A DNA vaccine expressing an optimized secreted FAPα induces enhanced anti-tumor activity by altering the tumor microenvironment in a murine model of breast cancer

Cancer-associated fibroblasts (CAFs), major components of the tumor microenvironment (TME), promote tumor growth and metastasis and inhibit the anti-tumor immune response. We previously constructed a DNA vaccine expressing human FAPα, which is highly expressed by CAFs, to target these cells in the TME, and observed limited anti-tumor effects in the 4T1 breast cancer model. When the treatment time was delayed until tumor nodes formed, the anti-tumor effect of the vaccine completely disappeared. In this study, to improve the safety and efficacy, we constructed a new FAPα-targeted vaccine containing only the extracellular domain of human FAPα with a tissue plasminogen activator signal sequence for enhanced antigen secretion and immunogenicity. The number of CAFs was more effectively reduced by CD8⁺ T cells induced by the new vaccine. This resulted in decreases in CCL2 and CXCL12 expression, leading to a significant decrease in the ratio of myeloid-derived suppressor cells in the TME. Moreover, when mice were treated after the establishment of tumors, the vaccine could still delay tumor growth. To facilitate the future application of the vaccine in clinical trials, we further optimized the gene codons and reduced the homology between the vaccine and the original sequence, which may be convenient for evaluating the vaccine distribution in the human body. These results indicated that the new FAPα-targeted vaccine expressing an optimized secreted human FAPα induced enhanced anti-tumor activity by reducing the number of FAPα⁺ CAFs and enhancing the recruitment of effector T cells in the 4T1 tumor model mice.     

体外培养骨髓单个核细胞分泌促血管生长因子的实验研究

目的分析体外培养的骨髓单个核细胞持续分泌促血管生长因子的能力。方法从大鼠胫骨及股骨采集骨髓,密度梯度离心法分离出骨髓单个核细胞进行体外培养,并连续收集4周培养上清液。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定培养上清液中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和白介素-1β(IL-1β)等因子水平。结果第1、2、3、4周骨髓单个核细胞体外培养上清液中VEGF分别为(24.40±7.99)pg/m、l(89.28±5.13)pg/m、l(115.24±10.08)pg/m、l(157.00±15.64)pg/m l;bFGF含量分别为(52.72±2.13)pg/m、l(48.10±6.41)pg/m、l(44.71±3.21)pg/m、l(25.61±2.42)pg/m l;IL-1β含量分别为:(31.28±5.44)pg/m、l(71.87±3.01)pg/m、l(55.77±11.94)pg/m、l(41.75±9.14)pg/m。l结论体外培养骨髓单个核细胞可持续分泌VEGF、bFGF、IL-1β等多种促血管生长因子。     

SA脂质体介导GFP／bFGF基因在豚鼠耳蜗中的表达

目的 :观察天然碱性脂 (Stearylamine,SA)脂质体介导绿色荧光蛋白 /碱性成纤维细胞生长因子(GFP/bFGF)基因于不同时间段豚鼠耳蜗中的表达 ,为进一步研究耳聋的基因治疗提供实验基础。方法 :取豚鼠 1 6只 ,分成 4组 ,每组 4只。其中 3只右耳圆窗内注入SA -GFP/bFGF复合物 ,1只同法注入生理盐水作为对照。分别于术后第 2、7、1 4、2 1天取材。在荧光显微镜下观察GFP的表达 ,用免疫组化法检测bFGF的转导情况。结果 :荧光显微镜下见双侧耳蜗于术后第 2天开始部分细胞发出绿色荧光 ,第 7天达到高峰 ,支持细胞及内外毛细胞均显荧光 ,细胞轮廓清晰 ;第 1 4天开始减弱 ,第 2 1天消失。免疫组化染色显示 ,除血管纹外 ,耳蜗各回Corti器、螺旋韧带、螺旋缘及螺旋神经节细胞均有高浓度的表达产物 ,对照动物呈阴性表达。结论 :SA脂质体介导的GFP/bFGF基因单耳给药双侧耳蜗均有高效表达 ,为进一步研究基因治疗耳聋提供了可能。     

银屑病患者血清促进皮肤成纤维细胞增生的实验研究

进行期寻常型银屑病患者混合血清以5%的比例加入培养基中,作用于体外培养的正常人皮肤成纤维细胞.结果发现,对该细胞的增生具有明显的促进作用.提示银屑病不仅是表皮细胞的异常增生,真皮成纤维细胞的异常和系统性因素在其病理生理方面也占有重要地位.     

