葛根芩连汤调控MMP-9/p38 MARK途径修复溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜上皮屏障功能

目的 探讨葛根芩连汤对溃疡性结肠炎（UC）小鼠肠黏膜上皮屏障功能的保护作用，并通过基质金属蛋白酶-9（MMP-9）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路探究其治疗UC的作用机制。方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组（0.3 g·kg^-1）及葛根芩连汤高、中、低剂量组（2.84，1.42，0.71 g·kg^-1）。采用3%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液构建UC小鼠模型，葛根芩连汤和柳氮磺吡啶于造模后第8天灌胃给药，连续7 d，正常组给予等量生理盐水处理。末次给药后取结肠组织，苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理变化，免疫组化（IHC）观察结肠组织紧密连接（TJ）蛋白，如闭合蛋白（Occludin），闭锁连接蛋白-1（ZO-1）的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1β（IL-1β），MMP-9 mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中磷酸化（p）-p38 MAPK，p38 MAPK和MMP-9蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠体质量显著下降（P<0.01），疾病活动指数（DAI）评分显著升高（P<0.01），结肠黏膜上皮破损并可见黏膜和黏膜下层炎细胞浸润明显，Occludin，ZO-1蛋白表达显著降低（P<0.01），TNF-α，IL-1β，MMP-9 mRNA相对表达量显著升高（P<0.01），p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，柳氮磺吡啶组、葛根芩连汤各剂量组小鼠体质量和DAI评分均有明显改善（P<0.05，P<0.01），结肠组织损坏明显改善，Occludin，ZO-1蛋白明显增多（P<0.05，P<0.01），TNF-α，IL-1β，MMP-9 mRNA相对表达量显著下降（P<0.01），p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著下降（P<0.01），其中葛根芩连汤各组中以中剂量组的变化最为明显。结论 葛根芩连汤能够通过抑制MMP-9和炎性细胞因子TNF-α，IL-1β的表达，阻断p38 MAPK信号通路的激活，增加TJ蛋白的表达，从而修复肠道黏膜屏障功能。     

17β-雌二醇对涎腺黏液表皮样癌高转移细胞Mc3黏附、侵袭和移动力的影响

目的研究17β-雌二醇对涎腺黏液表皮样癌高转移细胞Mc3黏附、侵袭和移动力的作用。方法采用细胞体外黏附实验、体外移动实验、化学趋化性实验以及明胶底物SDS—PAGE凝胶电泳对基质金属蛋白酶（MMP）活性测定的方法研究17β-雌二醇对Mc3细胞黏附、侵袭和移动力可能存在的作用，用免疫组化的办法检测Mc3细胞的雌激素受体的表达。结果不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L）的17β-雌二醇处殚Mc3细胞72h后，其黏附率分别为38．3％、50．4％、69．2％、91．1％；而对照组为25．0％；作用48h后，10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L的17β-雌二醇对Mc3细胞在纤维连接蛋白（FN）上的移动促进率分别为16．9％、40．9％、36．4％、38．8％。在10^-6mol／L的17β-雌二醇的作用下，其对FN的化学趋化性增加60．3％。10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol／L的17β-雌二醇均可不同程度的促进Mc3细胞基质金属蛋白酶（MMP-2）的活性，在10^-6mol／L时尤为显著。在Mc3细胞中有雌激素核受体的表达。结论生理浓度的雌激素可促进Mc3细胞的黏附、侵袭和移动力。     

口腔粘膜白斑、鳞癌基底膜蛋白的表达异常

目的了解基底膜蛋白（层粘连蛋白、纤维连接蛋白，Ⅳ型胶原）在口腔粘膜白斑，鳞状细胞癌中的表达情况。方法采用免疫组化之SP_TM法，对20例口腔粘膜白斑，20例口腔鳞状细胞癌和10例正常口腔粘膜进行染色。结果正常口腔粘膜、单纯增生性白斑LN和Ⅳ型胶原基底膜染色密度高，呈连续线状；FN基底膜染色密度低，亦呈连续线状。LN和Ⅳ型胶原的染色密度和基底膜的连续性与白斑的异常增生程度及鳞癌的分化程度（由高分化至低分化）呈负相关。异常增生性白斑、高分化鳞状细胞癌可见FN的表达增强，而低分化鳞状细胞癌基底膜染色密度未见增高，浸润性癌基底膜破坏或缺失。结论基底膜蛋白可能作为早期诊断癌前病变的一种生物学指标。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后Cx43蛋白的表达模式

目的：建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型,探索再灌注后Cx43蛋白的表达模式。方法75只大鼠随机分为MCAO组（60只）和假手术组（15只）。MCAO组均行MCAO手术,术后根据缺血再灌注时间分为0.5、4、12、24 h 4个亚组,每组15只;假手术组不插入线栓。各组进行改良神经损伤严重程度评分（mNSS）、脑组织TTC染色及神经元尼式染色,Western blot及免疫组织化学方法检测各组脑组织Cx43蛋白的表达并进行统计学分析。结果 MCAO组造模成功率75%。MCAO组大鼠mNSS评分明显高于假手术组（P＜0.05）,脑梗死面积增加,额顶叶皮质区神经元大量损伤。Western blot结果显示：假手术组及MCAO 0.5、4、12、24 h组Cx43表达量分别为0.23±0.12、0.58±0.18、0.78±0.07、0.61±0.05和0.27±0.07, MCAO 0.5、4、12 h组与假手术组差异均有统计学意义（P＜0.05）,而MCAO 24 h组与假手术组差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组化结果显示：MCAO组侧脑室下区Cx43的表达在0.5 h开始升高,4 h达高峰,12 h逐渐下降,直至24 h恢复基线水平;与Western blot结果一致。结论 Cx43蛋白在脑缺血性再灌注损伤发生、发展中起重要作用。     

