超高速细胞分选平台结合cDNA microarray技术筛查宫颈癌细胞潜在分子标志物

目的：通过超高速细胞分选平台结合cDNA microarray技术,筛查宫颈癌细胞可能潜在的分子标志物。方法：采用MoFlo XDP型超高速细胞分选平台纯化细胞膜表面表达CD38和不表达CD38的宫颈癌细胞,利用RNAlater技术得到cDNA microarray实验所需RNA,然后进行基因芯片分析。结果：利用MoFlo XDP型超高速细胞分选平台可以获得纯度为99.0%以上的CD38阳性表达宫颈癌细胞。结论：cDNA microarray分析发现了RORA、PLIN4、AUTS2、IFITM1等宫颈癌细胞潜在分子标志物,为宫颈癌研究提供了新的技术方法。     

心型脂肪酸结合蛋白对脂多糖所致心肌细胞损伤的保护作用

目的：探讨心型脂肪酸结合蛋白(heart-fatt y acid binding protein,H-FABP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS) 所致心肌细胞损伤的保护作用。方法：以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型,通过基因转染方式改变H-FABP表 达水平,采用Western印迹、定量PCR检测原代培养中H-FABP的表达。分别检测心肌细胞培养液中TNF-α,IL-1β,乳 酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量以及细胞存活率来反映LPS诱导的心肌细胞损伤与炎症反应。结果：LPS处 理24 h能增加H-FABP表达。SiRNA降低H-FABP后,显著促进LPS引起的心肌细胞存活率下降、LDH释放以及TNF-α和 IL-1β释放。相反,H-FABP过表达能显著抑制LPS引起的心肌细胞损伤与炎症反应。结论：H-FABP对LPS引起的心肌 细胞损伤具有保护作用。     

阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管生长的影响

目的　探讨阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管生长的影响。 方法　28只成年SD大鼠,给予高脂饮食8周,建立结扎股动脉诱导的高胆固醇血症大鼠侧支血管生长模型。随机将动物分为单纯股动脉结扎组（L组）、高胆固醇血症+股动脉结扎组（HL组）和阿托伐他汀（0.3 mg·kg-1·14 d-1,腹腔注射）+高胆固醇血症+股动脉结扎组（AL组）。存活7 d后,采用血管造影,HE染色和共聚焦免疫荧光术,观察高胆固醇血症情况下,阿托伐他汀应用对侧支血管生长的作用以及重要的促侧支血管生长分子在侧支血管表达模式的变化。 结果　与L组比较,HL组的侧支血管数目减少,侧支血管生长受到损害,表现为血管内膜过度增生,中膜明显增厚,导致血管腔狭窄,且血管壁细胞增殖和外膜炎症细胞减少;AL组应用了阿托伐他汀,侧支血管的生长较HL组明显改善,发育为管腔较大的侧支血管,血管壁细胞的增殖和外膜炎症细胞增多,侧支血管数目增加。其侧支血管数目,血管横截面积和免疫荧光强度差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论　高胆固醇血症损害大鼠后肢侧支血管的生长;阿托伐他汀可促进血管壁细胞的增殖和外膜巨噬细胞的增多,从而改善和恢复侧支血管的生长。     

基于专利数据库中药复方治疗溃疡性结肠炎的用药规律与作用机制分析

目的：研究溃疡性结肠炎专利复方的用药规律和作用机制。方法：从专利数据库中筛选治疗溃疡性结肠炎的中医专利复方,录入数据库,进行频数、聚类和关联分析,再通过中药系统药理学数据库与分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP）筛选排名前十的高频药的活性成分,然后通过DrugBank数据库找到这些成分对应的作用靶点,并通过基因免疫功能和基因通路富集分析找到这些靶点对应的免疫功能和信号通路。结果：总共发现治疗溃疡性结肠炎的专利复方224个,涉及中药387味;排名前十的高频药依次是黄连、甘草、白术、白芍、黄芪、白及、党参、白头翁、地榆、木香,主要使用的是补益药和清热药;发现中药配伍10对、关联规则16条;在排名前十的高频药中筛选出83个活性成分及其146个作用靶点,这些靶点作用于B细胞增殖、T细胞因子分泌等27个免疫功能,以及TNF信号通路、IL-17信号通路等47条信号通路。结论：专利数据库中治疗溃疡性结肠炎的中药复方用药规律符合临床实际,其作用机制和溃疡性结肠炎的病理机制较符合。     

