钙蛋白酶活化在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨钙蛋白酶在小鼠心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤中的作用。方法:采用结扎/松解左冠状动脉前降支的方法建立小鼠心肌I/R模型。将实验动物随机分为假手术组、I/R组(冠状动脉结扎45 min,再灌注3h)及PD+I/R组(I/R前30 min静脉注射钙蛋白酶抑制剂-PD150606 1 mg/kg)。再灌注结束后,测定各组心肌梗死面积、细胞色素C含量、caspase-3活性。结果:与I/R组相比,PD150606预处理组心肌梗死区域面积明显减小,且PD150606能明显抑制由I/R引起的细胞色素C含量及caspase-3活性增加。结论:钙蛋白酶活化介导的心肌细胞凋亡在小鼠心肌I/R损伤中发挥了重要的作用。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注期细胞凋亡的干预

目的:研究胰岛素对减轻脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法:制备肾血管性高血压大鼠(RHR),用线栓法复制大脑中动脉阻塞(MCAO),造成缺血2h后分别再罐注1,3,5d,并于再罐注后开始使用胰岛素,采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测凋亡细胞的变化。结果:实验组TUNEL阳性细胞明显减少(P<0.05)。结论:胰岛素减轻脑缺血再灌注损伤的机制与减少再灌注后细胞凋亡或死亡有关。     

肺癌细胞凋亡和P53蛋白表达的临床意义

目的探讨肺癌细胞凋亡、P53蛋白表达的临床意义。方法28例肺癌患者,采用免疫组化法检测P53蛋白,采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,并与临床指标进行相关分析。结果在鳞癌、腺癌、小细胞癌中,小细胞癌凋亡指数最低(P<0.05),术后生存期超过五年者凋亡指数明显高于术后生存低于5年者(P<0.01)。P53蛋白表达在术后生存期超过5年者和术后生存期低于5年者有显著差异(P<0.01)。结论肺癌细胞凋亡指数和P53蛋白表达高低与术后生存期有关,故肺癌细胞凋亡指数和P53蛋白表达可作为估计术后生存期的指标。     

人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒诱导U87-MG凋亡和Caspase-3的表达

目的研究人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒对U87胶质瘤细胞的作用。方法采用modified-SESD法制备人参皂甙Rg3-聚乳酸(PLA)纳米粒,采用四甲偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT),流式细胞技术(FCM)和Western blot研究人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒对U87胶质瘤细胞周期和凋亡的影响。结果 Rg3-聚乳酸纳米粒抗肿瘤增殖作用呈剂量依赖性,人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒通过与细胞核中DNA作用改变细胞生长的周期,造成在G0-G1期阻滞,引起细胞凋亡。结论表明人参皂甙Rg3-聚乳酸纳米粒在胶质瘤的综合治疗方面有广阔的应用前景。     

兔寰枢椎前脱位不全脊髓损伤早期细胞凋亡的实验研究

目的制备伴脊髓不全损伤兔寰枢椎前脱位模型,观察模型早期脊髓神经细胞凋亡的变化。方法建立伴脊髓不全损伤兔寰枢椎前脱位模型,采用原位末端转移酶标记技术（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediatednick-end labeling,TUNEL）检测术后6 h、24 h、72 h损伤节段脊髓细胞的形态及数量变化。结果伤后6 h,损伤节段脊髓可见阳性神经细胞大量表达,至24 h损伤段阳性神经细胞达高峰,持续至72 h阳性神经细胞数见下降。各时间点与假手术组比较,损伤段脊髓神经细胞凋亡数均增加（P〈0.05）,凋亡的神经细胞数在24 h较6 h、72 h均更多（P〈0.05）。结论通过手术方式可成功制备寰枢椎前脱位并脊髓损伤模型,在模型寰枢椎可靠固定的前提下（未复位）,脊髓损伤逐渐加重,脊髓损伤后广泛存在细胞凋亡。     

三氧化二砷对多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞凋亡和细胞因子表达的影响

 目的 分析三氧化二砷（As2O3）对多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓间充质干细胞（MSC）凋亡及其IL-6、IL-1β、SCF表达的影响,探讨As2O3可能的新的作用机制和MSC作为治疗靶点的可行性。方法 含10 %FBS的1640培养液培养MSC,以终浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8 μmol／L的As2O3作用MSC 8 h,倒置光学显微镜和Annexin V／FITC-PI双染法荧光显微镜下观察细胞凋亡,RT-PCR检测分析IL-6、IL-1β、SCF细胞因子表达的变化。结果 As2O3以浓度依赖方式诱导MM患者MSC凋亡,细胞胞膜皱缩,胞核解体,凋亡小体形成;As2O3抑制MSC IL-6、IL-1β、SCF的表达,药物浓度在0 ~ 0.6 μmol／L时对IL-1β的抑制与浓度成正比关系,浓度大于0.6 μmol／L时对IL-1β的抑制作用无显著差别,对IL-6和SCF的抑制呈药物浓度依赖性。结论 As2O3能诱导MM患者MSC的凋亡,明显抑制其IL-6、IL-1β、SCF的表达,这可能是有效治疗MM的靶点和机制之一。     

