保存温度及时间对化学发光法测定直接肾素浓度的影响

目的研究样本保存温度及时间对血浆直接肾素浓度(DRC)的影响。方法采集乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝血并分离血浆,于室温和冷藏均分别放置2、4、6、8h;冷冻4、8、12周;冷冻冻融1～3次后采用化学发光法测定DRC,与即刻值比较,差异率超过总变化极限值认为不可接受。结果室温放置2、4、6、8h的DRC均低于即刻值(P0.05),差异率超过17%的样本比例分别为0、0、1/20、4/20;冷藏2、4、6、8h的DRC均高于即刻值(P0.05),差异率超过17%的样本比例分别为0、2/20、4/20、11/20;冷冻12周内所有样本差异率均17%;冻融2次时有1个样本降低超过17%。结论温度影响DRC稳定性,建议样本采集后室温6h内检测,否则应分离血浆冻存于-20℃可稳定12周,避免反复冻融。     

一系列肾小球滤过率计算公式适用性评估

目的评估基于血浆胱抑素C（Cystatin C,Cys-C）和血浆肌酐（Creatinine,Cr）含量建立的肾小球滤过率（Glomerular Filtration Rate,GFR）计算公式在中国健康人群中的适用性。方法从我院健康体检人群中根据体检报告筛选500例健康成人,测定其血浆Cys-C及Cr,并通过以Cys-C为基础的7个公式（Hoek,Orebro,Le Brican,Filler,Larsson,Grubb,Rule）与以Cr为基础的基于我国人口学资料改良的简化MDRD公式,Cockcroft-Gault公式,简化MDRD公式以及基于Cr和Cys-C的我国eGFR课题协作组公式计算得出的GFR进行比较。结果 Hoek、Orebro、Le Brican、Filler、Lars-son、Grubb、Rule、中国课题协作组、C-G、简化MDRD、改良后简化MDRD等公式计算的出的eGFR分别为96.1±15.1、132.6±23.31、01±14.6、117.9±19.9、102.7±19.4、124.7±31.4、99.4±17.3、126±17.5、116.6±20.4、116.9±18.4、126.9±23.2（ml/min/1.73 m^2）。以eGFR 90-160 ml/min/1.73 m^2为正常参考范围,上述公式的符合率分别为63.4%、83%、76%、91.8%、71.4%、73.4%、69.4%、89.2%、89%、88.6%、92.6%。结论目前发表的一系列GFR计算公式的结果存在明显差别,有必要进行更深入的研究来建立一个准确和适用的计算公式。     

相应部位内痔或混合痔同时治疗对降低血栓性外痔复发率的效果

目的探讨血栓性外痔的形成及复发与相对应部位内痔或混合痔的相关性。方法对手术治疗的106例血栓性外痔患者进行随访,观察同时处理相对应部位内痔或混合痔(B组)与单纯摘除血栓痔(A组)两组患者血栓性外痔的复发情况。结果两组病例均手术治愈,创面愈合时间无明显差异(P>0.05);18个月后,B组患者复发率7.1%,明显低于A组患者复发率40.0%(P<0.01)。结论内痔或混合痔的存在是血栓性外痔的重要发病因素。     

核因子κB通路参与缺氧诱导心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α

目的:探讨缺氧刺激能否诱导体外培养心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α),核因子κB(NF-κB)通路是否参与其中,并发挥调节作用。方法:1%O2物理缺氧刺激原代SD大鼠乳鼠心肌细胞,在不同时间点Real-time PCR检测TNF-αmRNA水平;ELISA检测培养上清中TNF-α蛋白水平;Western blot检测胞质NF-κB相关通路蛋白IKKα,IKKβ,IKKBα蛋白及磷酸化蛋白水平以及胞核NF-κB p65蛋白表达;电泳迁移率实验检测NF-κB DNA结合能力。缺氧同时给予NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)刺激心肌细胞,检测细胞核p65蛋白表达,TNF-αmRNA及蛋白水平。结果:缺氧诱导原代心肌细胞表达TNF-α,TNF-αmRNA水平从缺氧1h开始升高,12h及24h达峰值;其蛋白分泌从缺氧6h开始升高,12h和24h达峰值。缺氧激活NF-κB通路:缺氧5min胞质pIKKα/IKKβ表达开始上调,30min达峰值,持续6h;IKKBα表达缺氧5min开始降低,而pIKKBα缺氧30min开始增加;胞核p65蛋白水平缺氧5min上调,1h达峰值,持续6h;NF-κB DNA结合能力缺氧5min后开始增强。PDTC抑制NF-κB活性,有效抑制TNF-αmRNA及其蛋白表达。结论:缺氧通过激活NF-κB通路,诱导心肌细胞自分泌TNF-α,NF-κB在缺氧诱导心肌细胞自分泌TNF-α过程中起正向调节作用。     

