橄榄苦苷通过circMBOAT2/miR-106a-5p信号通路调控口腔鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的机制

探讨橄榄苦苷对circMBOAT2/miR-106a-5p 信号通路的调控作用及其对口腔鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的影响。方法 应用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测circMBOAT2和miR-106a-5p在口腔鳞癌组织和癌旁组织中的表达水平。将口腔鳞癌细胞CAL27分为橄榄苦苷（0、200、400、800 μg/mL）组、si-NC组、si-circMBOAT2组、橄榄苦苷800μg/mL+pcDNA-circMBOAT2组。采用RT-qPCR检测各组细胞中circMBOAT2和miR-106a-5p的表达水平,检测并验证circMBOAT2与口腔鳞癌的相关性。应用CCK-8法、集落形成实验、流式细胞术测定CAL27细胞的增殖活力、集落形成能力和凋亡率。应用双荧光素酶实验确定 circMBOAT2和miR-106a-5p靶向关系。结果 口腔鳞癌组织中circMBOAT2表达显著高于癌旁组织（P＜0.05）,miR-106a-5p表达显著低于癌旁组织（P＜0.05）。与橄榄苦苷0μg/mL组比较,橄榄苦苷（200、400、800 μg/mL）组CAL27细胞集落形成数、circMBOAT2水平显著降低（P＜0.05）,抑制率、凋亡率、miR-106a-5p水平显著升高（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-circMBOAT2组CAL27细胞集落形成数显著降低（P＜0.05）,抑制率、凋亡率、miR-106a-5p水平显著升高（P＜0.05）。circMBOAT2与miR-106a-5p直接特异性结合。与橄榄苦苷800 μg/mL组比较,橄榄苦苷800μg/mL+pcDNA-circMBOAT2组CAL27细胞集落形成数显著升高（P＜0.05）,抑制率、凋亡率显著降低（P＜0.05）。结论 橄榄苦苷通过下调circMBOAT2/miR-106a-5p通路可抑制口腔鳞癌细胞CAL27增殖,诱导细胞凋亡。     

橄榄苦甙对卵巢辐射损伤的防治效果

目的 探讨橄榄苦甙减轻卵巢辐射损伤的效果及其机制.方法 32只成熟雌性SD大鼠随机分为4组,正常对照组和辐射组予蒸馏水10 mL/(kg·d),橄榄苦甙组和辐射+橄榄苦甙组予橄榄苦甙100 mg/(kg·d),连续灌喂12周.12周后,辐射组和辐射+橄榄苦甙组大鼠动情期时,接受5 Gy的X线盆腔照射1次.辐射后7 d检测血清抗苗勒氏管激素(AMH)、IL-1、IL-6和TNF-α含量,计算卵巢组织各级卵泡数.结果 与正常对照组比较,辐射组血清AMH浓度显著降低(P<0.05),血清IL-1、IL-6、TNF-α浓度升高(P<0.05);卵巢中卵泡数减少.与辐射组比较,辐射+橄榄苦甙组血清AMH升高,IL-1、IL-6、TNF-α浓度降低(P<0.05);卵泡总数增加.结论 橄榄苦甙可通过抑制辐射诱导的炎症反应,减轻卵巢的辐射性损伤.     

橄榄苦苷对成骨细胞OPG/RANKL mRNA的影响

目的 通过测定橄榄苦苷对成骨细胞OPG/RANKL mRNA的表达,探讨其治疗骨质疏松症的机制。方法 运用荧光定量PCR技术（RT-PCR）检测不同浓度橄榄苦苷不同时间对成骨细胞OPG/RANKL mRNA 表达量。结果 与阴性对照组比较,RT-PCR 结果显示不同浓度的橄榄苦苷均能促进OPG mRNA的表达,并且抑制成骨细胞RANKL mRNA 的表达。结论 橄榄苦苷可能通过抑制RANKL分泌来降低破骨细胞活性,同时促进成骨细胞分泌OPG,使之与RANKL结合增多,间接作用于破骨细胞,使其活性降低,而达到治疗骨质疏松的目的。     

橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的研究橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组(0.5 mg/kg)及橄榄苦苷高、低剂量组(40、20 mg/kg),每组14只。连续灌胃给药14 d,末次给药结束后采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,进行2 h缺血后再灌注24 h,测定神经症状评分、脑梗死面积、脑组织含水量、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关的x蛋白(Bax)mRNA表达及磷酸化的JNK(p-JNK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38)蛋白表达等指标。结果与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠神经症状评分、脑梗死面积及橄榄苦苷高剂量组脑组织含水量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠Caspase-3、Bax mRNA及p-JNK、p-p38蛋白表达均明显降低(P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论橄榄苦苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,该作用与抑制JNK/p38 MAPK信号通路的活化进而减少神经元凋亡有关。     

