温州地区婴幼儿HCMV感染现状的分析及其临床意义

目的探讨婴幼儿人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）的感染状态与其感染标志物的关系及其临床意义。方法收集我院住院婴幼儿（0～3岁）病例,以化学发光法（chemiluminesence immunoassay,CLIA）定量检测其HCMV—IgM以及HCMV—IgG,以实时荧光定量PCR法（Fluorescence Quantitative PCR,FQ—PCR）检测HCMV-IgM阳性者尿液标本中病毒核酸载量,分析婴幼儿HCMV的感染状态及其临床意义。结果在900例患者中,HCMV—IgM阳性病例为161例（17．9％）,即HCMV现症感染率达到17．9％;HCMV—IgG阳性者738例（82％）,即82％的婴幼儿通过胎盘获得HCMV—IgG抗体,其中148例为HCMV—IgM及HCMV—IgG同时阳性（16．4％）,即16．4％的婴幼儿在从母体获得了HCMV—IgG抗体的基础上感染了HCMV;HCMV—IgM及HCMV—IgG均阴性者为73例,即未获得HCMV感染及免疫力的患者占8．1％。在161例现症感染患者中,有59例检测到HCMV的DNA（36．7％）,即约有一半的现症感染患儿出现了病毒活动性感染。结论虽然绝大部分婴幼儿从母体获得了HCMV—IgG抗体,但由于该抗体缺乏中和病毒的作用以及0～3岁婴幼儿免疫系统的不完善,有超过四分之一（17．9％±8．1％）已经感染HCMV或者将受到HCMV感染的威胁,且活动性HCMV感染主要发生在婴儿组（28d～1岁）。该病毒感染是导致婴幼儿肝功能损害的重要病原体之一,因此加强HCMV的防治具有十分重要的意义,尤其是目前出现了对更昔洛韦等抗病毒药物耐受的病毒突变,开发疫苗将是行之有效的手段。     

浙南地区11~14岁儿童血红蛋白参考范围的建立

目的建立浙南地区11~14岁少年儿童血红蛋白参考范围。方法使用Sysmex全自动血液分析仪检测4502例11~14岁健康体检儿童静脉血血红蛋白,根据平均红细胞体积<80fl或者运铁蛋白饱和度<0.15或者红细胞锌原卟啉>4.0μg/g血红蛋白(Hb)剔除可能为铁缺乏症的儿童487名,分性别组统计4015名儿童的血红蛋白参考范围。结果健康男性儿童的血红蛋白均数为137.46g/L,正常参考范围为122.56~152.36g/L;女性儿童的血红蛋白均数为134.81g/L,正常参考范围为122.41~147.31g/L,通过u检验比较,两者之间有显著性差异(P<0.01)。结论调查符合美国第二次全国卫生与营养调查要求,制定与少年儿童生理发育阶段特征符合本地区血红蛋白参考值,得到的参考范围与使用传统手工法测定的参考范围有所不同,尤其是女性儿童血红蛋白参考范围下限有所提高,为本地区少年儿童早期诊断贫血提供重要的实验室依据。     

sag5b:一种用于鉴别弓形虫虫株毒力的新基因(英文)

目的本文作者比较了强毒株(RH)弓形虫与弱毒株(Prugniaud)基因组中一种可能成为基因标志物的基因片断——sag5b的差异。PCR扩增出的sag5b片断依次亚克隆进入T-easy载体以及pET28a表达载体。融合基因经过IPTG诱导表达出目的蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。证明表达出来的重组蛋白与强毒株弓形虫细胞膜上的天然蛋白有相同的免疫反应性。将感染了Prugniaud的小鼠脑组织取出并匀浆,以该脑组织为模板,分别用sag1和sag5b的引物来引发,结果发现sag1可以扩增出来而sag5b的扩增结果是阴性的。该结果提示sag5b可以作为鉴别弓形虫虫株毒力的基因标志。将该毒力相关基因的表达产物免疫小鼠并没有使小鼠获得明显的可以抵抗强毒株攻击的免疫保护性。     

