人高迁移率族蛋白B1、晚期糖基化终产物受体和C反应蛋白与脑外伤术后肺部感染严重程度的相关性及对预后的评估价值

目的探讨人高迁移率族蛋白B1（HMGB-1）、晚期糖基化终产物受体（RAGE）、C反应蛋白（CRP）与脑外伤术后肺部感染严重程度的相关性及对预后的评估价值。 方法前瞻性选取2016年5月至2018年5月于长治医学院附属和平医院接受治疗的182例脑外伤术后肺部感染者,根据肺部感染CURB-65评分系统标准将患者分为轻度组（74例）、中度组（60例）和重度组（48例）,并根据术后30 d临床结局分为生存组（151例）和死亡组（31例）。比较不同感染程度患者血清HMGB-1、RAGE、CRP水平并分析与肺部感染严重程度的相关性。通过Logistic回归分析明确影响患者死亡的危险因素,以受试者工作特征曲线（ROC）评价HMGB-1、RAGE和CRP对脑外伤术后肺部感染者死亡的预测价值。 结果重度组患者HMGB-1水平为（10.22 ± 2.35）μg/L,分别高于中、轻度组[（3.89 ± 1.01）μg/L和（2.00 ± 0.40）μg/L],差异有统计学意义（t = 18.821、29.502,P均< 0.001）;重度组患者RAGE水平为（9.01 ± 2.05）ng/L,分别高于中、轻度组患者[（5.89 ± 1.20）ng/L和（2.12 ± 0.22）ng/L],差异有统计学意义（t = 9.870、28.722,P均< 0.001）;重度组患者CRP水平为（50.33 ± 10.32）mg/L,分别高于中、轻度组患者[（32.33 ± 8.52）mg/L和（15.20 ± 3.52）mg/L],差异有统计学意义（t = 9.930、27.010,P均< 0.001）。中度组患者血清HMGB-1、RAGE和CRP水平均高于轻度组（t = 14.744、26.504、15.729,P均< 0.001）;血清HMGB-1、RAGE和CRP水平均与肺部感染CURB-65评分呈正相关（r = 0.696、0.763、0.851,P均< 0.001）。182例患者的病死率为17.03%（31/182）。死亡组患者呼吸机应用、气管切开、低蛋白血症占比均显著高于生存组,年龄、HMGB-1、RAGE、CRP、降钙素原（PCT）水平均高于生存组（P均< 0.05）。Logistic回归分析年龄、呼吸机应用、气管切开、低蛋白血症、HMGB-1、RAGE、CRP和PCT均为导致患者死亡的危险因素（OR = 2.016、2.423、2.252、1.853、2.606、2.199、1.919、1.904,P均< 0.05）。ROC曲线分析显示血清HMGB-1、RAGE和CRP预测脑外伤术后肺部感染者死亡的敏感性分别为78.02%、82.42%和85.16%,特异度分别为56.04%、69.78%和71.98%,曲线下面积（AUC）分别为0.756、0.801和0.882。 结论血清HMGB-1、RAGE和CRP水平与脑外伤术后肺部感染严重程度呈正相关,且均为导致患者死亡的危险因素,对于预测患者的死亡有较高的临床价值。     

降钙素原、C-反应蛋白在鉴别血流感染菌属中的应用价值

目的:探讨降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)在鉴别血流感染不同菌属的临床应用价值,评价PCT 及CRP水平在肠杆菌科、非发酵菌、葡萄球菌属及肠球菌属中的差异。方法:选取2015 年1 月~2017 年1 月中血培养阳性并同时进行PCT、CRP 测定的患者作为研究对象,PCT 及CRP 检测分别采用电化学发光法和免疫比浊法,数据分析采用SPSS21.0 软件,比较不同菌属间PCT 及CRP 水平是否存在差异。采用Sigma 软件,建立ROC 曲线,计算最佳临界值。结果:PCT 水平在革兰阳性菌与革兰阴性菌中差异具有统计学意义,U 值为4 420.00,P 值为0.004,最佳临界值为1.105 ng/ ml;PCT 水平在凝固酶阳性葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌中差异具有统计学意义,U 值为79.00,P 值<0.001,最佳临界值为0.870 ng/ ml;PCT水平在肠杆菌科与非发酵菌中差异具有统计学意义,U 值为681.50,P 值为0.005,最佳临界值3.310 ng/ ml;葡萄球菌属与肠球菌属间PCT 水平无统计学意义;CRP 水平在以上各分组中差异均无统计学意义。结论:PCT 在鉴别血流感染不同菌属中有一定价值,可在早期对怀疑菌血症患者合理用药提供依据,与血培养联合检测以降低重症患者的抗感染失败风险,提高治疗效率。     

慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响

目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca~(2+)浓度及钙调蛋白(Ca M)表达的影响。方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体。用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-q PCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca~(2+)浓度变化,RT-q PCR和Western blot法检测VSMCs Ca M的mRNA和蛋白表达。结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011TU/L。转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调。慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85%;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca~(2+)荧光强度显著升高,而且Ca M的mRNA和蛋白表达量也显著增加。结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca~(2+)浓度和Ca M表达。     

Myocardin重组蛋白表达及其在人骨髓间充质干细胞重编程为血管平滑肌细胞中的作用

目的:研究心肌素(myocardin)重组蛋白的表达及分离纯化方法,并探讨myocardin重组蛋白对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h BMSCs)向血管平滑肌细胞转分化的作用。方法:构建myocardin原核表达载体,摸索最佳诱导myocardin重组蛋白表达的方法及优化分离纯化方式。使用纳米转导试剂包裹myocardin形成纳米-蛋白复合体,转染h BMSCs,观察蛋白转导效率;蛋白转导成功后,检测血管平滑肌的特异性标志物平滑肌肌球蛋白重链的表达情况,观察h BMSCs向平滑肌细胞转化情况。结果:与传统方法相比较,高浓度法诱导myocardin重组蛋白的表达量更高,新采用的洗脱方式能获取更多的myocardin重组蛋白;纳米-myocardin复合体可成功转染h BMSCs并诱导其向血管平滑肌样细胞转化。结论:Myocardin重组蛋白能被高效转导到细胞内,并促使h BMSCs重编程为血管平滑肌样细胞。     

血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9 与钙化性主动脉瓣疾病的关联机制

目的:探讨血浆前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)与钙化性主动脉瓣疾病(CAVD)的相关性。方法:经心脏彩超筛选CAVD 患者120 例及阴性对照组患者40 例,通过CT 定量评分系统分4 组:AVC 1、2、3 和4 级,并通过软件计算主动脉瓣钙化积分。检测血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、载脂蛋白A1(Apo A1)及载脂蛋白B(Apo B)、脂蛋白(a){LP(a)}和高敏C 反应蛋白(hsCRP)水平以及PCSK9 水平。结果:4组患者LDL-C、Apo B 和Lp(a) 水平差异有显著性(P<0.05),AVC2-4 级患者明显高于AVC1 级,而TG、HDL-C、apo A1 和hsCRP 组间差异无统计学意义。AVC3 级和AVC 4 级的TC 水平高于AVC1 组(P<0.05)。同时,AVC2-4 组血浆PCSK9 水平高于AVC1 组(P<0.05)。将所有人群的主动脉瓣钙化积分与TC(r =0.248,P =0.026),LDL-C (r =0.222,P =0.048),Lp(a)(r =0.276,P =0.013),Apo A1(r =0.245,P =0.012),Apo B(r =0.212,P =0.019)和PCSK9(r =0.309,P =0.005)均存在明显相关性,ApoA1,Apo B 呈正相关。结论:CAVD 患者PCSK9 水平明显高于对照组,PCSK9 与CAVD 的发生存在相关性。     

