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1.
目的构建带有亲和素标签的汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)表达质粒,转染HEK293T细胞并表达后,鉴定与其相互作用的宿主蛋白。方法合成亲和素标签基因(SF)与HTNV NP基因,先后克隆入哺乳动物真核表达载体pCAGGS,构建带有亲和标签SF的HTNV NP表达质粒,酶切鉴定重组质粒,获得的重组质粒命名为pCAGGS-SF-NP。将重组表达质粒瞬时转染到HEK293T细胞中, Western blot法检测重组质粒的表达;瞬时转染并收获蛋白样品,与StrepTrap~(TM) HP琼脂珠混匀后, 4℃过夜孵育;转移到层析柱中,经缓冲液洗涤、脱硫生物素洗脱完成亲和层析,获得洗脱样本;洗脱样品进行SDS-PAGE,分离得到与NP相互作用的宿主蛋白。结果酶切鉴定结果表明成功构建pCAGGS-SF和pCAGGS-SF-NP,重组质粒成功表达串联SF与NP的融合蛋白;在亲和层析过程中,成功特异富集融合蛋白SF-NP;洗脱样品成功分离出与NP相互作用的宿主蛋白。结论构建的重组表达质粒可以在真核细胞中成功表达融合蛋白SF-NP并获得了与NP相互作用的宿主蛋白。 相似文献
2.
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)与Smad2/3信号传导介导肾小管上皮细胞转分化(EMT)与幼鼠慢性肾间质纤维化的相关性,以及血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的干预作用。方法本研究以80只幼年雌性SD大鼠为实验动物,制备7/8肾切除残肾慢性进展性肾功能衰竭模型。模型成功后随机将动物分为假手术组、7/8肾切除未治疗组和7/8肾切除干预治疗组。以模型制备后第2、4、8、12周为不同时间点。检测各时间点大鼠肾组织常规病理;采用免疫组织化学染色检测残肾组织中TGF-β1、Smad2/3:α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白及纤维连接蛋白(FN)在肾组织表达趋势。结果实验第2周时未治疗组肾小管间质大量炎性细胞浸润、肾小管上皮细胞肿胀、肾小管间隙加宽。至第12周未治疗组肾小管广泛扩张、基底膜增厚、皱缩或断裂,间质纤维化明显。而治疗组残肾组织病理变化较未治疗组有明显改善。免疫组织化学半定量分析显示未治疗组TGF-β1阳性细胞或阳性小管染色积分值呈逐渐升高趋势。对照组与未治疗组各时间点相比较差异有统计学意义(P<0.05)。Smad2/3表达趋势与TGF-β1相似。α-SMA蛋白表达趋势同步上调,E-钙黏连蛋白同步下调,未治疗组各时间点FN均呈现逐渐升高趋势(P<0.05)。未治疗组TGF-β1、Smad2/3、α-SMA、FN各指标不同时间点免疫组织化学蛋白染色积分值呈正相关,而与E-钙黏连蛋白表达趋势呈负相关(P<0.01)。干预组不同时间点TGF-β1、Smad2/3、α-SMA和FN蛋白表达趋势明显弱于未治疗组,但强于对照组,而E-钙黏连蛋白表达下调(P<0.01)。结论在幼年期肾损伤过程中,TGF-β1高表达与Smad2/3分子使其高表达,可能通过介导EMT导致肾小管间质区细胞外基质(ECM)异常合成与沉积,最终引起肾小管间质纤维化形成。早期给予ACEI干预可改善这种病理变化。 相似文献
3.
腰椎穿刺术是儿科常用的诊断神经系统疾病的技术操作手段,常用于脑脊液检查及鞘内注射药物等。传统的腰椎穿刺针相对较粗,在新生儿腰穿时容易导致失败和损伤性出血,成功率低[1]。近年来,我科采用改良头皮针代替腰椎穿刺针对新生儿进行腰椎穿刺术,一次穿刺成功率高,取得良好临床效果,现报道如下。 相似文献
4.
<正>通过对181例过敏性紫癜(HSP)患儿的临床资料进行回顾性分析,探讨HSP肾脏损害的相关危险因素,报告如下。1资料与方法1.1临床资料:选择2004年1月至2007年7月在山西医科大学第一医院儿科住院的181例初发或复发HSP患儿,均符合诸福棠《实用儿科学》第7版的HSP诊断标准。收集相关资料。按肾脏受累与否将患儿分为A组(非肾炎组)及B组(肾炎组),其中A组140例(77.3%),B组41例(22.7%)。1.2观察指标:对2组的流行病学特征包括性别、年龄、发病季节、过敏史、近期感染史、相关诱因各指标分别进行分类变量的数据转换,赋值分别为0、1;计量资料包括血小板计数、红细胞沉降率、抗链球菌溶血素(ASO)、血清IgA和C3水平。 相似文献
5.
