补阳还五汤对多因素诱导急性血瘀证模型大鼠血小板功能及相关炎性因子的影响

目的 探究补阳还五汤对急性血瘀证模型大鼠的血小板功能及炎性因子的影响。方法 运用冰水浴复合注射肾上腺素的方法建立SD大鼠急性血瘀证模型,大鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、补阳还五汤组（3.2 g·kg^-1）、阿司匹林组（60 mg·kg^-1）。造模同时持续给药7 d,第8天皮下注射盐酸肾上腺素。观察中医证候宏观评价指标舌象、脉象,检测血液流变学、大鼠凝血功能、血小板聚集率等西医凝血系统评价指标,酶联免疫吸附测定法检测血清炎性及黏附因子相关指标［细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）］。结果 与正常组比较,模型组大鼠脉搏幅度显著降低（P<0.01）,补阳还五汤较模型组可显著改善血瘀证大鼠脉象（P<0.01）,模型组舌象呈现紫暗的血瘀证特点,舌底脉络瘀紫,舌面红（R）、绿（G）、蓝（B）值较正常组显著降低（P<0.01）;与模型组比较,补阳还五汤可显著改善血瘀证大鼠舌象R、G、B值（P<0.01）;与正常组比较,模型组血液黏度在高、中、低切剪应力下及血浆黏度检测值均明显升高（P<0.05,P<0.01）,与模型组比较,补阳还五汤可以明显改善高、中、低切剪应力下的全血黏度及血浆黏度（P<0.05,P<0.01）;凝血四项结果显示,模型组较正常组凝血酶原时间（PT）和凝血酶时间（TT）明显缩短（P<0.05,P<0.01）,纤维蛋白原（FIB）含量显著升高（P<0.01）;与模型组比较,补阳还五汤可显著改善血瘀证大鼠TT、FIB指标（P<0.01）;模型组大鼠血小板聚集率（花生四烯酸、二磷酸腺苷诱导）也显著高于正常组大鼠（P<0.01）,与模型组比较,补阳还五汤可显著降低血瘀证大鼠血小板聚集率（P<0.01）;扫描电镜结果显示,与正常组比较,模型组血小板过度活化,伪足伸出明显,血小板之间聚集现象增多;与模型组比较,补阳还五汤组少见血小板活化和聚集现象。与正常组比较,模型组大鼠血清中炎性因子MMP-9和黏附因子ICAM-1含量显著升高（P<0.01）,与模型组比较,补阳还五汤可明显降低血瘀证大鼠血清中MMP-9、ICAM-1含量（P<0.05,P<0.01）。结论 冰水浴复合盐酸肾上腺素诱导的SD大鼠急性血瘀证血小板功能及形态存在明显改变,并存在炎症及细胞黏附功能异常,补阳还五汤治疗大鼠急性血瘀证的机制可能是通过减少炎性及细胞黏附因子过表达,改善血小板形态及功能,进而减少血栓形成,改善血液浓黏凝聚状态。     

基于鹌鹑胚绒毛尿囊膜的血管生成双向干预评价模型的建立

目的以鹌鹑胚绒毛尿囊膜(qCAM)为研究载体,构建一种快速、直观、可量化的血管生成双向干预化合物的筛选及评价模型。方法方法学考察部分通过比较明胶海绵、分子筛、米粒、大孔树脂、硅胶粒、甲基纤维素的结果直观性、稳定性,确定常规给药载体;通过观察开窗实验后qCAM上血管的发育情况,确定给药后孵育时间;通过比较不同批次qCAM上微血管(三级+四级)的发育情况,考察模型的持续稳定性。模型的可靠性实验选择课题组前期活性可靠的化合物薯蓣皂苷元-氨基酸拼合物(DG-15)、白桦脂酸-川芎嗪-氨基酸拼合物(BA-12)作为模式药,分析不同剂量试药对qCAM血管宏观形态、血管计数的影响,评价模型的可靠性。结果方法学考察结果表明,明胶海绵既可以对给药准确定量、准确找出给药点,又可以排除载体自身对受试药物及qCAM的影响,作为本模型的给药载体;开窗实验后第2天,qCAM开始逐渐向胚胎下沉给胚胎供给营养,影响取材完整性,因此选择开窗实验后36 h作为本模型的给药时间;不同月份鹌鹑胚绒毛尿囊膜上微血管(三级+四级)计数比较结果显示,qCAM上血管发育情况基本保持稳定。模型的可靠性实验结果显示,本模型能初步评价DG-15(20μg)的促进血管生成活性(P0.05),以及BA-12(20μg)的抑制血管生成活性(P0.05)。结论本文建立的方法能够相对可靠地评价药物对血管生成的双向干预作用,为血管生成活性化合物的研发创制提供筛选方法与参考依据。     

