γ-干扰素诱导蛋白10在结核性胸膜炎辅助诊断中的应用价值

目的 探讨胸腔积液γ-干扰素诱导蛋白10（IP-10）在结核性胸膜炎中的诊断价值。 方法 选择2010年10月至2011年10月在北京胸科医院门诊及收住入院的胸腔积液患者195例,其中结核性胸腔积液患者112例(结核性胸腔积液组),恶性肿瘤胸腔积液患者83例（恶性胸腔积液组）,采用双抗夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者胸腔积液IP-10浓度,研究两组患者IP-10浓度的差异。 结果 结核性胸腔积液组IP-10浓度［196 855（4518～1 512 550） pg/ml］明显高于恶性胸腔积液组［7432（173～97881）pg/ml］,差异有显著统计学意义（U=575.00,P<0.001）;结核性胸腔积液组IP-10阳性患者构成比为82.14%（92/112）,恶性胸腔积液组IP-10阳性患者构成比为6.02%（5/83）,两组比较差异有显著统计学意义（χ²=110.49,P<0.001）。ROC曲线分析结果显示,胸腔积液中IP-10的诊断临界值为10 964 pg/ml,诊断敏感度为82.14%（92/112）,特异度为93.98%(78/83),准确度为87.18%(170/195)。 结论 胸腔积液IP-10水平检测对结核性胸膜炎的早期诊断与鉴别诊断具有重要价值。     

结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐受程度与gyrA基因突变的相关性分析

目的以氧氟沙星为例,探讨阈值的划分对实验室早期检测出耐氧氟沙星结核分枝杆菌的影响。结合DNA序列分析探讨gyrA基因点突变与结核分枝杆菌对氧氟沙星耐受程度的相关性。方法 （1）在含氧氟沙星改良罗氏培养基上检测101株结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星的敏感性。（2）测序以检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变的特征。结果 （1）52株耐氧氟沙星5.0μg/ml的临床分离株中,17株能在含氧氟沙星10.0μg/ml的改良罗氏培养基上生长（约占32.69%）,49株对氧氟沙星5.0μg/ml敏感的临床分离株中,有2株能在含氧氟沙星2.0μg/ml的改良罗氏培养基上生长（约占4.08%）。（2）基因扩增产物测序发现;耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变主要发生第90、91和94位点上,有10株在不同的gyrA基因位点上发生了碱基缺失或插入的变异,101株被检测的结核分枝杆菌临床分离株中,发生在第95位点的碱基突变率为100%。结论 （1）判定耐药结核分枝杆菌上、下限的阈值对耐药结核菌的早期检出具有重要的作用。（2）发生在耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因上的点突变是多变的,但与结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐受程度没有明显的相关性。     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后。whiB7基因的表达水平变化不明显外．其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐约株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因。推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

PCR-SSOP并Southern杂交检测实验室筛选耐氧氟沙星结核分枝杆菌的研究

目的 探讨PCR-SSCP并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性，并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法 ①体外诱导筛选耐OFLX的自然突变株，并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)；②扩增结核分枝杆菌的gyrA基因(包括H37Rv、H37Ra、临床分离的OFLX敏感株及体外诱导筛选的耐OFLX的菌株)并对此扩增产物进行单链构象多态性(SSCP)分析及Southern杂交，以判定应用该技术的效果。结果经PCR-SSCP及Southern杂交检测，85株体外诱导的自然耐OFLX菌株，均检测到gyrA基因突变。研究发现．在OFLX 10μg／ml这一点上，明显地存在着一个耐OFLX结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区。结论PCR-SSCP合并Southern杂交可清晰地区分OFLN敏感与耐药株。本研究结果显示，以10μg／ml为界作，为判别耐OFLX的标准是适宜的。     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后,whiB7基因的表达水平变化不明显外,其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐药株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因,推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

用变性高压液相色谱检测结核分枝杆菌耐药株

目的利用变性高压液相色谱(DHPLC)技术快速检测结核分枝杆菌gyrA基因的突变,对结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物做出初步判断。方法提取试验菌株基因组DNA,扩增gyrA基因的氟喹诺酮药物耐受决定区(QRDR)核酸片段;分别与H37Rv标准株(或者含有单纯Ser284突变的临床分离株作为标准)的相应PCR产物混合、杂交后,用WAVE核苷酸片段分析系统对各杂交产物进行DHPLC检测;序列测定结果与相应的DHPLC检测结果进行比较以验证DHPLC检测的准确性。用2mg/L的药物浓度进行氧氟沙星(OFLX)药物敏感性试验,确定101株结核分枝杆菌临床分离株对OFLX的敏感性,通过比较药物敏感性和DHPLC检测结果,建立两者之间的对应关系。结果用DHPLC检测QRDR突变与序列测定具有同样的检出率(100%),两者都能够很好地检测QRDR突变。用单纯含有Ser284突变的临床分离株代替H37Rv作为标准进行DHPLC检测,可以检测出除与耐药性无关的Ser284突变点外所有的点突变形式。在101株结核分枝杆菌临床分离株中,有49株对2mg/LOFLX敏感,52株耐受。52株耐药菌株中,有27株能够通过序列测定和DHPLC法得到准确判定。结论DHPLC法是快速检测出结核分枝杆菌gyrA基因碱基突变的好方法,但是碱基突变与结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物存在复杂的关系,造成检测准确性无预期中的高,因此该方法应用于临床检测尚需进一步验证。     

地高辛核酸探针在分支杆菌菌种鉴定中的应用

地高辛标记的结核分支杆菌全染色体核酸探针膜呈色杂交法的建立,表明该探针显示良好的灵敏度和特异性。此种探针具有效期长、操作方便、反应快速等特性,优于同位素标记探针。其全染色体核酸细胞杂交法可适用于结核分支杆菌复合群和非结核分支杆菌的临床分离株的菌种鉴定。     

利用生物发光法快速测定几种抗结核药物的最低抑菌浓度

应用ATP依赖性发光素酶—发光素系统5日内可在7H9液体培养基中检测到几种抗结核药物的抗结该分支杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。     

链霉素耐药结核分枝杆菌临床分离株gidB基因突变研究

目的 探索gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用.方法 结核分枝杆菌临床分离株中,60株为链霉素耐药,30株敏感.同时进行链霉素MIC测定并采用DNA测序法分析gidB,rpsL和rrs基因突变.结果 20%的耐药株含有gidB单基因突变,80%的耐药株除gidB基因突变以外,还有rpsL或rrs基因突变.敏感株中也有gidB基因突变.gidB突变呈散在分布,未发现突变热点.结论 gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用尚不能肯定.