siRNA抑制弓形虫次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的表达

目的探讨小干扰RNA(siRNA)在弓形虫体内的对目的基因的表达调节作用。方法以弓形虫嘌呤代谢过程中的关键酶——次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)编码基因为靶标,合成3对siRNA,以电穿孔的方式将不同的浓度的siRNA转染弓形虫。采用荧光定量PCR及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别检测弓形虫HXGPRT mRNA及酶合成量。结果在针对HXGPRT编码基因设计的3对21nt的siRNA中,有1对(siRNA415)能明显降低HXGPRT mRNA水平及酶合成量。在转染后24h,4μmol/LsiRNA415电转弓形虫的HXGPRT mRNA水平及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别降为模拟电转弓形虫的0.36±0.04及0.51±0.03倍(P<0.05)。结论21nt的siRNA在弓形虫体内能有效抑制目的基因的表达。siRNA在弓形虫体内的应用将为阐明未知基因的功能和抗弓形虫药物的筛选提供有力的工具。     

美国《Emerging infectious diseases》2006年第10期有关人兽共患病论文摘译

P1486H5N1型禽流感病毒在北美出现并蔓延//RappoleJH,Hub偄lek Z在2005年和2006年初,高致病性禽流感病毒H5N1型在禽类宿主的种类和地理分布上都有明显的蔓延趋势。H5N1型禽流感可感染家禽和野禽,但其致命性只限于几种候鸟宿主。但由于近年来高致病性禽流感病毒H5N1型在欧亚大陆蔓延并进入欧洲和非洲,这种情况发生了改变。通过鸟类的迁徙和人口流动可将H5N1型禽流感病毒传播至西半球。这种两半球间的传播似乎并不像是通过野禽和候鸟的迁徙,而更有可能是通过进口家禽和宠物鸟。如果病毒发生变异后可以在人群中快速传播,那么由于宿主种…     

重组抗原联合用于弓形虫病IgG免疫诊断的研究

目的以纯化的重组弓形虫RH株主要表面抗原SAG1、次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HXG-PRT）和腺苷激酶（AK）作为诊断抗原，建立间接ELISA法检测抗弓形虫IgG抗体。方法诱导表达本实验室保种的SAG1／pET28a／BL21、HXGPRT／pET28a／BL21和AK／pET28a／BL-21，获得rSAG1、rHXGPRT和rAK三种重组抗原。分别用不同浓度的上述抗原包被聚苯乙烯酶标板，检测疑似弓形虫感染者血清。结果混合重组抗原ELISA法的最佳rSAG1包被浓度为500ng／ml、rHXGPRT和rAK均为200ng／ml；人血清稀释度为1：20；血清1：200稀释仍示阳性；特异性试验的抑制率为72．36％，变异系数11．2％。结论成功表达了弓形虫三种重组诊断抗原，并应用组合抗原（rSAG1＋rHXGPRT＋rAK）建立了ELISA检测方法，具有高度特异性和敏感性，本试剂具有弓形虫病辅助诊断价值。     

两组鲍曼不动杆菌对Hep-2细胞黏附及致其凋亡情况的研究

目的研究全敏感与泛耐药两组鲍曼不动杆菌对Hep-2细胞黏附及致其凋亡情况的差异。方法选取20株全敏感和20株泛耐药鲍曼不动杆菌,调菌浓度为3×108CFU/ml,取0.5ml分别加入到Hep-2细胞株的单细胞层培养物中,放5%CO2培养箱分别培养2、8、12、16和20h,分别用于计算Hep-2细胞的细胞黏附率和细胞黏附指数,不同时间段细胞凋亡情况的分析。结果全敏感菌株对Hep-2细胞的黏附以分散广泛黏附为主,引起细胞株病变快且形态改变明显;泛耐药菌株对Hep-2细胞的黏附以局部黏附为主,易被细胞吞噬,致细胞株病变慢,诱导细胞凋亡时间较全敏感组菌株滞后。两组耐药性不同的菌株在对Hep-2细胞的平均细胞黏附率上存在显著性差异,但在平均细胞黏附指数上的差异无统计学意义。结论泛耐药鲍曼不动杆菌对Hep-2细胞表现出黏附能力和致细胞病变能力的减弱,或许是自身突变、外膜蛋白缺失及各种耐药基因插入的影响,但具体原因和机制有待进一步研究。     

