日本血吸虫副肌球蛋白合成肽的免疫学鉴定

目的 鉴定日本血吸虫副肌球蛋白合成肽Sj97-P22。 方法 27只雌性C57BL/6小鼠随机均分为合成肽Sj97-P22免疫组、无关肽免疫组和PBS免疫组,分别于尾基部皮下注射与完全福氏佐剂等体积充分混匀的合成肽Sj97-P22（100 μg）乳化物、无关肽（100 μg）乳化物和PBS乳化物,抗原免疫剂量为100 μg/（只·次）,共免疫2次,间隔1周。于免疫后7~10 d分离各组小鼠脾单个核细胞,运用流式细胞技术三色标记法检测其CD4^＋ T细胞胞内因子干扰素γ（IFN-γ）和白介素4（IL-4）。将Sj97-P22免疫小鼠或PBS免疫小鼠的脾单个核细胞分别与Sj97-P22、无关肽或PBS共培养,采用3H-TdR掺入法观察细胞增殖效果,并用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2、IFN-γ和IL-4的浓度。 结果 Sj97-P22免疫组小鼠脾脏CD4⁺ T细胞中胞内分泌IFN-γ的细胞百分率为（8.05±0.54）%,显著高于无关肽免疫组[（4.74±1.04）%]和PBS免疫组[（6.51±0.49）%] （P＜0.05）;而分泌IL-4的细胞百分率[（0.60±0.11）%]显著低于PBS免疫组[（1.31±0.27）%]（P＜0.05）,与无关肽免疫组[（0.84±0.08）%]间的差异则无统计学意义（P＞0.05）。Sj97-P22可明显刺激Sj97-P22免疫小鼠脾单个核细胞增殖,增殖指数达到3.12±1.59,细胞培养上清中IL-2和IFN-γ浓度分别为（9.13±1.54）和（39.75±9.69）pg/ml,与无关肽和PBS刺激相比显著升高（P＜0.05）,而IL-4浓度在3个刺激物间的差异无统计学意义（P＞0.05）。Sj97-P22不能刺激PBS免疫鼠脾单个核细胞增殖及培养上清中IL-2、IFN-γ及IL-4浓度变化。 结论 Sj97-P22可能是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。     

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶Th1型表位的免疫学鉴定

目的筛选和鉴定日本血吸虫磷酸丙糖异构酶（SjTPI）的Th1型细胞表位,为构建短肽疫苗奠定基础。方法用BLAST比对并预测SjTPI的T细胞表位SjTPI-P18及其对照表位SjTPI-P9。设计并合成其编码DNA,重组入原核表达载体pET-32c（＋）后进行表达,获得纯化的重组融合蛋白rSjTPI-P18和rSjTPI-P9。用rSjTPI、rSjTPI-P18及rSjT-PI-P9刺激经照射致弱尾蚴免疫、rSjTPI加强免疫的C57BL/6和C3H/HeJ小鼠淋巴细胞,^3H-TdR掺入法检测淋巴细胞的增殖效果及细胞培养上清中IL-2水平;分别用重组rSjTPI-P18和合成SjTPI-P18刺激rSjTPI-P18、SjTPI-P18或PBS加弗氏佐剂两次免疫的C57BL/6小鼠淋巴细胞,并检测其细胞培养上清中IFN-γ及IL-4水平。结果参照曼氏血吸虫TPI T细胞表位预测的SjTPI-P18及SjTPI-P9,获得了与Trx融合表达的重组肽rSjTPI-P18及rSjTPI-P9。与rSjTPI-P9相比,rSjTPI及rSjTPI-P18均可刺激辐照致弱尾蚴免疫、rSjTPI加强免疫的C57BL/6或C3H/HeJ小鼠的淋巴细胞增殖且IL-2分泌量增加（P均〈0.05）;SjTPI-P18及rSjTPI-P18刺激经rSjTPI-P18或SjTPI-P18免疫两次的C57BL/6小鼠淋巴细胞分泌IFN-γ水平升高（P均〈0.05）,而IL-4水平较低。结论筛选和鉴定出的SjTPI-P18是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。     

