基于成分敲出策略辨识四制香附抗痛经的主要效应成分

目的:基于成分敲出策略对四制香附抗痛经的主要药效成分进行初步辨识,为该药材的后续研究提供参考。方法:采用硅胶柱色谱技术结合制备高效液相色谱法(HPLC)对四制香附石油醚部位中具有抗痛经作用的活性成分α-香附酮(A),香附烯酮(B)和sugeonol(C)分别按照敲出A,B,C,AB,AC,BC,ABC的方法不断敲出,从而得到各目标敲出成分A+,B+,C+,AB+,AC+,BC+,ABC+及其相应的阴性样品A-,B-,C-,AB-,AC-,BC-,ABC-,利用HPLC对各目标敲出成分及其阴性样品进行检测,通过小鼠离体子宫平滑肌收缩试验,探究各敲出目标成分及其对应阴性样品、石油醚部位对小鼠离体子宫平滑肌的影响。结果:α-香附酮、香附烯酮和sugeonol这3种成分分别组合敲出的目标成分的抗痛经作用比单独敲出的目标成分强;与石油醚部位比较,阴性样品A-,B-,C-抗痛经作用明显下降;目标成分AB+的抗痛经作用强于敲出目标成分后的阴性样品AB-;阴性样品ABC-仍具有抗痛经作用;各敲出目标成分与其阴性样品的平均抑制率之和均比石油醚部位的平均抑制率大。结论:在中药整体水平上,证明α-香附酮、香附烯酮和sugeonol这3种成分都是香附抗痛经作用的活性成分,并且三者之间可能存在着协同作用,其中α-香附酮与香附烯酮是香附抗痛经作用的主要药效物质,除了目标成分α-香附酮、香附烯酮和sugeonol外,香附中还存在着其他的抗痛经活性成分,各敲出目标成分与其阴性样品(其他成分的混合物)之间均可能存在着拮抗作用。     

淫羊藿-女贞子配伍对糖皮质激素性骨质疏松大鼠TGF-β1/Smads通路的影响

目的:观察淫羊藿-女贞子煎剂及其有效成分提取物配伍对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads通路相关蛋白的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:雄性SPF级SD大鼠49只,随机分为正常组,模型组,淫羊藿-女贞子提取物高、低剂量组(200,100 mg·kg~(-1)),淫羊藿-女贞子水煎剂高、低剂量组(7,3.5 g·kg~(-1))和钙尔奇组(0.277 3 g·kg~(-1))。除正常组外,大鼠两大腿内侧交替肌肉注射地塞米松(1 mg·kg~(-1))造模,每周2次。8周后,观察大鼠体重变化,取大鼠股骨,称量其湿重、干重以及煅烧后的灰重,计算股骨湿重、干重、灰重和体积的比值,采用免疫荧光法检测大鼠股骨TGF-β_1,磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3),Smad4,Smad7蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠体重和骨量均降低(P0.01),骨组织TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达显著降低(P0.01),Smad7蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组体重和骨量均显著增加,各淫羊藿-女贞子煎剂及提取物组大鼠股骨TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01),Smad7蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:淫羊藿-女贞子通过上调TGF-β_1/Smads通路中TGF-β_1,p-Smad2/3及Smad4蛋白表达,下调Smad7蛋白表达,增强成骨细胞功能,减少GIOP大鼠骨量丢失。     

HMGB1对人肺成纤维细胞ERK1/2-NF-κB信号通路的影响及补阳还五汤含药血清的干预作用

目的:观察肺纤维化中诱导免疫损伤的高迁移率族蛋白Box-1(high mobility group Box-1 protein,HMGB1)刺激人肺成纤维细胞(HFL1)后细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2),核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路的活化情况,以及补阳还五汤含药血清对HMGB1刺激HFL1后以上信号通路的干预作用。方法:采用含药血清药理学的实验方法,以5%,10%,15%,20%的补阳还五汤含药血清和空白血清来干预HMGB1诱导刺激的HFL1细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞总蛋白中ERK1/2,胞浆胞核中NF-κB p65蛋白的表达。结果:与空白组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P0.05,P0.01);与20%空白血清预培养加HMGB1组比较,HMGB1刺激组诱导后ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达均增高(P0.05);与HMGB1刺激组比较,补阳还五汤含药血清各组能够降低ERK1/2蛋白,胞浆和胞核中NF-κB p65蛋白及IL-1β含量的表达,其中15%和20%补阳还五汤含药血清组降低ERK1/2的表达(P0.05);胞浆10%补阳还五汤含药血清组和胞核20%补阳还五汤含药血清组降低NF-κB p65蛋白的表达(P0.05);15%补阳还五汤含药血清组降低IL-1β的含量(P0.05)。结论:补阳还五汤含药血清在体外实验中,可抑制HMGB1引起的人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路的活化,减少IL-1β等炎症因子分泌。提示补阳还五汤可能通过调控人肺成纤维细胞中ERK1/2/NF-κB信号通路,防治肺纤维化的发生发展。     

