癌症的靶向基因-病毒治疗新进展及抗癌策略

我们创导的“靶向基因-病毒治疗”又有新进展,即癌症的靶向双基因-病毒治疗,能将小鼠移植性肿瘤全部杀灭,研究结果发表于Hepatology及CancerResearch(Highlightpaper)等杂志。在得到好的抗癌作用后,我们着重研究其安全性,故本文又介绍一种独特的癌症双靶向病毒-双基因治疗,其特点是利用癌症特异性启动子调控其特异性抑制基因,如用甲胎蛋白(!-fetoprotein,AFP)调控肝癌特异性抑癌基因LFIRE或HCCS1等,并在此基础上再加一个癌症特异性启动子如hTERT控制腺病毒E1A,构成癌症的双靶向病毒-基因治疗药物,即hTERT-E1A-AFP-E1B-HCCS1(或LFIRE),然后再与一个杀伤功能很强的hTERT-E1A-AFP-E1B-IL-24联合作用,构成癌症的双靶向病毒-双基因治疗。双基因有很好的杀伤性,双靶向有很好的安全性,因此,成为目前开发前景良好的抗癌药物。此外,本文还介绍了一种新型干扰素,它也有可能成为理想的抗癌药物。     

中药成分CDP逆转高甲基化状态的GSTP1基因启动子低转录活性的研究

目的 研究中药成分CDP逆转高甲基化状态的GSTP1基因启动子低转录活性的作用.方法 构建含完全甲基化GSTP1启动子区的重组质粒pGL3-GSTP1prom并转染MCF-7细胞,分别用不同剂量的CDP和5-aza-C作用细胞,检测表达的萤光素酶活性.观察GSTP1启动子转录活性的变化. 结果 GSTP1启动子区被完全甲基化后转录活性显著降低;CDP能够逆转高甲基化状态下GSTP1基因启动子区的低转录活性且呈剂量依赖关系.结论 中药成分CDP能够逆转高甲基化状态的GSTP1 基因启动子区的低转录活性.     

护骨素基因启动子区T149-C基因型和等位基因频率分布的区域性差异

目的:探讨绝经后汉族妇女护骨素(OPG)基因启动子区T149-C基因型和等位基因频率在中国大陆不同区域存在的分布差异.方法:用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RELP)测定随机选取的89例西安市绝经后正常妇女和72例广州市绝经后正常妇女OPG基因T149-C的基因型.结果:所选人群OPG基因T149-C基因型频率分布在两地绝经正常妇女中均符合Hardy-Weiberg定律,而且其基因型在两组研究对象中分布差异有统计学意义(P＜0.01).结论:绝经后汉族妇女OPG基因启动子区T149-C基因型和等位基因频率分布可能存在着区域性差异.     

人β1整合素近端和远端启动子报告基因载体的构建和鉴定及启动活性分析

目的：克隆整合素β1近端启动子和远端启动子基因序列，构建并鉴定整合素β1启动子调控的荧光素酶报告基因载体pGL3—261和pGL3—1442。方法：以本室构建的含整合素β1全长启动子基因序列（1756bp）的重组载体pGL3—β1为模板，用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1近端和远端启动子基因序列，克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic，构建含正确目的基因的表达载体pGL3—261和pGL3—1442，经Nhe I、Xho I酶切、聚合酶链式反应（PCR）扩增及测序鉴定；并用pGL3—261和pGL3—1442质粒与pGL3—β1质粒同时转染人表皮细胞株HaCaT进行活性分析。结果：酶切及序列测定表明，克隆获得的近端启动子261bp和远端启动子1442bp与GenBankDNA序列数据库对比分析序列一致，且插入方向正确；此三种质粒都有明显的启动子活性，远端启动子活性与全长启动子活性无显著差异，但明显高于近端启动子活性。结论：成功构建了整合素B1近端和远端启动子基因序列荧光素酶报告基因载体，整合素β1远端启动子在HaCaT细胞中起主要作用。为下一步研究人整合素β1启动子核心区、基因表达调控机制及其信号转导通路等奠定基础。     

IL-10基因启动子多态性与小儿哮喘的相关性

目的探讨白细胞介素-10（IL-10）基因多态性、等位基因在儿童哮喘发病机制中的意义。方法采用顺序特异引物聚合酶链反应方法（PCR-SSP）对30例小儿哮喘病儿（哮喘组）及26例非哮喘呼吸道疾病患儿（非哮喘组）作IL-10基因多态性分析。结果两组IL-10基因型、单体型频率、等位基因频率比较，差异均无统计学意义。结论本研究未能证实小儿哮喘易感性与IL-10基因启动子位点上多态性相关联。     

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与白细胞介素1O与12、肿瘤坏死因子α、γ-干扰素及病毒含量的关系

目的 探讨慢性肝病患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异(HBV BCP)与血清白细胞介素10(IL-10)、12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)及病毒含量(HBV DNA)的关系. 方法 采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染者(慢性乙型病毒性肝炎轻、中、重度,肝炎肝硬化,慢性重型肝炎和原发性肝癌)血清进行检测HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G →A联合突变;采用双抗体夹心ELISA检测技术,检测患者血清细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)水平. 结果 HBV BCP变异阳性组、阴性组间对细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)及HBV DNA复制水平的影响差异有统计学意义(P＜0.05),BCP变异阳性组的血清IL-10(80.96±30.86 vs 72.11±24.19 mg/L)、IL-12(41.33±15.10 vs 35.98±14.47 mg/L)、TNF-α(56.04±27.05 vs 38.01±10.49 mg/L)、IFN-γ(19.81±12.29 vs 16.55±8.99 mg/L)和HBV DNA(108.2478±0.9826 vs 105.8876±1.4822拷贝/ml)的水平明显高于BCP变异阴性组. 结论 HBV BCP变异可导致血清IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ和病毒复制水平增高.     

MBL遗传缺陷与疾病相关性

甘露糖结合凝集素(MBL)是肝分泌的一种糖蛋白,是人类天然免疫中非常重要的一线抗感染分子,该物质通过与甘露糖结合凝集素相关性丝氨酸蛋白酶和病原微生物表面的单糖结合而激活补体,从而起到抗感染作用,除此之外还与自身免疫调节和细胞凋亡有关.如果血浆中MBL浓度过低,其生理功能将明显低下,结果导致机体对某些感染或非感染性疾病易感.血浆中MBL浓度由MBL基因控制,其中外显子1区 223、 230和 239位点、启动子区-550和-221位点以及5'端非翻译区 4位点的单核苷酸多态性对产物的影响重大,而不同人种中上述位点的基因多态性不同,结果导致不同人群对疾病的易感性不同.本文就MBL遗传缺陷及其与疾病的相关性作一综述.     

人IP10启动子红色荧光蛋白报告基因载体的构建及在细胞中的表达

目的：构建IPl0启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体，为研究细胞内IPl0的基因表达调控和相关的信号转导机制提供重要工具。方法：采用基因重组技术构建含IPl0启动子区的红色荧光蛋白报告基因载体pDsRedl-1-IPl0；用脂质体瞬时转染HEK293细胞，观察IPl0启动子对脂多糖（LPS）刺激的反应。结果：酶切和DNA测序证明所构建的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的；该表达载体在HEK293细胞静息状态下表达水平很低，经LPS刺激后，在荧光显微镜下可看到高亮度的红色荧光。结论：所构建的IPl0启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体是正确的，对生理相关刺激有很好的反应，可有效地用于IPl0基因表达信号调控机制的研究。