中药Q0409筛选方改善SAM-P/8小鼠的学习记忆能力

目的:研究中药Q0409筛选方是否能够改善SAM-P/8小鼠的学习记忆能力及其初步机制。方法:4月龄SAM-P/8小鼠、SAM-R/1小鼠和昆明小鼠共91只,分别标记雌雄,根据动物在Morris水迷宫实验找到平台潜伏期的长短,按随机区组法分成5组,即正常对照组、SAM-R/1对照组、疾病模型组、中药Q0409筛选方治疗组和阳性药物(石杉碱甲)组,采用不同的药物或蒸馏水连续灌胃60 d(即从4月龄到6月龄)。第61~65天,先灌胃相应剂量药物或双蒸水,1 h后进行Morris水迷宫实验,观测行为学指标。在第65天,进行水迷宫测试结束后立即处死小鼠,取出脑海马组织,将其一半置玻璃匀浆器中加入预冷生理盐水制成10%(g/m L)匀浆,用于测定脑海马组织匀浆中乙酰胆碱酯酶(ACh E)的活性;将另一半海马组织用4%多聚甲醛固定,然后进行石蜡包埋及切片,进行免疫组化染色以观察β-淀粉样蛋白(Aβ)的表达情况。结果:与疾病模型组相比,中药Q0409治疗组小鼠Morris水迷宫实验中定位航行和空间探索实验的结果显著改善(P0.05),海马组织匀浆ACh E活性显著降低(P0.05);但上述指标与正常对照组和阳性药物组相比差异无统计学显著性。免疫组化观察结果显示,中药Q0409筛选方治疗组雄鼠未见典型的"老年斑",雌鼠可见"老年斑"颜色变浅,两者的海马CA1区Aβ蛋白沉积的阳性面积减少;这些结果与阳性药物组相似。结论:中药Q0409筛选方可有效改善SAM-P/8小鼠的学习和记忆能力,其机制可能与其抑制海马区ACh E活性并减少Aβ蛋白的沉积等有关,其效果与石杉碱甲相似。     

吸烟COPD模型大鼠肺组织内质网相关凋亡蛋白CHOP的表达

目的:研究吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的情况。方法:40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、吸烟2个月组、吸烟4个月组及戒烟组。采用单纯被动吸烟法复制大鼠COPD模型,测各组大鼠0.3秒用力呼气容积与用力肺活量比(FEV0.3/FVC)和最高峰值流速(PEF);采用TUNEL法检测肺结构细胞凋亡情况;采用原位杂交和RT-PCR检测肺组织CHOP的mRNA表达水平;免疫组化和Western blot检测其蛋白质水平;同时采用Western blot检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、p-PERK、真核生物起始因子(e IF)2α和p-e IF2α的蛋白水平。结果:大鼠吸烟2个月后,肺功能较对照组明显下降(P0.05),肺结构细胞凋亡明显增加,凋亡细胞主要是肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和支气管上皮细胞,肺结构出现破坏;吸烟4个月后,FEV0.3/FVC显著下降(P0.05),肺结构凋亡细胞进一步增加,肺结构破坏明显;戒烟组肺功能较4个月组稍好转,肺结构破坏仍明显。与对照组相比,p-PERK、p-e IF2α和CHOP表达在吸烟2个月大鼠中升高(P0.05),在吸烟4个月大鼠中进一步升高(P0.05);戒烟组大鼠CHOP较吸烟4个月大鼠稍下降但差异无统计学意义;PERK和e IF2α在各组大鼠中表达的差异无统计学显著性。肺结构细胞凋亡与CHOP表达呈正相关;结论:吸烟可通过PERK/e IF2α/CHOP信号通路促进CHOP表达,从而促进COPD的发生与发展。     

转录因子MAZ对c1orf109基因转录表达调控的体外研究

目的:本文旨在研究转录因子Myc相关锌指蛋白(MAZ)在体外对人类1号染色体开放阅读框109(c1orf109)基因的转录表达调控。方法:体外条件下,采用凝胶电泳迁移实验筛选c1orf109基因启动子区MAZ的结合位点,并利用本室构建的由c1orf109启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白报告载体与MAZ和转录因子特化蛋白1(Sp1)的表达质粒共转染He La细胞,24 h后,用激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测c1orf109基因的转录表达情况。结果:c1orf109启动子区可与MAZ结合,且有与Sp1共享的结合位点;MAZ与Sp1皆可抑制c1orf109的转录表达,且Sp1的抑制作用大于MAZ(P0.05)。结论:MAZ与Sp1两个转录因子共同调控c1orf109基因在生理及病理条件的表达,且调控方向一致。这种冗余机制调控方式的存在提示该基因的精确表达调控对于细胞行使其生物学功能可能具有重要意义