橄榄苦苷对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞损伤的作用及机制研究

目的:研究橄榄苦苷对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的SD大鼠关节软骨细胞的影响。方法:采用酶两步顺序消化法消化SD大鼠关节软骨分离细胞,体外培养软骨细胞,光学显微镜观察细胞形态,阿尔新蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化法对软骨细胞进行鉴定。橄榄苦苷对软骨细胞的细胞毒性采用CCK-8实验进行评估。取第3代软骨细胞,分别用浓度为10、50或100μmol/L的橄榄苦苷预先处理,随后用IL-1β刺激细胞24 h,所生成的NO和前列腺素E2(PGE2)的量分别用格里斯重氮化反应和酶联反应吸附实验进行评估。基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-13 mRNA的表达利用实时荧光定量PCR进行定量检测。采用免疫印迹实验分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶2(COX-2)和活化NF-κB的蛋白表达。结果:软骨细胞在不同浓度橄榄苦苷培养24 h后,其生存能力与对照组相比无明显差异。橄榄苦苷可以显著降低IL-1β刺激下软骨细胞MMP-1和MMP-13 mRNA的表达及NO、PGE2的生成。橄榄苦苷通过减少IκB蛋白的降解从而抑制IL-1β介导的NF-κB通路的活化。结论:橄榄苦苷可通过NF-κB信号转导通路调控炎症的发生发展,进一步明确了橄榄苦苷对关节炎防治作用的分子机制,为骨关节炎的免疫治疗提供了重要的基础理论依据。     

A NIR fluorescent probe for Vanin-1 and its applications in imaging,kidney injury diagnosis,and the development of inhibitor

Vanin-1 is an amidohydrolase that catalyses the conversion of pantetheine into the amino-thiol cysteamine and pantothenic acid (coenzyme A precursor), which plays a vital role in multiple physiological and pathological processes. In this study, an enzyme-activated near-infrared (NIR) fluorescent probe (DDAV) has been constructed for sensitively detecting Vanin-1 activity in complicated biosamples on the basis of its catalytic characteristics. DDAV exhibited a high selectivity and sensitivity toward Vanin-1 and was successfully applied to the early diagnosis of kidney injury in cisplatin-induced kidney injury model. In addition, DDAV could serve as a visual tool for in situ imaging endogenous Vanin-1 in vivo. More importantly, Enterococcus faecalis 20247 which possessed high expression of Vanin-1 was screened out from intestinal bacteria using DDAV, provided useful guidance for the rational use of NSAIDs in clinic. Finally, oleuropein as a potent natural inhibitor for Vanin-1 was discovered from herbal medicines library using a high-throughput screening method using DDAV, which held great promise for clinical therapy of inflammatory bowel disease.     

HPLC法测定橄榄苦苷含量时内标物及色谱条件的研究

目的：确定HPLC法测定橄榄苦苷含量时所需的内标物及较优色谱条件。方法：用紫外分光光度计对橄榄苦苷、黄芩苷、没食子酸、绿原酸等标准物质进行全波长扫描确定检测波长,采用正交实验方法设计实验,在不同色谱条件下,测定各标准物质的保留时间、峰宽,计算分离度,根据分离度及保留时间,确定最优色谱条件及内标物。结果：正交实验结果,色谱柱不同水平间的F=39.50,流动相不同水平问的F=48.19,均〉F0.05（2,2）=19（P〈0.05）,差异具有统计学意义,不同标准品间比较差异无统计学意义。结论：在本正交设计中,橄榄苦苷最优色谱条件为色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipxe XDB-C18（4.6×150mm,5μm）,流动相：水-甲醇-甲酸为60：40：l,内标物为黄芩苷。     

橄榄苦甙改善db/db小鼠肝脏胰岛素抵抗作用机制研究

目的：本研究主要观察橄榄苦甙（OL）改善肥胖db/db小鼠胰岛素抵抗的作用机制。方法：6-8周龄雄性db/db小鼠12只,按体质量和随机血糖随机分为OL组和模型组,每组6只,另设同周龄C57BL/6J小鼠6只为正常组。OL组灌服OL水溶液50mg·kg^-1体重,其余组给以等剂量生理盐水。治疗4周后,检测各组小鼠的空腹血糖（FBG）、胰岛素水平、计算胰岛素抵抗指数以及口服葡萄糖耐量实验（OGTT）,取肝脏组织,采用RT-PCR、Western Blot检测相关基因和蛋白表达。结果：治疗4周后,与模型组比较,OL组体重、空腹血糖、血清胰岛素水平和胰岛素抵抗指数显著降低（P<0.05或P<0.01）;OGTT实验后,OL组血糖明显低于模型组（P<0.01）;OL组小鼠肝脏组织InsR、IRS-1、GLUT-2 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）。结论：OL通过提高肝脏InsR、IRS-1、GLUT-2 mRNA和蛋白的表达起到降低血糖、改善胰岛素抵抗的作用。     

Functional reconstitution of HBV-specific CD8 T cells by in vitro polyphenol treatment in chronic hepatitis B

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