖的影响;PI单标流式细胞术检测白藜芦醇对S180细胞周期分布的影响;Western blot方法检测白藜芦醇对S180细胞 cyclinD1,P21Cip1蛋白表达的影响.结果:白藜芦醇对S180细胞增殖呈双相作用:低浓度促进细胞增殖;高浓度抑制细胞增殖,其抑制作用呈时效和量效关系.白藜芦醇治疗组S180细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于 G0/G1期.白藜芦醇以时间依赖方式下调周期蛋白 cyclinD1 的表达.上调白藜芦醇P21Cip1蛋白表达.结论:白藜芦醇低浓度促进S180细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖.白藜芦醇可通过凋节细胞周期蛋白 cyclinD1,p21Cip1的表达调控细胞周期进程,抑制细胞增殖.     

脱氢表雄酮对细胞免疫调节作用的研究进展

脱氢表雄酮及其硫化物作为性激素的前体,有着众多免疫学效应。近年来,越来越多的研究致力探讨脱氢表雄酮及其硫化物在免疫系统中的生理学作用,并进一步研究其效应的分子机制。相比于体液免疫应答,脱氢表雄酮及其硫化物对细胞免疫应答的调节作用更为关键。因此,本文重点综述脱氢表雄酮及其硫化物对细胞免疫调节作用的研究进展。     

正交试验设计优选杜虹花止血有效成分毛蕊花糖苷的提取工艺研究

目的:筛选杜虹花毛蕊花糖苷成分的最佳提取工艺条件。方法:采用正交试验设计,以乙醇浓度、料液比、提取次数和提取时间为考察因素,以毛蕊花糖苷含量为评价指标,确定其最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺为:加60%乙醇,液料比为1∶25,加热回流提取1次,每次1 h,毛蕊花糖苷含量≥7.05 mg/g。结论:该工艺操作简便,稳定可行,重复性好,可为杜虹花止血有效成分毛蕊花糖苷的提取和开发提供参考。     

肝星状细胞活化的炎性调控机制及中药抗纤维化研究进展

肝纤维化是细胞外基质的过度沉积为主要特征的损伤后修复反应,包括炎症及其后的纤维生成。肝星状细胞（HSC）的激活是肝纤维化发生的中心环节,而肝脏中多种炎性细胞与炎症相关因子是调节HSC激活及其后的纤维化发生发展的关键因素,涉及的分子机制亦十分复杂。中医药抗纤维化的研究从20世纪70年代中期开始,随着细胞生物学与分子生物学技术的应用,中医药抗纤维化机制的阐明也越来越深入。     

沈敏鹤治疗卵巢癌经验

沈敏鹤认为卵巢癌主要病位在肝、脾、肾三脏,辨证要点在于气虚寒凝血瘀,临床可将其分为湿热郁毒、气滞血瘀、痰湿凝聚、气血亏虚4型,采用复方茯苓丸加减治疗,每获良效.     

姜黄素通过AKT/HIF-1α/VEGF信号通路在体外抑制脉络膜新生血管的机制

目的：探讨姜黄素在体外抑制脉络膜新生血管(CNV)生成的作用及机制。

方法：氯化钴(CoCl₂)诱导人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞建立化学性缺氧模型,采用CCK-8法检测姜黄素对CoCl₂诱导的ARPE-19细胞活性的影响,采用RT-qPCR和Western blot检测姜黄素对CoCl₂诱导的ARPE-19缺氧模型细胞内AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达的影响。采用细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验、Transwell小室侵袭实验及Matrigel基质胶管腔形成实验,观察在非接触情况下ARPE-19细胞姜黄素的条件培养液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、侵袭和管腔形成的影响。