成纤维细胞生长因子23在血液透析患者磷和维生素D代谢中的作用

目的 探讨成纤维细胞生长因子23（FGF-23）在维持性血液透析（MHD）患者磷和维生素D代谢中的作用及相关调控机制。 方法 采用酶联免疫分析法（ELISA）对59例MHD患者（血透组）及20例健康志愿者（对照组）进行血清全段FGF-23测定，同时应用放免法测定血清1，25-二羟维生素D（1,25(OH)2VitD）水平。血透组患者测定血清白蛋白（Alb）、血红蛋白（Hb）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、钙（Ca）、磷（P）及全段甲状旁腺激素（iPTH）等指标。 结果 血透组血清FGF-23水平明显高于对照组[（215.23±123.55）比（28.72±11.49） ng/L，P < 0.01]，而血清1,25(OH)2VitD水平明显低于对照组[（13.25±8.73）比（42.24±12.45） μg/L，P < 0.01]。Pearson相关分析显示，血透组血清FGF-23水平与血清P、Scr、Ca、iPTH及透析疗程时间呈正相关（P < 0.05）；与血清1,25(OH)2VitD水平和年龄呈负相关（P < 0.05）；而与性别、血压、血清Alb、Hb、BUN等指标无相关。多元回归分析显示，血清P、Ca、Scr、iPTH和1,25(OH)2VitD是影响血清FGF-23的主要变量，5者组成的模型解释了总变异的约62%（R2=0.623，P < 0.01）。 结论 MHD患者血清全段FGF-23水平明显增高，而1,25(OH)2VitD水平明显降低。FGF-23的调控是由复杂的多种因素共同作用的结果，血清P、Ca、Scr、iPTH和1,25(OH)2VitD是影响血清FGF-23水平的主要调控因子。     

丹参在抑制兔唇创口瘢痕增生中的作用

选用50只新西兰白兔,2只处死后取上唇组织作为病理对照,48只采用Millard’s法修复上唇裂隙,拆线后随机分为实验组、溶媒组和对照组3组,每组16只。实验组每天涂擦复方丹参膏2次,溶媒组每日涂擦溶媒膏二次,对照组不作任何处理。分别在术后0d、7d、15d、21d、30d、60d、90d测量上唇瘢痕的体积变化,并在7d、30d、60d时每组分别处死2只,90d后全部处死,取上唇瘢痕组织在光镜和电镜下观察组织病理学变化。组织学观察显示丹参可抑制成纤维细胞增殖,影响胶原蛋白合成,使胶原纤维重排和降解,从而减轻瘢痕增生。     

部分创面外用抗菌药物与成纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、重组人生长激素对成纤维细胞生物学特性影响的实验研究