系统性红斑狼疮患者血清IFN-γ／IL4分泌模式的探讨

目的观察在系统性红斑狼疮（SLE）免疫紊乱过程中患者血清IFN-γ/IL4分泌模式的变化。方法采用ELISA双抗夹心法检测36例SLE患者和32例健康人血清中IL-4和IFN-γ的水平,并结合补体C3检测结果进行分析。结果SLE病人血清IFN-γ和IL-4水平显著升高（P均〈0．01）,其IFN-γ／IL-4值呈两极化分布特点,以0．76为界,分为高值组（n=19,1．93±1．14）和低值组（n=17,0．53±0．09）（两组间比较,P〈0．01）;与正常对照组比较,低值组该比值显著降低（P〈0．01）,IL-4显著升高（P〈0．01）,高值组该比值和IFN-γ显著升高（P均〈0．01）;SLE患者病情活动期血清补体C3含量显著低于非活动期（P〈0．01）,IL-4、IFN-γ和IFN-γI/L-4在活动期与非活动期患者之间比较无显著性差异。结论SLE患者Th1／Th2细胞因子分泌模式复杂,不同患者可能分别表现为Th1或Th2优势,而与疾病的活动性无关。     

日本血吸虫表位肽-DNA颗粒性疫苗对小鼠免疫应答的影响

采用已构建的日本血吸虫Sj22.6抗原CTL、Th和B细胞表位肽-DNA颗粒性疫苗(PDDV)及其混合疫苗免疫C57BL/6小鼠。36只小鼠随机均分6组,即18K对照组([K]_(18)-空质粒PDDV)、PBS对照组、C组(C-PDDV)、T组(TPDDV)、B组(B-PDDV)和C-T-B组(C-PDDV、T-PDDV和B-PDDV等量混合),每鼠分别在第0、3和6周麻醉下经尾脊部皮下注射100μl PDDV(含10μg DNA和28μg肽),对照组注射等量的空质粒DNA和[K]_(18)肽或PBS。末次免疫后7d,脱颈处死,制备脾细胞悬液,经日本血吸虫成虫抗原(SWA)刺激后根据~3H标记的胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)检测脾细胞增殖反应,ELISA法检测脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的含量。ELISA结果显示,T组小鼠脾细胞中IFN-γ的含量[(76.0±11.2)pg/m1],高于PBS[(13.0±2.1)pg/ml]和18K对照组[(14.0±3.2)pg/ml](P<0.01),T组和C-T-B组小鼠脾细胞中IL-4的水平分别为(152.0±21.1)和(8...     

甲泼尼龙治疗难治性强直性脊柱炎对Th1／Th2细胞及其细胞因子的影响

目的探讨甲泼尼龙对难治性强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）患者外周血T辅助（Thelper,Th）细胞活化状态及其细胞因子分泌的影响。方法用三色流式细胞分析法对AS患者治疗前后和正常对照组外周血淋巴细胞胞内细胞因子（IFN-γ、TNF-α及IL-4）和Th1、Th2细胞进行分析,同时采用夹心酶联免疫吸附法测定血清IFN-γ、TNF-α及IL-4水平,分析其与临床疗效指标的相关性。结果难治性AS患者外周血Th1细胞百分率及血清IFN-γ,TNF-α水平高于正常对照组（P〈0．05）,与BASDAI、BASFI、BASMI评分、夜间痛、血沉和C反应蛋白呈正相关（P〈0．05）;Th2细胞百分率及血清IL-4低于正常对照组（P〉0．05）,与以上疗效评价指标呈负相关（P〈0．05）。甲泼尼龙治疗后Th1细胞百分率及血清IFN-γ、TNF-α水平较治疗前明显降低,Th2细胞百分率和血清IL-4较治疗前升高。结论难治性AS患者外周血淋巴细胞存在Th1和Th2细胞平衡偏移,Th1细胞占优势。甲泼尼龙治疗可下调Th1细胞功能,抑制促炎因子IFN-γ、TNF-α分泌,并能显著改善AS患者的关节症状和疾病活动性。     

