miRNA-325-3p通过下调细胞角蛋白13 的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性

目的：探究miRNA-325-3p 及其靶基因细胞角蛋白13（cytokeratin 13，CK13）对鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性的影响。方法：通过miRBase、Targetscan 及Microcosm 三大数据库预测miRNA-325-3p 的潜在靶基因，并通过双荧光素酶活性检测实验进行验证，qPCR检测不同放射剂量下鼻咽癌细胞CNE1 中miRNA-325-3p 及其靶基因的表达水平变化，通过克隆形成实验观察不同放射剂量下过表达miRNA-325-3p 及敲低靶基因后CNE1 细胞克隆形成率的变化，流式细胞术验证过表达miRNA-325-3p及敲低靶基因后CNE1 在不同放射剂量下凋亡水平的变化，MTT法检测miRNA-325-3p 过表达和CK13 敲低组鼻咽癌细胞CNE1在不同放射剂量下的细胞存活率以验证其放疗敏感性的变化。结果：CK13 确认为miRNA-325-3p 的潜在靶基因，鼻咽癌细胞CNE1 经放射处理后，miRNA-325-3p 的表达水平显著升高、CK13 的表达水平显著降低（均P<0.05）。miRNA-325-3p 表达量上调和CK13 基因沉默均显著提高CNE1 细胞的存活率[miRNA上调时：（60.14±3.55）% vs（19.23±3.42）%，t=14.37、P<0.01；CK13 沉默时：（76.15±5.13）% vs（28.53±3.68）%，t=13.06、P<0.01]和克隆形成率，降低了凋亡率[miRNA 上调时：（27.95±2.67）% vs（51.68±3.47）%，t=9.39、P<0.01；CK13 沉默时：（20.31±2.62）% vs（38.14±3.83）%，t=6.66、P<0.01]。结论：miRNA-325-3p 能够通过下调靶基因CK13的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 对放疗的敏感性。     

嘉定镇社区居民大肠癌不同筛查模式的效果评价

【目的】了解上海市嘉定镇社区居民采取不同方式开展大肠癌筛查的效果?【方法】采用常态化门诊主动筛查和集中式被动筛查两种方式?对符合筛查条件的居民开展大肠癌危险度评估和2次大便隐血检查?对初筛阳性者通知其肠镜检查?掌握动态?做好追踪随访?并对确诊为大肠癌的患者纳入肿瘤人群管理?【结果】4 455名参与大肠癌筛查居民中采取门诊筛查的居民占30.75%?被动筛查的占69.25%?女性占58.38%?男性占41.62%?年龄分组以50~69岁居多?占87.70%?初筛总阳性率为20.97%?两种筛查方式相比?门诊主动筛查的初筛阳性率高于被动筛查(P0.01)?肠镜检查顺应性方面?门诊主动筛查的肠镜检查率远远高于集中式被动筛查?P0.01?通过肠镜检查发现?门诊主动筛查组大肠癌及其癌前病变的检出率均高于集中式被动筛查?【结论】建立以门诊主动筛查为主?集中式被动筛查为辅助的筛查模式?能充分发挥大肠癌筛查的整体作用?     

Fibulin-3表达对恶性胸膜间皮瘤细胞的影响

目的:研究纤蛋白3(fibulin-3)基因过表达/沉默对人恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)细胞系SMC-1的影响,为MPM的治疗寻找新的方法。方法:分别构建fibulin-3过表达和短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)载体,并将SMC-1细胞分别转染空白对照载体(control)、过表达载体(Exp)、过表达对照载体(Exp-NC)、干扰载体(shRNA1、shRNA2、shRNA3和shRNA4)和干扰对照载体(shRNA-NC)。应用流式细胞术检测细胞周期及凋亡,real-time PCR法和Western blot法检测过表达/干扰前后fibulin-3的表达情况。结果:SMC-1细胞转染相应载体后,流式细胞术结果显示,与control组相比,fibulin-3+Exp组的G_2期细胞数量增加(P0.05),shRNA2组的G_2期数量减少(P0.05);凋亡检测结果显示,与control组相比,Exp组的细胞凋亡率下降(P0.05),而shRNA2组的细胞凋亡率上升(P0.05)。分子水平检测结果显示,与control组相比,Exp组fibulin-3和间皮素(mesothelin)的mRNA和蛋白表达水平上调(P0.05),各shRNA组fibulin-3和mesothelin的mRNA和蛋白表达水平下调(P0.05)。结论:本实验构建了fibulin-3基因的过表达及沉默载体,证实转染Exp和shRNA能有效改变fibulin-3的表达水平及SMC-1细胞的生长,为以fibulin-3为靶点的RNA沉默手段应用于临床MPM的治疗提供了实验依据。     