基于蛋白质组学探讨注射用丹参多酚酸盐对心梗超急性期保护机制研究

心梗超急性期是指心梗发生后30 min内,症状不明显、诊断困难的一段时间,相关病理生理机制研究关注较少。本研究基于蛋白质组学探讨心梗超急性期蛋白质组改变并针对热休克蛋白B6 (heat shock protein B6HSPB6)探讨注射用丹参多酚酸盐的干预作用与相关机制,为心梗超急性期病理机制及注射用丹参多酚酸盐的临床合理用药提供实验依据。采用基于质谱的非标记蛋白质组学对比评价大鼠心梗模型造模前后蛋白表达变化后,使用生物信息学方法分析共有表达蛋白及相关通路。接着运用分子对接技术评价注射用丹参多酚酸盐对共有差异蛋白HSPB6的结合作用,最后通过动物实验进行验证。本实验动物福利和实验过程均遵循中国中医科学院西苑医院实验动物伦理委员会的规定。本实验结果表明,非标记蛋白质组学结果共定量获得2 166个蛋白质,其中有194个共有差异蛋白参与心梗超急性期心肌损伤和机体调节,主要涉及蛋白质同源二聚活性、氧气结合与运输、丝氨酸型内肽酶抑制剂活性等分子功能。其中,HSPB6蛋白参与心肌功能的调节作用。分子对接结果表明,注射用丹参多酚酸盐主成分丹参乙酸镁与HSPB6蛋白具有最低的结合能:-14.53 k...     

清霾饮对北京地区PM2.5致肺损伤小鼠的免疫调节作用研究

目的:探讨清霾饮对北京地区PM2.5大气暴露下小鼠的免疫调节作用。方法:采用鼻滴入PM2.5溶液的方法建立模型,将ICR小鼠随机分为生理盐水组、模型组、利巴韦林组、清肺化痰丸组、清霾饮中、高剂量组、清霾饮预防组。观察各组小鼠肺组织病理变化并运用双抗夹心酶联免疫吸附法比较TNF-α、IL-2、SIL-2R变化。结果:模型组小鼠肺匀浆中TNF-α水平和SIL-2R水平低于生理盐水组,IL-2水平高于生理盐水组,差异均有统计学意义(P0.01)。清霾饮中、高剂量组小鼠肺匀浆中TNF-α水平和SIL-2R水平均高于模型组,IL-2水平低于模型组,差异均有统计学意义(P0.01)。且各指标随干预剂量的升高其影响幅度增加。结论:清霾饮对PM2.5染毒小鼠具有一定的免疫调节作用。     

冠心病痰瘀互结证小型猪血浆代谢组学研究

目的 基于液相色谱-质谱联用技术对冠心病痰瘀互结证小型猪血浆除磷脂外的代谢物进行代谢组学分析。方法 将小型猪分为对照组和模型组，采用高脂饲料喂养结合冠状动脉内皮损伤法建立冠心病痰瘀互结证小型猪模型。HE和Masson染色观察心肌组织病理变化；血浆样本用96孔SPE板进行除蛋白和去磷脂处理，采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS）对样本进行检测，偏最小二乘判别分析（PLS-DA）进行数据分析，通过HMDB数据库和二级质谱裂解规律比对，对内源性成分进行定性分析，筛选差异代谢物，通过MetaboAnalyst 5.0结合HMDB、KEGG数据库对差异代谢物进行代谢通路分析。结果 HE和Masson染色显示，模型组心肌细胞肥大，部分心肌细胞融合，心肌间质水肿，大量胶原纤维增生；PLS-DA结果显示，模型组和对照组血浆代谢物差异明显，筛选出7a,12a-二羟基-3-氧代-4-胆氨酸、3b,12a-二羟基-5a-胆酸、脱氧胆酸甘氨酸结合物、别石胆酸、十六烷二酸、3-氧代十八烷酸、二十二碳六烯酸、丁烯肉碱、3-羟基-9-十六碳烯酰肉碱、3-羟基十六烷基肉碱、(9E)-10-...     

基于PI3K/Akt/Beclin-1信号通路探析积雪草苷对OGD/R诱导损伤H9C2心肌细胞的影响

观察积雪草苷(asiaticoside,Ass)对氧糖剥夺/再复(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤的H9C2心肌细胞的增殖、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)/Bcl-2同源结构域蛋白(Beclin-1)信号通路的干预作用,探讨其对H9C2心肌细胞的影响。选用H9C2心肌细胞作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)法检测H9C2细胞活性。将H9C2细胞分成对照组、OGD/R组、Ass低浓度组(10μmol·L^-1)、Ass高浓度组(80μmol·L^-1)和Ass高浓度+氯喹组(80μmol·L^-1+50μmol·L^-1)。对照组于正常条件下培养,其余各组在处理后进行氧糖剥夺4 h/再复2 h。酶联免疫吸附法检测细胞上清液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine ki...