抗精神病药喹硫平对少突胶质细胞周期的影响及其作用机制研究

目的 探讨抗精神病药喹硫平对少突胶质细胞周期的影响及其作用机制。方法 采用血小板源性生长因子（PDGF）10 ng/ml、喹硫平10 μmol/L及两者混合物处理少突胶质前体细胞（OPCs）48 h,比较各组细胞周期、细胞周期退出指数及细胞分化情况。检测喹硫平干预后小鼠前额皮质8个细胞周期相关mRNA相对表达量。通过RNA干扰下调p21的表达,并分析其对细胞增殖和分化的影响。结果 PDGF可诱导G0/G1期细胞百分比下降（P <0.05）,S期和G2期细胞百分比升高（P <0.05）;喹硫平可抑制PDGF诱导的S期或G2期细胞百分比升高,并阻止G0/G1期细胞百分比降低（P <0.05）。PDGF抑制细胞周期退出（P <0.05）;喹硫平促进细胞周期退出（P <0.05）,并阻断PDGF对细胞周期退出的影响（P <0.05）。喹硫平可提高OPCs细胞的成熟率,降低低分化细胞数（P <0.05）。喹硫平干预后p21表达升高（P <0.05）;下调p21可增加S期细胞百分比,降低G2期细胞百分比（P <0.05）,增加溴脱氧尿苷阳性细胞数（P <0.05）,减少髓鞘碱性蛋白阳性细胞（P <0.05）。结论 喹硫平可能通过调节少突胶质细胞的细胞周期来调节细胞分化。     

犀角地黄汤合银翘散及其单方对小鼠流感病毒性肺炎治疗作用的比较

目的 比较截断疗法经典方犀角地黄汤合银翘散及其单方对小鼠流感病毒性肺炎的治疗作用,探究犀角地黄汤和银翘散在截断疗法中的不同作用.方法 ICR小鼠和BALB/c小鼠,随机分为正常组、模型组、犀角地黄汤合银翘散组(简称合方组)、犀角地黄汤组、银翘散组、达菲组,除正常组外其余小鼠以流感病毒滴鼻感染,1 h后给药.各组分别以对应的水煎剂或溶液灌胃,每日1次,连续6 d.ICR小鼠观察14 d,记录小鼠体重及生存时间;BALB/c小鼠分别在感染后第2、4、6天取材,光镜下观察肺组织病理切片、RT-PCR法检测肺组织中甲型流感病毒核蛋白(IAV-NP)mR-NA水平、ELISA法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 合方组可提高感染小鼠生存率,延长生存时间,推后死亡极期,效果优于犀角地黄汤组和银翘散组,而犀角地黄汤组优于银翘散组;合方组在第6天可减轻感染小鼠肺组织炎性病理改变,效果优于犀角地黄汤组和银翘散组,犀角地黄汤组比银翘散组病变轻.在第2、4、6天,银翘散组IAV-NP mRNA表达降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),且在第4、6天,银翘散组IAV-NP mRNA表达低于合方组(P<0.01);第4、6天,犀角地黄汤组IAV-NP mRNA表达与模型组比较,差异无统计学意义.在第4、6天,合方组、犀角地黄汤组和银翘散组肺组织TNF-α和IL-6水平低于模型组(P<0.05、P<0.01),合方组肺组织TNF-α 和IL-6水平低于犀角地黄汤组和银翘散组(P<0.05、P<0.01).犀角地黄汤组第6天TNF-α水平低于银翘散组(P<0.05),而其第2、4天IL-6水平低于银翘散组(P<0.01).结论 银翘散以抗病毒作用为主,而犀角地黄汤以抗炎作用为主,两方合用可在病毒感染早期截断病邪深入,又在疾病极期扭转严重炎症,以达到治疗效果.     

HK10、HE4、DJ-1、CA125在上皮性卵巢癌患者外周血中的表达及临床意义

目的:探讨人激肽释放酶10(HK10)、人附睾蛋白4(HE4)、DJ-1、糖类抗原125(CA125)蛋白在上皮性卵巢癌患者外周血中的表达及临床意义.方法:选取经手术治疗的118例卵巢肿瘤患者的外周血标本,经病理诊断51例为上皮性卵巢癌,67例为卵巢良性肿瘤,另选取同期40例健康体检者的外周血标本作为健康对照组,检测并比较3组受试者血清HK10、HE4、DJ-1、CA125表达水平,并分析其与上皮性卵巢癌病理特征与预后的关系,并采用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评估血清HK10、HE4、DJ-1、CA125对卵巢癌的诊断价值.结果:上皮性卵巢癌组和卵巢良性肿瘤组患者血清中的HK10、HE4、DJ-1、CA125水平高于健康对照组(P<0.05),且上皮性卵巢癌组高于卵巢良性肿瘤组(P<0.05);不同国际妇产科协会(FIGO)肿瘤分期、分化程度以及淋巴结是否转移患者血清HK10、HE4、DJ-1、CA125水平差异有统计学意义(P<0.05),不同年龄、肿瘤直径、病理类型患者血清HK10、HE4、DJ-1、CA125水平差异无统计学意义(P>0.05);ROC曲线显示4个指标联合检测的AUC为0.963(P<0.05),灵敏度为91.04％,特异度为95.00％.结论:HK10、HE4、DJ-1、CA125在上皮性卵巢癌患者外周血中水平较高,对早期上皮性卵巢癌的筛查和初步诊断具有预测价值.     