金匮肾气丸对“劳倦过度、房事不节”肾阳虚小鼠Th1/Th2免疫调节作用的研究

目的探讨金匮肾气丸对“劳倦过度、房事不节”诱发的肾阳虚模型小鼠Th1/Th2型细胞因子的免疫调节作用。方法将30只健康雄性小鼠随机分为对照组、劳倦过度＋房事不节（模型组）和金匮肾气丸治疗组各10只。用强迫雄性小鼠游泳造成劳倦过度;以Colldege效应使小鼠频繁交配以诱导房事不节,建立肾阳虚小鼠模型,并用全匮肾气丸进行治疗,观察各组小鼠胸腺指数和脾指数,测定IFN-γ、IL-4等变化。结果与对照组比较,模型组IFN-γ和IFN-γ/IL-4显著下降,IL-4明显升高（P〈0.01或〈0.05）。治疗组IFN-γ及IFN-γ/IL-4升高（P〈0.05）。结论金匮肾气丸可诱导IFN-γ,调节Th1/Th2细胞平衡,增强机体免疫应答,有效控制肾阳虚发展。     

人胰岛素原DNA疫苗预防非肥胖糖尿病鼠胰岛β细胞凋亡的机制探讨

目的探讨人胰岛素原DNA疫苗预防非肥胖糖尿病（NOD）小鼠胰岛β细胞凋亡的机制。方法（1）4周龄NOD雌鼠随机分为磷酸盐缓冲液（PBS）、质粒载体PcDNA3．1（PcDNA）、胰岛素原（Pins）3组，由胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3．1、人胰岛素原DNA疫苗50pg，1周后重复1次。（2）各组取12周龄未发病的NOD鼠10只，分离胰腺，HE染色观察胰岛炎；TUNEL＋SABC法检测胰岛β细胞凋亡；取脾制成细胞悬液培养72h，ELISA法测定血清白介素4（IL-4）和γ干扰素（IFN-γ）水平；MTT法检测脾细胞增殖反应。结果（1）12周龄时Pins组正常胰岛比例高于PBS组和PcDNA组（均P〈0．01），胰岛周围炎比例低于PcDNA组（P=0．02），胰岛内炎比例则低于PBS组（P〈0．01）和PcDNA组（P=0．006）；（2）Pins组胰岛β细胞凋亡率低于PBS组和PcD—NA组（均P〈0．01）；（3）PIns组血清IL-4／IFN-γ比值显著高于PBS组（P=0．014）和PcDNA组（P=0．036）；（4）PIns组脾细胞对人胰岛素增殖反应的刺激指数（SI）低于PcDNA组（P=0．021）。结论人胰岛素原DNA疫苗通过上调IL-4／IFN-γ比值，使免疫平衡向Th2偏移，致NOD鼠胰岛炎减轻，胰岛β细胞凋亡减少。     

乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞内IL-2、IL-4和IFN-γ检测及意义

目的研究辅助性T淋巴细胞Th1/Th2细胞与乙型肝炎病毒（HBV）感染状态的关系。方法 25例慢性乙型肝炎患者（CHB组）、5例健康志愿者（健康对照组）、5例HBV感染后自然痊愈者（既往感染组）及5例CHB抗病毒治疗后完全应答者（完全应答组）的外周血单个核细胞（PBMC）经PMA诱导后,用流式细胞术检测其Th1和Th2细胞分泌IL-2、IL-4和IFN-γ的水平。结果慢性乙型肝炎患者Th1细胞分泌的细胞因子IFN-γ（0.1602±0.0657）、IL-2（0.1616±0.0639）,明显低于健康对照IFN-γ（0.4680±0.0377）、IL-2（0.5000±0.0625）和既往感染者IFN-γ（0.336±0.2908）、IL-2（0.256±0.17799）（P〈0.001）。CHB抗病毒治疗完全应答患者Th1细胞分泌的细胞因子IFN-γ（0.1620±0.0396）、IL-2（0.1940±0.0416）,亦明显低于健康对照（P〈0.001）,Th2细胞分泌的细胞因子IL-4（0.5096±0.1329）,明显高于健康对照IL-4（0.2820±0.0622）（P〈0.001）。既往感染者Th1细胞分泌的细胞因子IFN-γ（0.336±0.29082）、IL-2（0.256±0.17799）低于健康对照（P〈0.001）,Th2细胞分泌的细胞因子IL-4（1.29±0.16778）明显高于健康对照组、CHB患者组和HBV感染完全应答患者组（0.2820±0.0622、0.5096±0.1329、0.5740±0.06693）（P〈0.001）。结论 Th1/Th2细胞的功能与HBV感染的发展过程相关。     

华支睾吸虫成虫抗原和排泄分泌产物对T细胞的作用研究

目的观察华支睾吸虫成虫抗原(Crude antigen,CA)、排泄/分泌产物(excretory-secretory products,ESPs)对T细胞的作用。方法体外分离小鼠骨髓细胞诱导分化为未成熟骨髓树突状细胞(immature DC,iDC);磁珠分选仪分选小鼠脾脏细胞的初始CD4+T细胞;流式细胞术检测DC、CD4+T细胞的纯度;抗原刺激DC细胞,实验分为PBS阴性对照组,LPS阳性对照组,CA和ESPs刺激组;负载抗原后的DC细胞与分选的CD4+T细胞共培养72h;Real time-PCR检测T-bet、GATA3mRNA的相对表达量;ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-4细胞因子的表达量。结果与PBS组相比,ESPs刺激组Tbet、GATA3mRNA表达水平升高(P0.05),而CA刺激组T-bet、GATA3 mRNA表达水平差异不显著;与PBS组相比,ESPs刺激组细胞因子IFN-γ、IL-4的含量均升高(P0.05),CA刺激组仅IFN-γ的分泌增高(P0.05),IL-4无明显变化。结论 CA可能诱导宿主产生Th1型免疫应答,ESPs可能诱导宿主产生Th1型、Th2型免疫应答。     

Th17细胞与肝脏及相关疾病的研究进展

人体免疫类型包括特异性（获得性）免疫和非特异性（固有）免疫,其中特异性免疫主要由T淋巴细胞和B淋巴细胞参与。辅助性T细胞（Th细胞）由CD4＋T细胞分化成熟而来,在机体细胞免疫及体液免疫中发挥重要作用。1986年Mosmann等,将Th细胞根据其分泌的细胞因子以及在机体免疫中的不同作用,把Th细胞分为Th1和Th2细胞亚群［1］。在IFN-γ及IL-12的协同作用下,CD4＋T细胞分化成熟为Th1细胞,并分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）、白介素（IL-2）等,在抗细胞内感染和细胞免疫反应中起到重要的作用。     