关于蛋白质电泳中单克隆蛋白定量及报告标准化的建议解读

国际临床化学与检验医学联合会(International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC)、美国病理家学会(the College of American Pathologists,CAP)和澳大利亚皇家病理学院质量保证计划(the Royal College of Pathologists of Australasia Quality Assurance Programs,RCPAQAP)的调查结果显示,实验室关于蛋白质电泳中单克隆蛋白定量和报告标准化势在必行。该文介绍了加拿大单克隆丙种球蛋白病工作组(Monoclonal Gammopathy Working Group,MGWG)和澳大利亚-新西兰蛋白质电泳报告标准化工作组关于单克隆蛋白术语、电泳检测技术、单克隆蛋白分离及定量中存在的若干问题、蛋白质电泳中存在的干扰以及报告标准化的建议,呼吁国内同行重视蛋白质电泳报告的标准化问题,提高蛋白质电泳报告质量,降低临床差错风险。     

日本积水乳胶凝集法KL-6试剂盒的性能评价

目的评价日本积水公司血清人唾液化糖链抗原6(KL-6)检测试剂盒在罗氏MODULAR P800全自动生化分析仪上的分析性能。方法参照国内行业标准及国际指南的要求,对血清KL-6检测试剂盒在罗氏MODULAR P800生化分析仪上的不精密度、正确度、分析检测范围、临床可报告范围、检测限、生物参考区间验证及抗干扰能力进行全面评价。结果低值和高值2个水平的KL-6质控品日内不精密度分别为3.15%和0.98%,日间不精密度分别为4.99%和1.66%,均低于厂商声明的标准。校准验证结果显示,不同水平校准品测量结果与偏差均2%。线性范围和临床可报告范围分别为50～5 000U/mL和50～15 000U/mL;验证定量检测限(LoQ)为50.0U/mL。以表观健康体检成人各74例的血清标本验证试剂说明书声明生物参考区间,结果只有3例超出,符合率为95.9%,验证通过。采用商业化干扰标准物质检测结果显示,在游离胆红素20mg/dL以下,结合胆红素20mg/dL以下,血红蛋白500mg/dL以下,乳糜微粒2 000FTU以下对检测结果影响轻微。结论日本积水公司血清KL-6检测试剂盒在罗氏MODULAR P800全自动生化分析仪上的分析性能与厂商声明一致,符合临床要求,本检测系统可应用于实验室临床标本检测。     