没食子酸通过P13K/AKT 信号通路影响胃癌MGC-803细胞侵袭性

目的 探讨没食子酸(gallic acid,GA)对胃癌MGC-803细胞侵袭能力的影响及机制。方法 体外培养胃癌MGC-803细胞,噻唑蓝（MTT）法观察细胞的生存率;transwell 小室法检测GA 对MGC-803细胞侵袭能力的影响;Western-blotting 技术检测没食子酸对P13K/AKT 通路相关因子( PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT) ,细胞基质金属蛋白酶( MMP2、MMP9) 蛋白表达的改变。结果 MTT检测6.25～50μmol·L-1 GA可抑制MGC-803的生长,并呈剂量依赖性（P＜0.05）;transwell 小室法显示,与对照组比较,经GA处理后MGC-803细胞侵袭能力明显降低（P＜0.05）;Western-blotting结果显示,没食子酸处理后的MGC-803细胞PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降,同时加入P13K 抑制剂后,显示可抑制P13K/AKT 通路活化,抑制MMP2 和MMP9 的表达;结论 没食子酸可有效抑制胃癌MGC-803细胞侵袭能力,其机制可能是通过调控P13K/AKT 信号通路,抑制MMP2 和MMP9 的表达有关。     

薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎大鼠血清OPG/RANKL水平表达的干预作用

目的观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎模型大鼠血清骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平的影响。方法 SD大鼠,随机分为6组,每组10只,其中选取10只作为正常组,其余大鼠采用弗氏完全佐剂复制类风湿性关节炎动物模型,并将造模成功的类风湿性关节炎大鼠随机分为模型组、阳性组(甲氨蝶呤组,3.8mg·kg~(-1))、薯蓣皂苷片高、中、低剂量组(10 mg·mL~(-1)、20 mg·mL~(-1)、30mg·mL~(-1)),连续灌胃给药治疗24 d后处死,采用ELISA法检测血清OPG、RANKL水平。结果薯蓣皂苷片各剂量组大鼠血清OPG、RANKL水平分别为(95.27±4.24)、(76.44±4.09)、(69.26±5.63)pmol·L~(-1)和(96.07±4.94)、(85.41±3.75)、(67.53±2.23)pmol·L~(-1),与模型组((53.92±2.83)pmol·L~(-1)和(116.18±3.02)pmol·L~(-1))相比均有显著性差异(P0.05);OPG/RANKL比值显著高于模型组。结论薯蓣皂苷片可能通过调整OPG/RANKL动态平衡而对破骨细胞功能产生影响,从而防止骨破坏。     

清开灵合头孢哌酮舒巴坦钠治疗老年肺气肿合并感染的观察

目的观察清开灵联合头孢哌酮舒巴坦钠治疗老年肺气肿合并感染的疗效,并探讨其作用机理。方法将50例甘肃省第三人民医院住院部及门诊收治的哮喘患者,按照入院的先后顺序随机分为对照组和治疗组,对照组25例给予头孢哌酮舒巴坦钠,治疗组25例在对照组的基础上合用清开灵注射液。两组患者均以1周为一个疗程,治疗2个疗程后观察其疗效。结果两组患者分别从临床疗效,主要症状体征进行评价,治疗组完全缓解12例,部分缓解11例,无效2例,有效率为92.00%,明显优于对照组的56.00%。两组对比,差异有统计学意义(P0.05)。结论清开灵联合头孢哌酮舒巴坦钠治疗老年性肺气肿合并感染的疗效确切。     