目的观察部分创面外用抗菌药物与成纤维细胞生长因子(FGF)2、表皮生长因子 (EGF)、重组人生长激素(rhGH)对成纤维细胞生物学特性的影响。方法体外培养成纤维细胞, 按所加药物不同分为对照组(常规培养)、丁胺卡那霉素(0．021、0．210、2．100 mg/L)组、庆大霉素(5、 50、500 mg/L)组、氯霉素(0．01、0．10、1．00 mg/L)组、磺胺米隆(5、10 g/L)组、FGF2(2 400 U/ml)组、 EGF(2 000 U/ml)组及rhGH(0．016、0．160、1．600 g/L)组。用噻唑蓝(MTT)法测定各组成纤维细胞增殖活性[吸光度(A)值],用流式细胞仪检测细胞周期,并于显微镜下观察细胞形态的变化。结果 (1)MTT法检测:与对照组A值0．455 3±0．021 7比较,各种剂量丁胺卡那霉素组、庆大霉素组、氯霉素组、磺胺米隆组成纤维细胞A值均明显降低(P<0．05或0．01),其中磺胺米隆(5、10 g/L)组降低最明显,分别为0．101 3±0．001 1、0．095 0±0．004 1(P<0．01)。FGF2组及0．016 g/L rhGH 组细胞A值明显高于对照组(P<0．05),而EGF组及0.160、1．600 g/L rhGH组A值与对照组接近 (P>0．05)。(2)细胞周期检测:对照组细胞增殖指数(PI)为(9．63±0．45)％,与之比较,0．210 mg/L丁胺卡那霉素组细胞PI值无明显变化(P>0．05),FGF2组、EGF组及0．016 g/L rhGH组PI值均明显升高,分别为(46．76±2．33)％、(42．30±1．41)％、(13．29±0．47)％(P<0．05或0．01)。 (3)形态学观察:对照组、EGF组及0．160、1．600 g/L rhGH组成纤维细胞数目较多,呈长条形或梭形, 轮廓不清,透明度高;丁胺卡那霉素组、庆大霉素组、氯霉素组、磺胺米隆组细胞数目较少,形态不规则,轮廓清晰,透明度低,细胞内多有颗粒样物质及空泡;FGF2组、0．016 g/L rhGH组细胞分布均匀、密集,呈长条形或梭形,核分裂相多见,轮廓不清,透明度高。结论不同创面外用药物对成纤维细胞生物学特性的影响各异,在创面修复过程中应选择合适的创面外用药物,以促进愈合并抑制瘢痕增生。     

冰蜜生肌膏对兔成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的:观察冰蜜生肌膏促进体外培养兔成纤维细胞增殖的影响。方法:采用消化分离法进行兔成纤维细胞的原代培养,通过形态学和免疫组织化学的方法鉴定成纤维细胞。第3代纯化的成纤维细胞分为5组,空白对照组每孔加入等量的PBS,实验组每孔分别加入125、62·5、31·25、15·625mg/ml的冰蜜生肌膏提取液进行培养,培养24、48、72h后分别行MTT法检测每孔的光吸收值(OD值)。结果:冰蜜生肌膏提取液加入到成纤维细胞中培养24、48、72h后,经MTT法检测,不同浓度(浓度分别为125、62·5、31·25、15·625mg/ml)冰蜜生肌膏与对照组OD值比较差异有显著性统计学意义(P<0·05)。结论:15·625mg/ml浓度冰蜜生肌膏对成纤维细胞的生长有明显促进作用(P<0·05),药物浓度在15·625~62·5mg/ml时其作用随药物浓度升高而增加,并在浓度为62·5mg/ml时达到最大效应值(P<0·01),当药物浓度大于62·5mg/ml时则作用趋向于饱和,提示一定浓度范围内的冰蜜生肌膏药液能明显增加成纤维细胞数量,且促进作用和浓度呈显著依赖性。     

Survivin、bFGF在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的探讨survivin、bFGF的表达与肝癌发生、发展及转移的关系并分析survivin与bFGF表达两者之间的联系。方法采用免疫组织化学方法（SABC法）检测54例肝细胞肝癌和10例正常肝组织中survivin和FbGF的表达。结果survivin和bFGF在正常肝组织中均不表达。肝癌组织中survivin和bFGF的阳性表达百分率分别为70．4％和74．1％，与正常肝组织相比具有非常显著性差异（P〈0．01）。suvivin与bFGF二者共同表达率为61．1％，其表达阳性程度呈显著正相关（P〈0．01）。结论联合检测Survivin和bFGF有助于肝癌病理分级、恶性程度判定和预后判断。survivin和bFGF可作为肝癌早期诊断、治疗和判断预后的新靶点。