腺苷酸活化蛋白激酶通过抑制 mTOR 信号通路缓解糖尿病大鼠肾脏细胞外基质沉积

目的：高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素（streptozocin ,STZ）诱导大鼠糖尿病模型,尾静脉注射人重组腺相关病毒介导的截断突变型腺苷酸活化蛋白激酶基因AMPK‐CA（AMPKα1312,T172 D）,观察AMPK基因治疗对糖尿病大鼠肾脏的保护作用并进行相关机制研究。方法24只雄性Wistar大鼠随机分为糖尿病组（n＝16）和普通饮食组（n＝8）,糖尿病组以高糖高脂饮食加小剂量STZ诱导糖尿病模型,8周后再将其随机分为两组,分别经尾静脉导入表达持续激活型AMPK‐CA的重组腺相关病毒rAAV2‐AMPK‐CA和rAAV2‐GFP作为对照,观察12周后处死实验动物,留取肾脏组织。PAS染色观察比较各组大鼠肾脏的病理改变,Real‐time PCR法检测各组细胞外基质的 mRNA 水平变化, Western blot法检测Ⅳ型胶原蛋白α1（Col4α1）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）及磷酸化AMPK、磷酸化的乙酰辅酶A羧化酶（p‐ACC）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化的mTOR及其下游分子磷酸化水平改变。结果与正常对照组（C组）相比,转染rAAV2‐GFP组（GFP组）糖尿病大鼠肾脏内p‐AMPK和p‐ACC蛋白水平显著降低（均 P＜0.05）;与rAAV2‐GFP组相比,转染 rAAV2‐AMPK‐CA的糖尿病大鼠（CA组）体内p‐ACC表达活性显著升高,肾重/体重、肾小球体积、肾小球系膜基质增生等指标有明显改善,细胞外基质纤维连接蛋白（FN）、Col4α1、Col4α5 mRNA表达水平,以及Col4α1、信号分子p‐mTOR、磷酸化的真核延伸因子激酶2（p‐eEF2K）及磷酸化的起始因子4E结合蛋白1（p‐4EBP1）蛋白表达水平显著降低（均 P＜0.05）。结论 rAAV2介导的AMPK‐CA基因治疗可能通过增加糖尿病大鼠肾脏AMPK活性,抑制mTOR信号通路,缓解基质沉积,对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。     

关于蛋白电泳中单克隆蛋白定量及报告标准化的建议解读

国际临床化学与检验医学联合会(International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC)、美国病理家学会(the College of American Pathologists,CAP)和澳大利亚皇家病理学院质量保证计划(the Royal College of Pathologists of Australasia Quality Assurance Programs,RCPAQAP)的调查结果显示,实验室关于蛋白质电泳中单克隆蛋白定量和报告标准化势在必行。该文介绍了加拿大单克隆丙种球蛋白病工作组(Monoclonal Gammopathy Working Group,MGWG)和澳大利亚-新西兰蛋白质电泳报告标准化工作组关于单克隆蛋白术语、电泳检测技术、单克隆蛋白分离及定量中存在的若干问题、蛋白质电泳中存在的干扰以及报告标准化的建议,呼吁国内同行重视蛋白质电泳报告的标准化问题,提高蛋白质电泳报告质量,降低临床差错风险。     

评价CYFRA21—1、NSE和CEA对非小细胞肺癌的诊断价值

目的评价血清CYFRA21—1、NSE和CEA对非小细胞肺癌（NSCLC）辅助诊断的价值。方法检测178例NSCLC患者,98例良性肺疾病（BED）患者和166例健康人血清中CYFRA21—1、NSE和CEA的浓度,CEA采用微粒子酶联免疫化学发光法,NSE和CYFRA21—1采用电化学发光法。结果三项血清肿瘤标志物（TM）在NSCLC中水平显著高于健康人和BLD患者。以健康人为对照组,特异性95％时,cutoff值分别为CYFRA21—12．23μg/L,CEA3．98μg／L,NSE20．39μg／L。对NSCLC诊断灵敏度分别为CYFRA21-1 63．5％,CEA47．8％,NSE29．2％;以良性肺疾病为对照组,特异性95％时,cutoff值分别为CYFEA21-1 3．26pg／L,CEA5．51μg／L,NSE26．14μg／L。对NSCLC灵敏度分别为CYFRA21—1 48．9％,CEA39．3％,NSE16．3％。CYFRA21—1对鳞癌的诊断灵敏度最高（66．2％）,CEA对腺癌的诊断灵敏度最高（53．3％）,NSE在非小细胞肺癌中也有一定的阳性率（13．0％-20．3％）。ROC曲线证实CYFRA21-1对良性肺疾病与非小细胞肺癌鉴别诊断价值最高。结论CYFRA21-1是诊断NSCIE尤其是鳞癌最有价值的TM,CEA对腺癌的诊断价值最高,CYFRA21—1和CEA联合显著提高NSCLC的诊断灵敏度。NSE对NSCLC的诊断价值较小。