乳腺隆突性皮肤纤维肉瘤2例并文献复习

目的探讨乳腺隆突性皮肤纤维肉瘤(dermato fibrosarcoma protuberans, DFSP)的临床病理特征。方法收集昆明医科大学第一附属医院病理科诊治的2例乳腺DFSP,分析其临床病理特征,并复习相关文献。结果 2例患者均为37岁女性,有乳腺肿块切除史。镜下见梭形肿瘤细胞呈编织、席纹状密集排列,深部呈蜂窝状浸润脂肪组织。免疫组化标记CD34均弥漫阳性,广谱CK、FⅧ-RAg、desmin、S-100均阴性。例1行荧光原位杂交示COL1A1-PDGFB基因融合。术后分别随访12、90个月,患者均无复发转移。结论 DFSP是一种比较少见的软组织肿瘤,发生于乳腺的DFSP更为罕见。粗针穿刺活检标本诊断,需与乳腺原发的梭形细胞肿瘤鉴别,结合肿瘤具体部位、影像学检查及免疫组化综合诊断,必要时辅以分子病理学检测。     

铜绿假单胞菌性角膜炎发病机制的研究进展

铜绿假单胞菌性角膜炎是临床上常见的角膜炎之一,其起病急、发展迅速,并且治疗棘手。若未及时治疗,极易形成角膜溃疡,严重时可致盲。为增加有效治疗的手段,深入研究其发病机制有重要意义。本文就铜绿假单胞菌的致病性与宿主的免疫反应在铜绿假单胞菌性角膜炎的发病机制中所起的作用进行了概述,以期为其治疗的新思路提供理论依据。     

LV-EGFP标记兔角膜基质细胞体外基质层移植的实验观察

目的:探讨兔角膜基质细胞(CSCs)体外移植兔角膜后的存活时间。方法:体外培养原代兔CSCs,并行细胞免疫组化鉴定,利用慢病毒载体(LV)携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染兔CSCs,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞生长状态及荧光强度,体外动物实验,随机分为2组,实验组行LV-EGFP标记的兔CSCs细胞悬液角膜基质注射,对照组等量生理盐水角膜基质注射,转染后1wk,1mo取材冰冻切片观察移植的CSCs荧光,石蜡切片行苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态。结果:LV-EGFP转染兔CSCs在倒置荧光显微镜下24h后可见少量荧光,96h和110h荧光较强,转染后的CSCs与正常CSCs细胞形态无明显差异;转染后1wk,1mo实验组中角膜基质层中可见绿色荧光,对照组中无绿色荧光;石蜡切片1wk实验组见明显上皮细胞增生及角膜轻微水肿,少量炎症细胞浸润,转染后1mo实验组上皮细胞增生减弱,未见角膜层水肿;对照组1wk,1mo均未见明显异常。结论:LV-EGFP标记的兔CSCs行体外角膜基质移植,可在角膜中至少存活1mo,且与邻近组织相容性较好。     

不同放射剂量的^125I粒子对人低分化胃癌细胞影响的动物实验研究

目的探讨不同放射剂量的^125I粒子对BGC823人低分化胃癌细胞的影响。方法将BGC823人低分化胃癌细胞悬液种植于64只BLAB nu/nu裸鼠的皮下,以制备荷瘤鼠模型。待荷瘤鼠模型饲养3周左右、肿瘤生长至0.7-1.2 cm时,将其随机分为4组：空白对照组、低剂量组、中剂量组及高剂量组（n=16）。其中,空白对照组裸鼠植入空白粒子,低、中及高剂量组分别植入放射剂量为1.48×10^-7、2.22×10^-7及2.96×10^-7 Bq的^125I粒子。分别于粒子植入前、植入后7、14、21及28 d,4组均随机抽取4只荷瘤鼠处死,剥取瘤体称重,并计算肿瘤体积;分别于植入粒子后14d和28d,测量4组荷瘤鼠肿瘤组织的细胞凋亡率和细胞周期因子E（cyclinE）mRNA的表达水平。结果①除空白对照组外（空白对照组的变化不大）,低、中及高剂量组的肿瘤体积和肿瘤质量随时间延长均呈下降趋势。粒子植入后7、14、21及28d,低、中及高剂量组的肿瘤体积和肿瘤质量均小于（轻于）空白对照组（P〈0.05）,且在28 d时,低剂量组的肿瘤体积和肿瘤质量均小于（轻于）中剂量组和高剂量组（P〈0.05）。②14d和28d时,低、中及高剂量组的凋亡率均高于空白对照组（P〈0.05）,而cyclinE mRNA的表达水平均低于空白对照组（P〈0.05）。28d时,低剂量组的凋亡率高于中剂量组和高剂量组（P〈0.05）,而cyclinE mRNA的表达水平却低于该2组（P〈0.05）。同组内与14d比较,28 d时除空白对照组的差异无统计学意义外（P〉0.05）,其余3组的凋亡率均较高（P〈0.05）,而cyclinE mRNA的表达水平均较低（P〈0.05）。结论 ^125I粒子组织间植入可有效抑制人低分化胃癌组织的生长,可抑制其cyclinE mRNA的表达;与其他剂量相比（2.22×10^-7 Bq及2.96×10^-7 Bq）,低剂量（1.48×10-7 Bq）的125I粒子持续照射可诱导BGC823人低分化胃癌细胞的凋亡增加。     

