抗菌肽hCAP-18/LL-375’非翻译区的分析

抗菌肽hCAP 18/LL 37在天然免疫中起重要作用,我们以前的工作发现,hCAP 18/LL 37mRNA在人白血病细胞系中广泛表达,但仅少数细胞系可检测到hCAP 18/LL 37蛋白表达。表明其表达调控主要在转录后水平[1] 。5’非翻译区(5’UTR )存在重要的翻译调控元件,如二级结构和上游开放阅读框对真核细胞翻译调控起重要作用[2 ] ,本文检测白血病细胞系中hCAP 18/LL 37基因5’UTR序列,探讨白血病细胞系是否因为5’UTR异常而引起其翻译阻滞。1　材料与方法1 1　细胞培养　人白血病细胞系Raji、NB4、HL 6 0、J6 1及U937均为我室液氮保存,按常…     

芍药甙配伍阿魏酸对体外培养的大鼠海马和隔区神经元的影响

目的　研究芍药甙配伍阿魏酸对海马和隔区神经元的影响。方法　用新生SD大鼠的海马和隔区神经元进行体外培养 ,分别加入阿魏酸、芍药甙和阿魏酸与芍药甙的混合物 (配伍组 ) ,用MTT测量法测量培养神经元的光密度 (A值 )。结果　海马神经元A值在对照组、阿魏酸组、芍药甙组和配伍组分别为 0 .6 5± 0 .0 9、0 .73± 0 .11、0 .70± 0 .11和 0 .81± 0 .0 8,隔区神经元A值分别为 :0 .6 0± 0 .0 6、0 .6 7± 0 .0 7、0 .6 7± 0 .10和 0 .77± 0 .0 6。与对照组比较 ,阿魏酸组和芍药甙组的A值明显增高 (P <0 0 5 ) ;与对照组、阿魏酸组和芍药甙组比较 ,配伍组 A值明显增高 (P <0 0 1或 P <0 0 5 )。结论　芍药甙配伍阿魏酸可提高芍药甙对海马和隔区神经元的存活和生长的促进作用。     

人NOD2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体的构建

人NOD2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体的构建。以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD2基因启动子不同长度的4段序列,利用特定的限制性内切酶位点,以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构,将这4个序列片段进行酶切并插入表达载体pEGFP-N3中,用Vsp I和Pst I双酶切和PCR鉴定重组质粒,再将重组质粒进行DNA序列分析。构建的重组质粒经脂质体LipofectamineTM2000介导转染HTK293T细胞,转染24 h后加入TNF-α持续刺激细胞24 h或不加TNF-α刺激,在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因绿色荧光蛋白(green fluores-cent proteins,GFP)。结果:pEGFP-N3-NOD2(617 bp)、pEGFP-N3-NOD2(747 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 136 bp)、pEG-FP-N3-NOD2(1 387 bp)分别经酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,构建的4段重组质粒pEGFP-N3-NOD2(617 bp)、pEGFP-N3-NOD2(747 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 136 bp)、pEGFP-N3-NOD2(1 387 bp)转染的HTK293T均能表达绿色荧光,其中构建pEGFP-N3-NOD2(1 387 bp)重组质粒经TNF-α持续刺后激绿色荧光表达最强。4段不同长度的人NOD2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体成功构建,这为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础。     

小鼠肝脏细胞摄取镨的动态研究──电镜和X射线微区分析术观察

在给小鼠１次静脉注射氯化错（６０ｍｇ／ｋｇ体重）后５ｍｉｎ至４８ｈ内的９个间期应用电镜结合Ｘ射线微区分析术，对镨在肝细胞与枯否细胞中的运转进行了追踪观察。在５ｍｉｎ～２ｈ，两种细胞均以胞吞方式摄取肝血窦中含镨微粒，在胞质中形成吞噬体。在吞噬体内，微粒群处于由稀疏至密集的浓缩过程，小吞噬体互相融合。这种胞吞作用在枯否细胞极为活跃，在肝细胞则较微弱。在４～４８ｈ，许多枯否细胞的胞质几乎被吞噬体充满，细胞变性；肝细胞内的吞噬体汇聚于胆小管周围。在胆小管腔内可见高电子致密微粒群，表明镨可经胆汁途径排出。     

丈量爱情的长度

常听北京本地的朋友讲，西单是情感高危区，尤其是在旅游的旺季，或者情人节等常被商家利用的繁多节日里，几乎是每天，都有年轻的情侣在此上演爱情的悲伤剧目：起初不信，但只逛了一次，便被事实说服。     