秦皮甲素对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨秦皮甲素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度秦皮甲素(10、30、90μmol·L-1)对正常培养条件(含糖5.6 mmol·L-1)和高糖培养条件(含糖25 mmol·L-1)下的HBZY-1细胞增殖的影响;以PI3K抑制剂Wortmannin(1μmol·L-1)干预为对照,采用Western Blot法检测秦皮甲素对高糖培养条件下HBZY-1细胞FN蛋白表达及PI3K/Akt蛋白磷酸化水平变化的影响。结果在正常培养条件下,与正常组比较,秦皮甲素给药组(10、30、90μmol·L-1)的HBZY-1细胞增殖均无明显变化(P>0.05)。在高糖培养条件下,与正常组比较,高糖组的细胞活力明显增加(P<0.05),HBZY-1细胞FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平明显升高(P<0.05);与高糖组比较,90μmol·L-1秦皮甲素给药组的HBZY-1细胞活力明显降低(P<0.05),FN蛋白表达和PI3K/Akt磷酸化水平亦显著下调(P<0.05)。结论秦皮甲素能够抑制高糖诱导的HBZY-1细胞增殖,下调FN蛋白表达,可能与其抑制PI3K/Akt信号通路激活密切相关。     

肺泡中性粒细胞凋亡与occludin蛋白改变在胆道梗阻大鼠肺损伤中的作用

目的：观察胆道梗阻（BDO）大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中性粒细胞（PMN）凋亡情况与肺泡上皮细胞occludin蛋白变化,分析两者与梗阻性黄疸肺损伤的关系。 方法：72只SD大鼠,随机抽取8只作为正常对照组,将另64只大鼠随机均分为假手术组和模型组;假手术组大鼠行假手术,模型组大鼠行胆总管双重结扎建立BDO模型。假手术组与模型组大鼠于术后3、7、10、14 d分批等量（n=8）处死,留取标本;正常对照组则在实验期间随机处死获取标本。检测大鼠肺组织形态学、BALF中PMN凋亡率和MMP-9活性,肺组织occludin蛋白,并计算肺通透指数（LPI）。 结果：与正常对照组比较,假手术组各项指标在各时间点均无明显差异,定量指标间差异均无统计学意义（均P>0.05）。模型组肺组织出现明显的病理改变,且与假手术组比较,BALF中PMN凋亡率逐渐减少,MMP-9活性逐渐增高,3~14 d各时间点差异均有统计意义（均P<0.05）;肺组织occludin蛋白逐渐减少,LPI逐渐增加,在7~14 d各时间点差异均有统计意义（均P<0.05）。相关性分析显示,BDO大鼠PMN凋亡率与MMP-9活性呈负相关（r=-0.935）,MMP-9活性与肺组织occludin蛋白水平呈负相关（r=-0.796）,肺组织occludin蛋白水平与LPI呈负相关（r=-0.800）（均P<0.05）。 结论：BDO大鼠肺泡PMN凋亡减少、MMP-9活性增强,从而引起occludin蛋白减少,造成肺泡上皮屏障损伤、通透性增加,该病理过程在梗阻性黄疸肺损伤的发生发展中可能发挥了重要作用。     

桃红四物汤抗癫痫作用机制研究

目的研究桃红四物汤的抗癫痫作用机制。方法建立戊四氮(PTZ)点燃大鼠癫痫模型,随机分为对照组、模型组和桃红四物汤低、中、高剂量组。桃红四物汤剂量分别为0.7、1.4、2.1 g/kg,给药体积为10 m L/kg,每日ig给药1次,连续给药2周。给药第0、14天观察大鼠癫痫发作程度。给药结束处死大鼠,伊文思蓝(EB)法测定血脑屏障通透性,Western blotting法和免疫荧光法测定脑组织及不同部位3种紧密连接蛋白:闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Occludin蛋白表达水平。结果高、中、低剂量桃红四物汤可显著降低大鼠癫痫发作程度和血脑屏障通透性(P0.01)。低剂量桃红四物汤可显著升高大鼠脑组织皮层、海马及纹状体的MMP-9表达水平(P0.05);中、高剂量桃红四物汤可显著升高大鼠脑组织ZO-1、MMP-9、Occludin表达水平(P0.05、0.01)。结论桃红四物汤可显著减轻癫痫发作程度,作用机制可能与降低血脑屏障通透性及升高脑组织紧密连接蛋白表达水平有关。     

分选连接蛋白16的结构和功能及其在疾病中的研究进展

分选连接蛋白(SNX)16是SNX家族成员之一,其结构含有易与磷脂酰肌醇-3-磷酸结合的一类含有吞噬细胞氧化酶同源性结构域及C末端的卷曲螺旋结构域。研究表明,SNX16在细胞内吞、蛋白分选和细胞信号转导等过程中发挥了重要作用,并且与多种疾病的发生密切相关。本文就SNX16的结构特点、生物学功能及其在疾病中的作用进行综述,以期为SNX16在疾病防治中的研究提供参考。