双酚AF经口亚急性染毒对小鼠糖脂代谢的影响

目的 探究双酚AF(BPAF)亚急性毒性对小鼠糖脂代谢影响。方法 50只SPF级6周龄健康雄性小鼠随机分为5组,对照组、溶液对照组以及100、200和400 mg/kg/d BPAF染毒组,经口染毒14 d,进行葡萄糖耐量试验（OGTT实验）,测定小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）,肝组织切片HE染色以及荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、脂肪酸合成酶（FAS）、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（PERCK）、叉头状转录因子（FoxO1）。结果 BPAF染毒组与对照组和溶液对照组比较,BPAF染毒组体质量降低,TG[(3.067±0.581)、（2.896±0.734）、（3.498±0.698） mol/L]比[（2.322±0.303）和（2.284±0.253） mol/L]、TC[(1.052±0.049)、（1.488±0.219）、（1.188±0.192） mol/L]比[（0.645±0.077）和（0.736±0.144） mol/L]含量升高,PPAR-γ、ACC...     

嗜酸性粒细胞在肿瘤免疫微环境中的作用研究进展

近年来,对恶性肿瘤发生发展过程及治疗策略的研究扩展到肿瘤组织与肿瘤免疫微环境（TIME）的联合作用,TIME由肿瘤细胞、肿瘤相关成纤维细胞及其分泌的基质蛋白、血管内皮细胞、免疫细胞,以及一系列细胞因子、趋化因子、细胞外基质组成。TIME的组成及表型会影响肿瘤的发展及疗效,针对TIME各组分的充分了解有助于治疗方案的制定和预后的预测。嗜酸性粒细胞（EOS）是TIME的重要组分,由骨髓中的多能干细胞分化而来,成熟后释放入血,随后迁移到组织中,该过程受多种细胞因子、趋化因子、黏附分子调控,EOS自身及肥大细胞、成纤维细胞等组分分泌一系列介质起趋化作用。成熟EOS含初级颗粒和特殊颗粒,包含一系列细胞毒性碱性蛋白,如主要碱性蛋白（MBP）、嗜酸性粒细胞源性神经毒素（EDN）、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）和嗜酸性粒细胞过氧化物酶（EPX）等,并可分泌神经营养因子、白细胞介素及趋化因子等可溶成分。目前针对EOS的研究多集中于EOS水平对预后的影响分析、EOS与TIME其他组分的相互作用,而EOS促肿瘤或抗肿瘤的相关信号通路和确切机制尚不明确,相关组织学实验和临床试验较少,有待进一步研究和完善。     

双向电泳和质谱技术分析HCV NS3转化肝细胞的蛋白质组

目的:持续感染丙型肝炎病毒(HCV)在肝细胞癌(HCC)发生中起重要作用,细胞转染和成瘤实验表明HCV NS3对人肝细胞具有转化作用和致瘤活性.本实验旨在探讨HCV非结构蛋白3(NS3)转化肝细胞的蛋白质组.方法:构建稳定表达HCV NS3 N端多肽的人肝细胞(pRcHCNS3/QSG)及空白质粒转染细胞(pRcCMV/QSG),双向电泳技术分离两种细胞的总蛋白,差异蛋白质点进行质谱分析,Western印迹验证蛋白表达差异.结果:得到分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱.pRcHCNS3/QSG和pRcCMV/QSG细胞的蛋白质斑点数分别为(1 183±77)和(1 095±82)个,两组平均匹配数为(920±60)个.初步鉴定出15个有意义的蛋白质点.其中Ras,P38,HD53等参与调节信号转导的蛋白在pRcHCNS3/QSG细胞中表达上调,Western印迹结果亦证实pRcHCNS3/QSG细胞中磷酸化的P44/42和P38表达增加.鉴定出的差异蛋白质还包括一些调节细胞周期、免疫反应、与肿瘤侵袭和转移相关的蛋白质及参与肝脏代谢的蛋白质.结论:HCV NS3可能通过影响多种蛋白表达,经相应信号转导途径,如丝裂原活化蛋白激酶途径,使细胞发生恶性转化.进一步弄清信号转导过程和相互关系不仅对了解HCV相关性HCC的发生机制有重要意义,而且为从分子水平治疗HCC提供新思路.     

