一腓骨肌萎缩症家系临床及基因分析

目的分析一腓骨肌萎缩症家系的临床表现及不同基因检测方法的特点。方法收集一CMT家系8名成员临床资料,并应用等位基因特异性PCR-双酶切方法及多重连接依赖的探针扩增技术(MLPA)检测PMP22基因突变情况,同时选择60名性别、年龄无明显差异的健康人做为对照组。结果该家系中患病者以行走不稳、跨阈步态,伴有弓形足为主要临床表现。该家系中5名成员经等位基因特异性PCR-双酶切及MLPA方法均检测出PMP22基因重复序列,其中出现临床症状的有4名(Ⅱ3、Ⅱ9、Ⅱ11、Ⅲ7),未出现临床症状但基因检测结果示PMP22基因重复序列的为携带者有1名(Ⅲ5),家系中余3名成员及对照组60名均未见重复序列。结论基因检测在明确CMT诊断中起重要作用,且MLPA法筛查基因时操作更简便、灵敏度更高、特异性更好。     

研究表明检测膀胱癌的四种探针缺一不可

美国伊利诺斯州Des Plaines雅培分子医学部临床研究员Juliann Dziubinski博士在美国泌尿外科学会年会（AUA）上报道说，他们开展的膀胱癌诊断检测有效性的分析结果显示，所有用于膀胱癌检测的4种探针在检测重大恶性肿瘤中均是必不可少的；且每一种检测探针在高分期和高分化的膀胱肿瘤探查中均分别起有重要作用。     

泪小管断离吻合术的新方法

我科自 1 995年元月以来 ,采用注射针头自制鱼钩形探针固定 ,对 5例泪小管断离行泪小管吻合术 ,取得较满意的效果 ,现介绍如下 ;1　一般情况　 5例均为下泪小管断离 ,男性 ,年龄1 8～ 3 5岁 ,受伤原因 ,金属物击伤 2例 ,拳击伤 2例 ,摔伤 1例 ,创口组织边缘不整齐 ,手术时间均在伤后 2 4小时之内。2　材料与方法2 .1　鱼钩形探针的制作 ,用 5ｍｌ 1次性注射针头 ,尖端磨成钝园 ,弯曲成鱼钩形 ,酒精浸泡消毒备用。2 .2　 2 %利多卡因作筛前神经阻滞及眶下神经阻滞麻醉 ,泪点扩张器扩张上泪点 ,鱼钩形探针自上泪点插入 ,顺着上泪小管到泪囊或…     

用分子探针杂交法观测多次献血对造血系统的影响

目的建立非同位素标记的探针杂交测定外周血白细胞端粒DNA长度的方法,借此探讨无偿献血对献血者造血系统的影响。方法酚/氯仿提取基因组DNA,限制性内切酶消化,琼脂糖凝胶电泳,非同位素标记的探针Southern印迹杂交,化学发光X线片曝光显示杂交谱带,积分光密度扫描计算TRF值。结果所测样本获得了较好的低背景杂交谱带,测得35～40岁无偿献血组TRF值平均为11.73kb,相应无献血史对照组平均为11.78kb。结论建立了非同位素标记的探针检测端粒DNA的方法,用上述方法初步显示了固定的长期无偿献血并未对献血者的造血系统产生负面影响。     

cDNA探针对高辛标记法检测肺中诱生型一氧化氮合成酶的表达

目的；探讨内毒素（ＬＰＳ）诱导后家兔肺组织中诱生型一氧化氮合成酶的表达。方法：采用地高辛标记ｉＮＯＳ探针，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交技术和比色法检测ｉＮＯＳ表达。结果：经内毒素导后ｉＮＯＳ在家兔肺组织中有表达，注射ＬＰＳ５小时后表达量最大，２４小时表达最减少。结论：地高辛标记ｉＮＯＳｃＤＮＡ探针可较好地用于ｉＮＯＳ基因表达的研究。     

用DIG标记的寡核苷酸基因探针杂交技术进行人轮状病毒VP7G血清型鉴定

目的：建立用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ，ＤＩＧ）标记的寡核苷酸基因探针鉴定Ａ群轮状病毒ＶＰ７Ｇ血清型的分子杂交技术，并应用该技术研究河南Ａ群轮状病毒的Ｇ血清型分布。方法：根据轮状病毒编码糖蛋白ＶＰ７的基因核苷酸序列，选择该基因高保守区序列中与ＶＰ７Ｇ血清型高度相关的核苷酸片段，人工合成，并用ＤＩＧ标记。在优选的杂交条件下进行杂交：结果：①Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３和Ｇ４四种Ｇ血清型特异性寡核苷酸探针只与同血清型的轮状病毒参考毒株杂交，无交叉杂交现象。灵敏度和特异性达到放射性同位素３２Ｐ标记的水平。②１８８份经ＰＡＧＥ确定的轮状病毒阳性标本中，７９份（４２．０％）、３５份（１８．６％）、１５份（７．９％）分别与Ｇ１、Ｇ２或Ｇ３型探针杂交；未检出Ｇ４型；５６份（２９．８％）未能分型；３份分型特殊。结论：该Ｇ血清型分型技术具有高度特异性和灵敏度     

聚合酶链反应产物特异性的阳性证实

以聚合酶链反应(PCR)法在mRNA水平检测T淋巴细胞受体α链可变区基因表达为例,介绍用~(32)P标记的人工合成寡核苷酸探针对PCR产物特异性作阳性证实的方法。该法以干琼脂糖凝胶作为支持物、相对较为简便和省财。用Ca探针以干凝胶作支持物的杂交结果,证实29个Vα基因的PCR扩增中物均为特异性的,放射自显影的带型与位置和溴乙锭染色所示完全吻合。     

痘苗病毒寡核苷酸检测芯片的设计及研制

目的 对痘苗病毒进行寡核苷酸检测芯片的初步研究，为建立寡核苷酸芯片检测该类病毒提供初步研究依据。方法 根据痘苗病毒特异基因设计寡核苷酸探针，人工合成探针后制备寡核苷酸芯片。在病毒感染的不同阶段提取病毒样品DNA及阴性样品DNA，采用限制性显示技术标记，标记样品与芯片杂交后，用Agilent芯片扫描仪检测杂交结果。结果 芯片与病毒样品杂交有较强的杂交信号，而与阴性样品杂交除阳性探针外均无信号。结论 病毒样品与阴性样品杂交信号区别明显，在病毒感染的各个时段也都有明显的杂交信号，反映了寡核苷酸芯片具有较高的特异性和灵敏度。