结果：100μmol/L CoCl₂可成功建立ARPE-19细胞化学缺氧模型。CoCl₂在100μmol/L浓度下促进ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达。姜黄素在浓度为100μmol/L时可减少ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达。ARPE-19细胞姜黄素低(6.25μmol/L)、中(25μmol/L)、高剂量组(100μmol/L)条件培养液可显著抑制HUVEC细胞水平迁移; 其中高剂量组条件培养液可显著抑制HUVEC细胞垂直迁移和细胞侵袭。ARPE-19细胞姜黄素中、高剂量组条件培养液可抑制HUVEC细胞管腔形成。

结论：姜黄素在100μmol/L对CoCl₂诱导ARPE-19细胞缺氧有保护作用。姜黄素可在细胞水平抑制血管的生成。     

姜黄素抑制BN大鼠脉络膜新生血管的机制研究

目的：探讨姜黄素抑制BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)的机制。

方法：激光光凝诱导BN大鼠36只建立CNV模型,随机分为6组,每组6只。正常组BN大鼠正常饲养,不做干预; 实验组BN大鼠行532nm倍频激光光凝后,根据不同分组分别干预14d：模型组：生理盐水灌胃14d; 雷珠单抗组：光凝后第2d玻璃体腔注射雷珠单抗注射液(10mg/mL,0.2mL/支)1次5μL。姜黄素组：低\〖100mg/(kg·d)\〗、中\〖200mg/(kg·d)\〗、高\〖400mg/(kg·d)\〗剂量的姜黄素混悬液分别灌胃14d。光凝14d后进行眼底照相、FFA与ICGA检查。制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察不同组CNV中央厚度。制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学法观察不同组CNV眼组织中AKT/p-AKT/ HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的表达情况。采用RT-qPCR法检测CNV眼组织中AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子mRNA的相对表达量。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的相对表达量。

结果：模型组,雷珠单抗组,姜黄素低、中、高剂量组CNV生成率分别为78.18%、73.21%、77.19%、75.86%、74.55%,均大于70%; 荧光素渗漏平均光密度值分别为182.12±6.59、119.22±8.03、166.45±8.33、164.34±5.69、149.22±6.45; 雷珠单抗组较模型组显著降低(P<0.05); 姜黄素低、中、高剂量组较雷珠单抗组显著升高(P<0.05),其中姜黄素高剂量组较模型组显著降低(P<0.05)。HE染色结果显示：正常组BN大鼠视网膜组织各层结构清晰、排列整齐。光凝后14d,雷珠单抗组CNV中央厚度较模型组显著减少(P<0.05); 姜黄素高剂量组较模型组显著减少(P<0.05),较雷珠单抗组显著增加(P<0.05)。免疫组化结果显示：正常组BN大鼠视网膜组织结构中AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子表达呈阴性,未见棕黄色反应物。光凝后14d,模型组AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达高于正常组(P<0.05); 雷珠单抗组低于模型组(P<0.05); 姜黄素高剂量组的表达较模型组显著降低(P<0.05),较雷珠单抗组显著增加(P<0.05)。mRNA结果显示：光凝后14d,模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组(P<0.05); 雷珠单抗组均低于模型组(P<0.05); 姜黄素高剂量组较模型组显著降低(P<0.05),较雷珠单抗组显著增加(P<0.05)。Western blot结果显示：光凝后14d,AKT蛋白各实验组间比较差异无统计学意义。p-AKT蛋白相对表达量模型组较正常组显著增加(P<0.05); 雷珠单抗组较模型组显著降低(P<0.05); 姜黄素高剂量组较模型组显著降低(P<0.05)。HIF-1α和VEGF蛋白相对表达量模型组较正常组显著增加(P<0.05),雷珠单抗组较模型组显著降低(P<0.05),HIF-1α蛋白相对表达量姜黄素高剂量组较模型组显著降低(P<0.05),较雷珠单抗组显著增加(P<0.05)。VEGF蛋白相对表达量姜黄素中、高剂量组较模型组显著降低(P<0.05)。

结论：400mg/(kg·d)的姜黄素具有抑制BN大鼠实验性CNV的作用。姜黄素抑制BN大鼠实验性CNV的机制可能与降低AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路的活性密切相关。