抗重组人bFGF单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达

目的：从分泌抗重组人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）单克隆抗体（mAb）杂交瘤细胞株B2F3中克隆抗体可变区（V）基因，构建bFGF单链抗体（scFv），并进行可溶性表达。方法：从分泌bFGF mAb杂交瘤细胞株B2F3提取总RNA，用RT-PCR方法扩增抗体重链可变区基因（VH）和轻链的可变区基因（VL）；再通过重叠延伸拼接（SOE）PCR方法，在VH和VL基因之间引入linker（Gly4Ser）3，构建bFGF scFv。将测序正确的scFv基因克隆到表达载体pCANTAB 5E中，选择非抑制型菌株E.coli HB2151进行可溶性表达；经SDS—PAGE检测抗体表达水平，ELISA鉴定其抗原结合活性。结果：测序分析结果显示，VH基因序列全长375碱基对，编码125个氨基酸，VL基因序列全长399碱基对，编码133个氨基酸，二者均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征，含有4个框架区（FR）、3个抗原互补决定区（CDR）及抗体特征性的2个半胱氨酸残基；构建的scFv全长789碱基对，编码263个氨基酸，连接结构为VH-linker-VL。SDS-PAGE分析表明scFv基因在大肠杆菌为可溶性表达，表达产物主要位于周质腔中，表达产物的Mr为27000，与理论预期值相符；间接ELISA检测结果显示原核表达的scFv具有与bFGF特异性结合的活性。结论：成功地克隆bFGF mAb可变区基因，并构建表达bFGF scFv，为下一步研究bFGF抗体人源化改造奠定实验基础。     

兔心肌梗死1周后梗死边缘区心室肌瞬间外向钾电流的变化

急性心肌梗死(AMI)后发生的室性心律失常,是发生心源性猝死的主要原因。心室3层心肌的电生理异质性,在折返性室性心律失常的发生和维持中起着重要作用。本研究以酶解法分离兔AMI 1周后左室梗死边缘区单个心外膜(Epi)、心内膜(Endo)和中层(M)心室肌细胞,应用膜片钳全细胞记录方法,研究AMI后梗死边缘区心室Ito跨壁异质性的变化。1材料与方法1·1实验动物与分组:新西兰纯种大耳白兔30只,雌雄不拘,体重1·5~2·0 kg,随机分为3组,正常对照组(CON组);建立AMI模型的急性心肌梗死组(AMI组)、开胸不结扎血管的假手术组(Sham组)。1·2方法:…     

Le FortⅠ截骨入路至斜坡的应用解剖

目的　为LeFortⅠ截骨入路切除斜坡区病变的临床应用提供解剖学基础。方法　随机选取经福尔马林保存的成人尸头 1 5具 ,用显微解剖技术对LeFortⅠ截骨入路从显露范围、安全程度、美容效果三方面进行评价。结果　斜坡区与脑桥、延髓腹侧及第Ⅴ～Ⅻ对脑神经关系密切 ,两侧毗邻破裂孔、颈内动脉、内耳门及颈静脉孔。颈内动脉管外口、破裂孔、颈静脉孔距中线最小间距分别为 2 2 9、8 4和 1 9 5mm。LeFortⅠ截骨入路与前方、侧方入路相比 ,具有手术野开阔、手术操作安全性高、对斜坡区显露良好 ,面部无瘢痕的优点。结论　了解斜破区各结构的形态及相互间的毗邻关系 ,可提高该区相关手术时的安全度和成功率 ,LeFortⅠ截骨入路可作为斜坡及其周围区域病变手术的一种良好选择 ,值得推广。     

拇背侧皮神经营养血管岛状皮瓣修复拇指软组织缺损

目的：探讨带拇背侧桡或尺侧皮神经营养血管蒂的岛状皮瓣修复拇指软组织缺损的可行性及临床效果。方法：利用拇背侧皮神经营养血管皮瓣修复拇指软组织缺损101例；同时将皮瓣内皮神经与受区内指神经行外膜吻合，重建受区感觉。结果：101例中，97例皮瓣完全成活，1例皮瓣完全坏死．3例皮瓣部分坏死；经吻合神经后，皮瓣能恢复部分感觉。结论：该皮神经皮瓣手术操作简单，皮瓣外形好，部分皮瓣能恢复感觉，是修复拇指软组织缺损的理想方法。     

2例家族性巨大型牙骨质瘤

家族性巨大型牙骨质瘤 (Fimilialgigantiformcementoma)亦称巨大型牙骨质瘤 ,具有家族史及遗传特征 ,是一种发生在颌骨的罕见疾病。现报道如下。1　临床资料病例 1,男 ,35岁 ,因面部逐渐膨隆畸形 2a ,伴上前牙区疼痛 1周而入院。患者于 2a前无意中发现下颌颏部肥大 ,未经治疗 ,以后出现上下前牙龈隆起 ,牙齿向外侧移位。入院前 1周突然出现前牙区疼痛。其父也有颌骨肿大史已行手术治疗。入院体查 :上下颌前部明显膨隆 ,5 - 5　5 - 5　呈扇形移位 ,松动Ⅰ -Ⅱ°,前庭沟膨隆 ,粘膜充血 ,3- 3　舌侧骨隆起 ,质硬无压痛 ,全景片及Dental CT显…