多波长线性回归法同时测定安痛定注射液中的三组分

目的：对安痛定注射液中的三组分实行分光光度法同时测定。方法：对传统的多波长线性回归分光光度法进行改进,使其不需要等吸收波长。结果：９份模拟样品中氨基比林、安替比林、巴比妥的平均回收率分别为９９．９％、９９．８％、１００．３％,相对标准偏差分别为０．５％、１．０％、１．７％。对３个批号实际样品的测定结果与标准方法一致。结论：方法简便快捷,适于安痛定注射液的制剂分析。     

内毒素血症兔血浆内毒素及组织病理动态改变与卫气营血辨证相关性研究

目的观察内毒素血症兔不同时相的血浆内毒素及脏器组织病理学改变,探讨其与卫气营血阶段性辨证及传变的相关性。方法将50只新西兰大耳白兔随机分成空白组8只和1阶段（攻毒后2 h内）组14只、2阶段（攻毒后2～6 h）组14只、3阶段（攻毒后6～36 h）组14只,采用静脉注射大肠杆菌内毒素的方法建立内毒素血症模型,观察不同时相血浆内毒素及肺、肝、肾、心脏组织病理学改变。结果 1阶段组及2阶段组血浆内毒素阳性率较空白组明显升高（P〈0.05）,3阶段组与2阶段组比较,血浆内毒素阳性率亦明显升高（P〈0.05）。1阶段组与2阶段组比较血浆内毒素阳性率差异没有统计学意义（P〉0.05）。1阶段组肺、肝、肾、心脏病理均有轻微改变,少量炎细胞浸润、细胞肿胀是其主要特征;2阶段出现明显炎细胞浸润及脂肪变性,部分组织出现坏死;3阶段组肺、肝、肾组织均出现大量炎细胞浸润,有明显的细胞坏死。结论内毒素血症兔血浆内毒素含量与病情轻重相关;1阶段病理改变与卫分证病机相关,2阶段病理改变与气分证病机相关,3阶段病理改变与营血分证病机相关。     

应用COⅠ短序列片段鉴定常见嗜尸性麻蝇

目的:利用线粒体DNA(mtDNA)中278 bp的细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(cytochrome oxidase Ⅰ,CO Ⅰ)序列鉴定我国常见嗜尸性麻蝇,寻求快速、准确的嗜尸性麻蝇种类鉴定方法.方法:从12个省16个地区户外草地家兔尸体上采集麻蝇科3属4种共计19个样本.利用十二烷基硫酸钠-蛋白酶K法提取蝇类胸肌mtDNA; Eppendorf 5331型扩增仪对278 bp的CO Ⅰ基因片段进行PCR扩增;检测扩增产物,PCR胶回收纯化,测序并上传GenBank;利用MEGA4.0软件按邻近法构建无根系统发育树,通过序列分析建立种内及种间进化分歧表.结果:邻近法构建的发育树中4种麻蝇各自聚群,与形态学鉴定结果一致,上述麻蝇按照不同属、种分别聚类,其种内分歧整体均数均小于或等于3％,种间进化分歧均数在8％～12％之间.结论:COⅠ中278 bp基因序列能有效地鉴定常见嗜尸性麻蝇种类,进一步完善我国嗜尸性麻蝇基因库,为今后在实际案例中应用分子标记鉴定嗜尸性麻蝇进而推断死亡时间奠定基础.