IL-17对日本血吸虫感染抗体及Th应答的影响

目的观察IL-17在日本血吸虫感染小鼠中对抗体及Th细胞免疫应答的影响。方法在小鼠日本血吸虫感染前后,连续多次腹腔注射rm-IL-17细胞因子（实验组1）或PBS（对照组1）,连续多次腹腔注射anti-IL-17中和抗体（实验组2）或同型抗体（对照组2）。运用流式细胞术,采用表面分子、胞内因子同时染色的三色标记法,对日本血吸虫感染小鼠脾脏、淋巴结中的Th17、Th1和Th2细胞亚群占CD4＋T细胞的比例进行观察;同时采用ELISA法检测各组小鼠血清中血吸虫抗原特异性总IgG及亚类IgG1和IgG2a的水平。结果实验组1 CD4＋T细胞中的Th17、Th1和Th2细胞亚群的比例分别是对照组1的1.09倍（P（0.05）、1.17倍（P（0.05）和1.15倍（P（0.05）;实验组2 CD4＋T细胞中的Th17、Th1和Th2细胞亚群的比例分别是对照组2的1.01倍（P（0.05）、1.11倍（P（0.05）和0.98倍（P（0.05）。rm-IL-17注射后仅可溶性虫卵抗原（SEA）特异性IgG1水平显著下降（P（0.05）、可溶性成虫抗原（SWA）特异性IgG2a的水平升高（P（0.05）,其他抗体水平均无...     

重组弓形虫肌动蛋白解聚因子滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及保护作用

目的观察重组弓形虫肌动蛋白解聚因子(Recombinant Toxoplasma gondii actin depolymerizing factor,rTgADF)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫攻击的保护作用。方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为2组,分别用30μg rTgADF(溶于20μl PBS)和20μl PBS于第0、14和21d各滴鼻免疫1次。末次免疫后14d,每组处死小鼠5只,ELISA法测定血清IgA、IgG和IgG1/IgG2a及鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA以及脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平。每组另取5只小鼠,用4×104 RH株弓形虫速殖子/只灌胃攻击(致死性),观察小鼠健康状况并计算存活率。其余小鼠用1×104速殖子/只灌胃攻击(慢性),攻击后30d处死,计数肝、脑组织速殖子。结果 rTgADF诱发小鼠产生较强的系统免疫和黏膜免疫应答,免疫组小鼠血清IgG、IgA和IgG1/IgG2a水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),脾淋巴细胞培养液上清中IFN-γ和IL-2、IL-4水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),IL-10水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。致死性攻击后30d,对照组小鼠全部死亡,免疫组小鼠存活率为20%,差异有统计学意义(P<0.01);慢性感染后30d,免疫组小鼠肝和脑虫荷分别比对照组减少63.87%(P<0.01)和50.14%(P<0.05)。结论 rTgADF滴鼻免疫小鼠诱导产生较强的黏膜及系统免疫应答,并可部分抵抗弓形虫致死性和慢性攻击,可作为弓形虫候选蛋白疫苗。     

Cellular immune responses and cytokine production in BALB/c and C57BL/6 mice during the acute phase of Angiostrongylus costaricensis infection

In our experimental study we were able to show that the contrasting outcome of Angiostrongylus costaricensis infection in C57BL/6 and BALB/c mice, in respect of morbidity and mortality, can be explained by divergent cellular immune responses and a different cytokine pattern in each strain. In BALB/c mice (i.e. those with high mortality), the initial high proliferation of ConA or LPS stimulated spleen cells dropped to very low levels after 2 weeks post-infection (p.i.), whereas in C57BL/6 mice (i.e. those with low mortality), only a minor reduction in lymphoproliferative responses after mitogenic stimulation was observed. The specific proliferation of spleen cells after stimulation with A. costaricensis adult worm antigen remained low in BALB/c mice throughout the experiment, but showed an augmented proliferation in C57BL/6 mice, especially from 2 weeks p.i. onwards. The mitogen-induced production of Th2-type cytokines (IL-4, IL-5, IL-6, IL-10) in spleen cell cultures remained low in BALB/c mice until 4 weeks p.i., but production of Th1-type cytokines (IL-2, IFN-gamma) was highly elevated at 14 and 28 days p.i. In C57BL/6 mice, an upregulated and balanced production of both Th1- and Th2-type cytokines was measured during the course of infection. In summary, a polarization of the immune response towards cellular hyporesponsiveness and a predominantly Th1 cytokine profile was observed in A. costaricensis infected BALB/c mice, which may contribute to pathogenesis and increased morbidity.     