多氯联苯对胎鼠神经干细胞Nnat基因表达的影响

目的探讨环境污染物多氯联苯Aroclor 1254对神经发育损伤的作用机制．方法不同剂量的Aro-clor1254（A1254）作用于胎鼠的神经干细胞（NSC）72h,通过实时定量RT-PCR检测Neuronatin（Nnat）mRNA的表达,Westernblot检测Nnat蛋白质含量和流式细胞技术检测细胞凋亡情况．结果（1）免疫荧光显示所培养细胞表达Nestin,且能进一步被诱导分化;（2）随着A1254剂量增加,NnatmRNA和蛋白质表达水平下降,NSC细胞凋亡增加,差异有统计学意义（P〈0．05）．结论多氯联苯可能通过下调Nnat基因表达,神经细胞凋亡增加,导致胎儿的神经发育损伤．     

凋亡相关基因Bcl-2、Bax在相对静息期增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中的表达及分布

目的　了解相对静息期增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中凋亡特性和凋亡蛋白的表达分布。方法　利用免疫组化的方法 ,检测静息期增生性瘢痕、瘢痕疙瘩凋亡相关蛋白的表达分布和强弱。结果　发现两者的表达均处于瘢痕上皮的基底细胞层、小血管、及皮肤附件周围细胞。增生性瘢痕中 ,Bax在上述区域的表达更强 ,瘢痕疙瘩中Bax表达 ,较Bcl-2弱 ,在瘢痕疙瘩中发现 2例在瘢痕中心区的Bcl- 2弱表达。结论　静息期增生性瘢痕、瘢痕疙瘩 ,有着与增殖期不同的凋亡特性 ,凋亡上皮的基底层细胞、小血管、残存的皮肤附件周围的细胞 ,可能在瘢痕日后的凋亡中发挥重要的作用     

损伤性窒息诱导癫痫的实验研究

目的：研究损伤性窒息致癫痫（ＥＰ）发生的神经细胞形态学改变，以探索ＥＰ发生的机制。方法：通过损伤性窒息ＥＰ的动物模型建立，观察损伤后ＥＰ发生率，神经细胞超微结构变化，海马神经元密度等分析与ＥＰ发作有关的神经细胞形态学改变及相互关系。结果：损伤性窒息后２４小时后ＥＰ发生率为４６．２％（Ｐ＜０．０５）。发作形式：主要为狂奔、全身性痉挛及局限性痉挛。神经细胞超微结构改变显示，除线粒体肿胀外，还有细胞固缩，胞浆浓缩，胞膜内陷，染色体呈块状集聚，细胞泡状改变及凋亡小体形成等凋亡特征。损伤后有ＥＰ发作比无ＥＰ发作者改变更为多见。海马ＣＡ１区神经元细胞密度分析显示，损伤性窒息可导致海马ＣＡ１区神经元密度减少（Ｐ＜０．０５）。结论：损伤性窒息引起脑损伤可诱发ＥＰ，而ＥＰ反复发作又加重神经细胞损害的程度和范围，两者互为因果，提示中断初始的ＥＰ发作，有利于治愈ＥＰ和保护神经细胞功能     

转化生长因子-β通过PI3K/AKT信号通路促进人肺腺癌细胞株A549的增殖作用

目的 探讨转化生长因子-β(TGF-β)在人肺癌细胞株A549中对细胞增殖的影响及其机制.方法 通过抑制组50例和促进组50例两个方面验证TGF-β对肺癌细胞株A549的促增殖作用,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖速率,流式细胞仪检测细胞的早晚期凋亡和细胞增殖状态.结果 经过siTGF-βR2处理的细胞,细胞增殖率为(91.8±2.3)%,增殖能力明显减弱;而经过rhTGF-β处理的细胞,细胞增殖率为(112.8±5.6)%,增殖能力则明显增强.流式细胞仪结果显示各组的凋亡率分别为:空白组(6.81±0.11)%,随机干扰siRNA组为(6.75±0.12)%,rhTGF-β1组为(6.10±0.10)%,siTGF-βR2组为(7.77±0.09)%,LY294002组为(7.82±0.14)%.结论 TGF-β通过PI3K/AKT信号通路促进人肺腺癌细胞株A549的增殖.

Abstract：

Objective To investigate the effect of transforming growth factor (TGF)-β in human lung cancer cell line A549 on cell proliferation and its mechanism. Methods TGF-β promoted proliferation of human lung cancer cell line A549 (50 cases), which was validated both in respect of inhibition and promotion. Cell proliferation rate was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT). The apotosis and proliferation were analyzed by flow cytometry in early and later stages of cells. Results Cell proliferation rate of A549 ceils was (91.8 ±2.3)%, which was significantly decreased after treatment with siTGF-βR2. On the contrary, the rate was (112. 8 ± 5. 6)%, which was significantly enhanced after treatment with rhTGF-β. Flow cytometry demonstrted that apotosis rate in control group, random interference siRNA group, rhTGF-β1 group, siTGF-βR2 group and LY294002 group was (6. 81 ± 0. 11 )%, (6. 75 ±0.12)%, (6.10±0.10)%, (7.77±0.09)%, and (7.82±0.14)% respectively. Conclusion TGF-β promotes proliferation of human lung adenocarcinoma cell line A549 through the PI3K/AKT pathway.