黄河裸裂尻鱼MSTN基因RNA干扰研究

目的 利用反义寡合甘酸技术抑制肌肉生长抑制素（myostatin, MSTN）的表达,评估MSTN基因的沉默效果,并检测RNA干扰后对下游基因的影响。方法 通过构建黄河裸裂尻鱼（Schizopygopsis pylzovi）MSTN基因RNA干扰（RNAi）重组腺病毒载体1P3（DSP MSTN 273+250+1737）和1P2（DSP MSTN 195+1670）,并将其注射黄河裸裂尻鱼肌肉组织,进行活体RNA干扰;利用Real-time PCR和Western-blotting评估MSTN基因的沉默效果,并检测MSTN基因RNA干扰后肌肉肌酸激酶（muscle-type creatine kinase, M-CK）基因转录水平的调控作用。结果 Real-time PCR分析结果表明,与HK组（病毒通用阴性对照组）和N组（空白对照组）相比,重组腺病毒载体1P3对黄河裸裂尻鱼肌肉MSTN基因的转录具有明显的干扰作用（P<0.05）,抑制率达53.5%;而重组腺病毒载体1P2对MSTN基因的转录无明显干扰作用（P>0.05）。Western-blotting分析结果与Real-time PCR结果相一致。同时,经1P3干扰后随着MSTN基因转录水平的下降,其肌肉肌酸激酶M-CK基因表达水平显著上升。结论 通过RNAi技术能够有效的抑制MSTN基因的表达,并能够上调M-CK基因的表达量。因此,证明了在黄河裸裂尻鱼中MSTN能够抑制M-CK的转录。揭示高原土著鱼类MSTN 基因的对肌肉的生长发育起到调控作用。     

黄河裸裂尻鱼肥胖基因克隆及其对青藏高原季节性冷环境的适应性表达

【摘要】 目的 克隆黄河裸裂尻鱼肥胖基因（obese gene, ob），分析编码蛋白leptin的序列特征，检测ob mRNA的组织特异性表达和不同环境温度下肝胰脏和白肌ob mRNA的相对表达水平，为探究黄河裸裂尻鱼在青藏高原季节性寒冷环境下的生态适应机制提供科学数据。方法 利用RT-PCT、5′-RACE和3''-RACE法获得ob基因全长cDNA序列。通过已知cDNA序列设计半定量RT-PCR和Real-time PCR引物，进行表达研究。结果 黄河裸裂尻鱼ob基因序列全长为1337bp，其中开放阅读框（ORF）长513bp，编码170个氨基酸。黄河裸裂尻鱼ob mRNA在心脏、肾脏、脂肪、肠、精巢、肝胰脏、鳃、脑和肌肉9个被检组织中均有表达，其中在心脏中表达最强，肌肉组织中表达最弱。栖息水域环境温度下降，将显著抑制黄河裸裂尻鱼肝胰脏和白肌ob mRNA的表达。结论 黄河裸裂尻鱼ob基因特殊的组织表达特征可能与其特定组织的能量代谢及其特殊的生物学功能有关。Leptin在黄河裸裂尻鱼能量代谢调节和季节性环境适应方面发挥着重要作用。     

黄河裸裂尻鱼肥胖基因克隆及其对青藏高原季节性冷环境的适应性表达

【摘要】 目的 克隆黄河裸裂尻鱼肥胖基因（obese gene, ob），分析编码蛋白leptin的序列特征，检测ob mRNA的组织特异性表达和不同环境温度下肝胰脏和白肌ob mRNA的相对表达水平，为探究黄河裸裂尻鱼在青藏高原季节性寒冷环境下的生态适应机制提供科学数据。方法 利用RT-PCT、5′-RACE和3''-RACE法获得ob基因全长cDNA序列。通过已知cDNA序列设计半定量RT-PCR和Real-time PCR引物，进行表达研究。结果 黄河裸裂尻鱼ob基因序列全长为1337bp，其中开放阅读框（ORF）长513bp，编码170个氨基酸。黄河裸裂尻鱼ob mRNA在心脏、肾脏、脂肪、肠、精巢、肝胰脏、鳃、脑和肌肉9个被检组织中均有表达，其中在心脏中表达最强，肌肉组织中表达最弱。栖息水域环境温度下降，将显著抑制黄河裸裂尻鱼肝胰脏和白肌ob mRNA的表达。结论 黄河裸裂尻鱼ob基因特殊的组织表达特征可能与其特定组织的能量代谢及其特殊的生物学功能有关。Leptin在黄河裸裂尻鱼能量代谢调节和季节性环境适应方面发挥着重要作用。