Mice deficient in Th1- and Th2-type cytokines develop distinct forms of hapten-induced colitis

BACKGROUND & AIMS: Most experimental models for inflammatory bowel disease in mice are associated with production of interferon (IFN)-gamma and other proinflammatory cytokines. We hypothesized that T-helper 2 (Th2)-type cells could also contribute to the colitis and cause inflammation different than that mediated by Th1-type cells. METHODS: Trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS)-induced colitis in C57BL/6 background mice genetically deficient in interleukin (IL)-12 p40 (IL-12(-/-)), IFN-gamma (IFN-gamma(-/-)), or IL-4 (IL-4(-/-)) was examined in comparison with control mice (C57BL/6(+/+)). RESULTS: C57BL/6(+/+), IFN-gamma(-/-), and IL-12(-/-) mice developed patterns of colitis characterized by distortion of crypts, loss of goblet cells, and mononuclear cell infiltration with fibrosis of the mucosal layer. IL-4(-/-) mice had greater mortality than other groups because of penetrating ulcers; however, survivors developed milder lesions that were limited to focal acute ulceration. Colonic CD4(+) T cells from normal, IFN-gamma(-/-), or IL-12(-/- )mice produced both IL-4 and IL-5. CONCLUSIONS: In TNBS colitis, Th1-like cytokine responses induce fatal, acute, transmural, and focal types of lesions, whereas Th2-like cytokine responses play a significant role in the diffuse atrophic changes in crypts and the mucosal layer that occur in the late stages of this disease.     

氧化苦参碱对慢性HBV携带者外周血树突状细胞及细胞因子的影响

目的：研究氧化苦参碱对慢性乙型肝炎病毒（ HBV ）携带者外周血树突状细胞及细胞因子的影响。方法：分离60例慢性HBV携带者外周血单核细胞后在诱导培养树突状细胞过程中治疗组加入氧化苦参碱,对照组不加,每组各30例,然后提取两组成熟的树突状细胞,计数后采用双标记流式细胞分析技术检测其活性,再用表位多肽刺激后,和自体淋巴细胞共育,分别检测IL-2和IFN-γ（ Th1分泌）及IL-4和IL-10（ Th2分泌）。结果：治疗组其树突状细胞数目增多,共刺激分子CD1a、 CD80、 CD86明显高于对照组（P＜0.05）。与自体淋巴细胞共育后产生的IL-2、 IFN-γ明显高于对照组（P＜0.05）; IL-4、 IL-10与对照组差异无显著性意义（P＞0.05）。结论：氧化苦参碱可增多、增强HBV携带者外周血树突状细胞的活性,当其与自体淋巴细胞共育时,可增强Th1类细胞因子的表达,对Th2类细胞因子无明显影响。     

肺炎支原体感染小鼠Th1／Th2平衡状况及Tim-3mRNA的表达

目的通过检测Tim-3mRNA的表达水平及IFN-7、IL-4的含量,初步探讨肺炎支原体感染鼠Th1／Th2细胞的动态变化及Tim～3的免疫调控作用。方法通过滴鼻感染建立肺炎支原体肺炎小鼠模型,观察小鼠的一般状况,分别于感染后3d、5d、7d、14d、21d取材,应用RT—PCR方法检测肺组织和脾脏Tim-3mRNA的表达;采用ELISA法检测肺泡灌洗液中细胞因子IFN～γ、IL-4的含量。结果实验组IFN-γ于3d出现升高（t=2．309,P〈0．05）,5dIFNY开始下降,而IL-4于3d开始升高并一直持续到7d（t-6．436,P〈0．05）,之后逐渐恢复正常,肺组织和脾脏Tim-3mRNA的表达均于5d达到峰值（t=4．727,P〈0．05;t=7．962,P〈0．05）,且肺组织和脾脏Tim-3mRNA表达量与L-4呈正相关（r=0．561,P〈0．05;r=0．462,P〈0．05）,从5d开始与IFN-γ呈负相关（r=0．379,P〈0．05;r=0．431,P〈0．05）。结论小鼠感染肺炎支原体后Th1／Th2失衡,以Th2介导的免疫反应为主;Tim3可能参与了感染后对Th1细胞的负调控。     