腹部按压在全腔肺动脉吻合术后维持血流动力学稳定的临床研究

全腔肺动脉吻合术(total cavopulmonary connection,TCPC)后易出现血流动力学障碍,甚至低心排综合征(low cardiac output syndrome,LCOS).目前的治疗方案多是通过加强补液提高中心静脉压(central venous pressure,CVP)来增加腔静脉向肺的血流,但是过多补液会增加心脏负担,因静水压增高使胸腔积液生成增多,其压迫作用可影响心肺功能,淋巴细胞及血浆蛋白随之丢失影响免疫力.     

FAM83B对肝癌细胞的作用及机制研究

目的 探讨具有序列相似性的家族83成员B（FAM83B）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、Western blotting、免疫组织化学法检测肝癌组织、癌旁正常组织、人类肝癌细胞系（HepG2、Hep3B）、正常人类肝细胞系（LO2）中FAM83B mRNA和蛋白的表达。采用靶向siRNA敲低HepG2细胞系中FAM83B作为si-FAM83B组,HepG2细胞转染si-NC慢病毒载体作为si-NC组。分别用PBS、40 ng/mL胰岛素样生长因子1（IGF-1）处理si-FAM83B组细胞48 h,并将细胞分为si-FAM83B+PBS组和si-FAM83B+IGF-1组,分析敲低FAM83B对肝癌细胞增殖、侵袭、细胞周期和凋亡的影响,并研究敲低FAM83B对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素哺乳动物靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路的影响。结果 肝癌组织FAM83B mRNA和蛋白相对表达量高于癌旁正常组织（P <0.05）。HepG2、Hep3B细胞FAM83B mRNA和蛋白相对表达量高于LO2细胞（P <0.05）。si-FAM83B组FAM83B mRNA和蛋白相对表达量低于si-NC组（P <0.05）。si-NC组与si-FAM83B组24 h、48 h、72 h、96 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点OD值有差异（F =773.510,P =0.001）;②si-NC组与si-FAM83B组的OD值有差异（F =516.980,P =0.000）,si-FAM83B组OD值较低;③两组OD值变化趋势有差异（F =820.782,P =0.000）。si-FAM83B组细胞凋亡率高于si-NC组,侵袭细胞数低于si-NC组（P <0.05）。si-FAM83B组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量低于si-NC组（P <0.05）,LC3-Ⅱ高于si-NC组（P <0.05）。si-NC组与si-FAM83B组Akt、mTOR蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义（P >0.05）。si-FAM83B+IGF-1组PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量高于si-FAM83B+PBS组（P <0.05）,LC3-Ⅱ低于si-FAM83B+PBS组（P <0.05）。si-FAM83B+PBS组与si-FAM83B+IGF-1组Akt、mTOR蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义（P >0.05）。si-FAM83B+PBS组与si-FAM83B+IGF-1组24 h、48 h、72 h、96 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点OD值有差异（F =5211.626,P =0.000）;②si-FAM83B+PBS组与si-FAM83B+IGF-1组OD值有差异（F =453.499,P =0.000）,si-FAM83B+IGF-1组OD值较高;③两组OD值变化趋势有差异（F =384.347,P =0.000）。si-FAM83B+IGF-1组细胞凋亡率低于si-FAM83B+PBS组（P <0.05）,侵袭细胞数高于si-FAM83B+PBS组（P <0.05）。结论 敲低FAM83B可通过沉默PI3K/Akt/mTOR通路抑制肝癌细胞生长,并促进肿瘤细胞自噬。