加味桃核承气汤对糖尿病大血管病变大鼠PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨加味桃核承气汤防治糖尿病大血管病变的可能机制。方法 80只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、二甲双胍组、加味桃核承气汤1号方组（中药1组）、加味桃核承气汤2号方组（中药2组）。除正常组外,其余4组高糖高脂饮食6周后通过腹腔注射链尿佐菌素（STZ）40mg/kg建立糖尿病大血管病变模型。造模成功后,正常组和模型组每天采用等量蒸馏水灌胃,中药1组及中药2组分别采用加味桃核承气汤1号方、加味桃核承气汤2号方5.4g/kg/d灌胃,二甲双胍组采用二甲双胍研磨溶液0.156g/kg/d灌胃。灌胃8周后处死大鼠,检测血糖、血脂变化情况,并采用免疫组化观察大鼠胸主动脉PI3K、Akt的染色情况,QRT-PCR法检测大鼠胸主动脉PI3K、Akt mRNA的表达。结果 与模型组比较,加味桃核承气汤与二甲双胍均能够显著降低血糖、血脂、PI3K mRNA、Akt mRNA水平（P＜0.01）,同时减少PI3K(p85)、Akt蛋白在大鼠胸主动脉的表达。其中加味桃核承气汤2号方较1号方能够更有效降脂、降糖（P＜0.01）,较1号方、二甲双胍能更有效降低PI3K mRNA、Akt mRNA水平（P＜0.01）。结论 加味桃核承气汤能够有效防治糖尿病大血管病变,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,减少PI3K、Akt mRNA的表达、降低血糖、血脂有关。此外,加味桃核承气汤2号方较1号方、二甲双胍能更有效防治糖尿病大血管病变。     

通腑泻肺方对ALI/ARDS大鼠呼吸力学的影响

目的观察通腑泻肺方对ALI/ARDS大鼠呼吸力学的影响。方法健康Wistar大鼠30只,随机分为3组:空白组、模型组、中药组,采用尾静脉注射内毒素的方法造成ALI/ARDS模型,中药组予通腑泻肺方进行灌胃,7 d后观察3组大鼠呼吸力学相关指标的变化。结果中药组与空白组相比,Ri、Re、Cydn差异均无统计学意义(P>0.05),表明经过治疗后,受损大鼠呼吸力学的指标得到最大程度的恢复;两组PEF、Fev0.2、Fev0.2/FVC%比较差异均无统计学意义。结论通腑泻肺方能够降低ALI/ARDS大鼠气道阻力,提高其肺的顺应性。     

藤莓汤联合传统改善病情抗风湿药治疗中/高活动度类风湿关节炎患者的疗效观察

目的 观察藤莓汤（Tengmei Decoction, TMD）联合传统改善病情抗风湿药（cDMARDs）治疗中/高活动度类风湿关节炎（RA）患者的临床疗效。方法 选取198例中/高疾病活动度RA患者临床资料进行回顾性分析,根据用药方案分为对照组97例,口服甲氨蝶呤（MTX）、来氟米特（LEF）联合治疗;治疗组101例,口服TMD、MTX、LEF联合治疗,干预时间12周。观察治疗前后28个关节疾病活动评分（DAS28）、RA活动度、28个关节压痛数（TJC28）、28个关节肿胀数（SJC28）、患者对疾病的整体评估（PGA）,类风湿因子（RF）、血沉（ESR）、CRP、PLT情况,同时观察WBC、ALT、AST、BUN、SCr水平。结果 与本组治疗前比较,两组治疗后DAS28、TJC28、SJC28、PGA降低（P<0.01）,对照组CRP、ESR、RF以及治疗组CRP、ESR、RF、PLT水平降低（P<0.01）。与对照组比较,治疗组DAS28、TJC28、SJC28、PGA、CRP及ESR水平降低（P<0.05, P<0.01）。治疗后,治疗组中/高疾病活动度者比例降低,临床缓解及低疾病活动度者比例升高,两组整体比较,差异有统计学意义（Z=-2.308,P=0.021）。治疗组不良反应发生率［2.97% （3/101）］较对照组低［9.28% （9/97）］,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论 TMD联合cDMARDs改善中/高活动度RA患者的临床效果优于单纯cDMARDs治疗。     

葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨葛根素在大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用机制以及与JAK2/STAT3信号通路的相关性。方法:将36只SD雄性大鼠随机分为假手术组12只和造模组24只(其中造模组分缺血再灌注组12只及葛根素组12只)。采用线栓法制备大鼠MCAO模型,于脑缺血2h再灌注24h时用Longa评分法进行神经功能缺损评分,TTC染色法测定脑梗死体积,TUNEL法检测海马组织神经细胞凋亡数,免疫组织化学法检测海马组织磷酸化的JAK2(P-JAK2)、STAT3(P-STAT3)的表达。结果:与假手术组比较,造模组神经功能缺损加重,梗死体积增大,凋亡细胞数增多,P-JAK2和P-STAT3表达水平增高,差异具有统计学意义(P0.05);与缺血再灌注组比较,葛根素组神经功能缺损评分明显下降,梗死体积与凋亡阳性细胞数均见明显减少,P-JAK2及P-STAT3表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:JAK2/STAT3信号通路参与了脑缺血再灌注损伤过程;通过抑制JAK2/STAT3信号通路的异常激活可能是葛根素神经保护作用机制之一。