疥螨虫体蛋白的小鼠免疫效应分析

目的观察疥螨全虫蛋白诱导BALB／c小鼠产生体液及细胞免疫应答水平。方法疥螨全虫蛋白皮下注射免疫BALB／c小鼠（100μg／只）,共疫3次,每次间隔2周,ELISA法检测小鼠的抗体水平、MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖能力,及脾淋巴细胞培养上清分泌细胞因子水平。结果疥螨虫体蛋白能诱导小鼠产生特异性各类抗体（IgG、IgG1、IgG2a、IgE、IgM）;免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖能力及脾细胞培养上清分泌4种细胞因子的水平（IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-5）较PBS组、FCA组高,且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论疥螨全虫蛋白能诱导小鼠产生较高水平的体液和细胞免疫应答,但对于其是否具有抵抗疥螨病的能力仍有待进一步研究。     

结核亚单位疫苗AEC／BC—C02诱导小鼠长期的抗原特异性细胞应答

目的动态评价结核亚单位候选疫苗AEC/BC-C02在小鼠中的细胞免疫应答水平。方法6～8周龄SPF级BALB/c雌鼠48只,按数字表法随机分成两组,一组免疫AEC/BC-C02,另一组免疫PBS。末次免疫后第1、2、4、8周分别取两组小鼠（6只/组）分离脾淋巴细胞,ELISPOT检测分泌抗原特异性IFN-γ的T细胞频率;在第2、4、8周ELISA检测抗原特异性IFN-γ的分泌量;在第4、8周,Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测脾淋巴细胞增殖。结果(1)末次免疫后第1、2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B特异性的IFN-γ斑点形成细胞（spot forming cells,SFC）分别为168.8±103.5、205.2±51.0、206.8±65.3和160.0±67.9,与PBS对照组的8.9±6.0、16.1±18.8、9.3±4.9和7.7±6.6比较,差异均有统计学意义（成组t检验,t值分别为3.779、8.525、7.424、5.473;P值均<0.01）;EC特异性的IFN-γ SFC分别为45.1±18.6、75.6±39.3、86.2±50.4和54.3±26.3,与PBS对照组的4.5±3.5、11.7±10.5、3.8±5.8和5.2±4.3比较,差异均有统计学意义（成组t检验,t值分别为5.258、3.850、3.977、4.521;P值均<0.01）。(2)末次免疫后第2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(1.27±0.13)ng/ml,(1.76±0.55)ng/ml和(1.44±0.44)ng/ml;EC多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(0.81±0.33)ng/ml,(0.81±0.69)ng/ml和(0.54±0.29)ng/ml,两者间差异有统计学意义（配对t检验,分别为：t=3.008,P<0.05;t=2.631,P<0.05;t=10.02,P<0.01）。(3) 末次免疫后第4、8周,Ag85B多肽对疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数（SI）分别为1.756±0.339和1.936±0.287,均分别高于PBS组的1.287±0.0581和1.382±0.114,差异有统计学意义（成组t检验,分别为：t=3.030,P<0.05;t=4.387,P<0.01）;EC多肽对疫苗组SI分别为1.599±0.154和1.581±0.156,均分别高于PBS组的1.380±0.126和1.314±0.170,差异有统计学意义（成组t检验,t值分别为2.540、2.844;P值均<0.05）。结论新型结核亚单位疫苗AEC/BC-C02免疫小鼠可诱导长期稳定存在的抗原特异性记忆T细胞,为后期抗Mtb保护力研究提供药理学基础。