siRNA干扰嘌呤补救合成途径的关键酶对弓形虫增殖的抑制作用

目的探讨siRNA同时干扰嘌呤补救合成途径中两个关键酶对弓形虫增殖速率的影响。方法将针对腺苷激酶(AK)和次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)的siRNA同时电转染弓形虫,然后将弓形虫接种人包皮成纤维细胞(HFF),24h和40h后Giemsa染色,光镜下计数假包囊内弓形虫速殖子数目,计算弓形虫平均倍增次数。同时将弓形虫进行模拟电转,接种HFF细胞后,不加磺胺嘧啶进行培养作为阴性对照,加入10μg/mL磺胺嘧啶培养作为阳性对照。结果在接种HFF细胞后24h,4μmol/L的AK siRNA786和HXGPRT siRNA415联合电转弓形虫、阳性对照组及阴性对照组弓形虫的平均倍增次数分别为:1.64±0.95、1.04±0.88及2.32±0.90,前两组与后者相比倍增次数明显减少(P<0.05)。在接种后40h,siRNA联合电转弓形虫与阳性对照组弓形虫的平均倍增次数分别为3.00±1.04,2.56±1.04,与阴性对照组相比(3.60±0.80)差异有显著性(P<0.05)。结论嘌呤补救合成途径中的两个关键酶-AK和HXGPRT被其siRNA同时抑制后,弓形虫在细胞内的增殖速率显著减缓。     

弓形虫腺苷激酶基因的克隆、表达及多抗血清的制备

目的克隆弓形虫RH株腺苷激酶(AK)基因,构建原核表达载体pET28a/AK,表达AK重组蛋白,利用此重组蛋白免疫新西兰白兔制备多抗血清。方法收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA。设计合成的引物并引入BamHI和XhoI酶切位点,应用RT-PCR扩增弓形虫AK基因片段,目的基因插入克隆载体pGEM-T,提取重组质粒,BamHI和XhoI双酶切获得目的基因,插入原核表达质粒pET28a中,重组子双酶切、PCR和测序鉴定,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)并以IPTG诱导表达。亲和层析法纯化重组蛋白抗原,SDS-PAGE和Western blotting验证表达量和免疫活性,免疫新西兰白兔,收集多抗血清,ELISA测定多抗滴度,Western blotting鉴定免疫活性。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出1 092bp的AK目标基因片段,并构建原核表达载体,诱导含pET28a/AK的宿主菌获得了高浓度、与预期分子量大小相符的表达产物,经Ni2+亲和层析法纯化获得了高纯度的rAK蛋白,Western blotting显示rAK能够被TORCH试剂盒中的Tox-IgG阳性控制血清识别,获得了纯化的重组蛋白。rAK蛋白免疫新西兰白兔,获得滴度为1∶106多价抗血清。结论成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了AK基因,构建了pET28a/AK重组质粒,并获得了高效表达,免疫新西兰白兔获得了高效价多克隆抗体,为弓形虫iRNA及弓形虫病的免疫诊断奠定了基础。     

11～15岁青少年营养性缺铁性贫血的调查

目的调查11～15岁青少年营养性缺铁性贫血的情况，以便查明原因，提出建议，促进青少年身心健康成长。方法采用血液分析仪检测4502名青少年血红蛋白含量并进行分析。结果4502名青少年中，贫血131名，贫血率2．91％；不同性别的青少年比较有非常显著性差异（X2=9．12，P〈0．01），男性比例较高；不同年龄组之间比较有非常显著性差异（x2=116．42，P〈0．01），其中15岁青少年比例较高。结论营养性缺铁性贫血仍然是青少年常见的营养性疾病，定期健康体检有其重要性，加强防治和膳食指导，督促青少年养成良好的饮食习惯，促进其身心健康发展。