目的探究在宫颈病变患者中行阴道镜联合液基细胞学技术(LCT)检查的临床效应。方法 1209例患者行LCT检查,其中284例LCT阳性患者行阴道镜检查,分析两种方法间对比病理学诊断的差异性。结果敏感性方面联合方式较LCT高6.84%,特异性方面联合方式较LCT、阴道镜分别高26.41%、14.7%且差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞学、阴道镜联合检查可互相补充、相互完善,提高早期诊断、治疗可能性,减少肿瘤在宫颈的发生率,产生有效防治效果。 相似文献
6.
目的 探讨不同剂量血必净(Xue Bi Jing,XBJ)治疗对爆炸致兔急性肺损伤(ALI)细胞因子调节作用的研究。方法 选取兔40只,随机分为5组,每组8只:设正常组为A组、设模型组为B组、设低、中、高剂量XBJ干预组分别为C组、D组和E组。采用空气爆炸致兔胸部,制作ALI模型。建模后4h、24h后采样,选取实验兔血清、支气管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA方法测定血清和BALF中TNF-α、IL-6、IL-10的含量,选肺作病理学和肺干/湿重比(W/D)检查。结果 测定W/D、TNF-α、IL-6、IL-10中研究发现B组与A组比较显著升高(P0.05),而C、D、E组与B组比较显著降低(P0.05),且以E组降低最明显(P0.05);B组病理研究显示可见肺间质、肺泡明显水肿,肺泡断裂破坏,腔内大量红细胞、炎性细胞渗出集聚为明显,D、E组比B组明显减少(P0.05)。结论 不同浓度XBJ治疗爆炸致兔ALI显著减轻,以大剂量XBJ干预效果最好,可以抑制TNF-α、IL-6表达和促进IL-10升高,对细胞因子有调节作用,对肺有保护作用。 相似文献
7.
目的 探讨胃癌患者胃癌组织中FAF1、Livin蛋白的表达变化及其临床意义.方法 用免疫组化染色SP法检测53例胃癌患者病变组织及50例浅表性胃炎患者正常胃黏膜组织中FAF1、Livin蛋白的表达水平,并进行相关性分析.结果 胃癌组织中FAF1蛋白表达率(28.30%,15/53)明显低于正常胃黏膜组织(84.00%,42/50) (P <0.05);Livin蛋白表达率(73.58%,39/53)明显高于正常胃黏膜组织14.00% (7/50) (P <0.05);在胃癌组织中FAF1蛋白表达与胃癌组织学分化程度有关(P<0.05);Livin蛋白表达与胃癌肿瘤大小、浸润深度、分化程度、癌细胞转移及TNM分期有关(P<0.05);FAF1、Livin蛋白在胃癌组织中的表达水平无相关性(r,=0.307,P>0.05).结论 FAF1蛋白的表达缺失可能参与胃癌的形成并抑制组织细胞的分化.胃癌的发生、发展、浸润、转移可能与Livin蛋白异常高表达有关.联合检测FAF1、Livin蛋白为胃癌的早期诊断及推断演进方向提供重要依据. 相似文献
8.
9.
10.
探究异牡荆素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流的影响。该实验采用MTT检测法探究异牡荆素的安全范围,结果显示该药物的IC5010~30μmol·L~(-1),而膜片钳实验所选用的药物浓度1~3μmol·L~(-1)均在该安全范围之内。此外,采用主动脉逆行灌流单酶解法得到单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术引导、记录大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)并分析在给予异牡荆素(IV)前后该电流特征的变化。当IV终浓度低于0.1μmol·L~(-1)时,其对Ito无明显影响,但随着浓度的升高(≥0.3μmol·L~(-1)),Ito峰值逐渐降低[由给药前的(32.32±2.9)p A/p F分别降为(25.83±4.3)p A/p F,1μmol·L~(-1)IV和(19.51±3.5)p A/p F,3μmol·L~(-1)IV],呈现出浓度依赖性抑制现象。在1~3μmol·L~(-1)浓度内,IV使Ito的I-V曲线明显下移。激活曲线结果显示,IV可使最大半数激活电位(V1/2)向正值方向移动[给药前V1/2为(19.59±1.6)m V,给药后V1/2分别升高(22.81±1.7)m V,1μmol·L~(-1)IV;(28.86±1.4)m V,3μmol·L~(-1)IV],同时激活曲线右移。Ito稳态失活曲线的最大半数失活电位(V1/2):给药组(-61.81±1.3)m V,1μmol·L~(-1)和(-71.50±1.4)m V,3μmol·L~(-1)较给药前(-51.43±0.99)m V显著降低。而就失活后恢复曲线的失活时间常数(τ)而言,给药后的τ较给药前明显升高[给药前(94.89±0.73)ms;给药后(118.5±1.5)ms,1μmol·L~(-1);(162.4±1.4)ms,3μmol·L~(-1)],IV使Ito的失活后恢复曲线右移,提示其能延长瞬时外向钾通道的失活后恢复时间。异牡荆素对大鼠心室肌细胞的Ito具有明显的抑制作用。 相似文献