脐带采集液中抗生素的合理选择

目的:了解脐带采集过程中脐带污染菌的种类,为脐带采集液中合理添加抗生素提供实验依据。方法:采用BacT/Alert 3D240培养系统进行微生物培养;采用梅里埃API鉴定系统鉴定菌种;采用ATB药敏系统进行药敏试验;采用油红O染色和茜素红染色,测定人脐带组织间充质干细胞（HUCMSCs）的成脂分化和成骨分化潜能。结果:采集1 562份脐带,微生物培养阳性的386份脐带采集液共检出细菌及真菌438株,其中革兰阴性菌193株（44.1%）,主要为大肠埃希氏菌,其对头孢西丁的敏感率为90.3%;革兰阳性菌210株（48.0%）,主要为肠球菌,其次是葡萄球菌和链球菌,三者对青霉素的敏感率分别为93.1%、19.7%、92.9%;真菌35株（8.0%）,主要为白假丝酵母菌,真菌对两性霉素B的敏感率为100%。进一步的结果显示,与对照组比较,头孢西丁、青霉素、两性霉素B和三者混合使用对HUCMSCs生长、增殖和多向分化均无影响（P>0.05）。结论:脐带采集污染优势菌株依次为大肠埃希菌、粪肠球菌、白假丝酵母菌;脐带采集液中加入头孢西丁、青霉素和两性霉素B可以显著减少细菌和真菌污染。     

4413例包头地区女性高危宫颈人乳头瘤状病毒 (hrHPV)基因型的流行病学研究

目的:对包头地区高危人乳头瘤状病毒(hrHPV)的基因型进行流行病学研究,为将来进行HPV疫苗的接种、疾病的筛查、诊断和治疗提供依据.方法:选用Real-Time PCR法对2015年至2017年共4413名女性进行15种不同高危基因型的鉴定.结果:包头地区HPV感染率为15.6％(690/4413),最常见基因型为HPV16型,其次为HPV58型、18型.混合基因感染率为23.3％(161/690),HPV16+58混合基因型在多发感染的女性中最常见.HPV基因型的患病率显示为双峰曲线,分别为16～20岁(47.2％)年龄组和56～60岁(25.5％)年龄组.结论:本研究的数据可能对包头地区的HPV宫颈癌筛查工作有重要意义,对包头地区的当地疫苗接种方案具有支持作用,促进HPV疾病未来的诊断和治疗.     

α7烟碱型乙酰胆碱受体基因敲除小鼠牙髓炎模型的构建

目的：构建α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotine acetylcholine receptor,α7 nAChR）基因敲除小鼠牙髓炎模型,为研究α7 nAChR在牙髓炎发生发展过程中的作用机制提供实验模型。方法：取16只α7 nAChR基因敲除（knock out,KO）小鼠和16只野生型（wide type,WT）C57BL/6鼠的上颌第一磨牙的牙髓暴露法建立牙髓炎模型,分别在牙髓暴露后1、3、7 d处死小鼠,HE染色、免疫组化检测牙髓组织NOD样受体蛋白3（NOD?like receptor protein 3,NLRP3）表达情况。结果：HE染色结果显示牙髓暴露后1 d,α7 nAChR KO鼠及WT鼠的穿髓孔周围血管充血、组织水肿;牙髓暴露后3 d,炎症细胞聚集,α7 nAChR KO鼠炎症细胞聚集已达冠髓底部,WT鼠的炎症细胞主要聚集在穿髓孔周围的牙髓组织中;牙髓暴露后7 d,α7 nAChR KO鼠的牙髓炎症细胞浸润至根部牙髓,而 WT鼠的牙髓炎症细胞仍然主要聚集于冠髓底部。免疫组化染色结果显示,牙髓暴露后,α7 nAChR KO鼠牙髓NLRP3表达高于WT鼠,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：成功建立了α7 nAChR基因敲除鼠的牙髓炎模型,而且α7 nAChR基因敲除鼠牙髓炎症浸润明显快于WT小鼠。     

α7⁃nAChR通过抑制软骨细胞凋亡延缓小鼠膝骨关节炎关节软骨退变

目的：探讨激活α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7?nAChR）对小鼠骨关节炎（osteoarthritis,OA）软骨细胞凋亡的作用及机制。方法：通过关节腔内注射碘乙酸钠（monosodium iodoacetate,MIA）建立小鼠OA模型。模型小鼠随机分成MIA单独给药组、0.5 mg/kg烟碱（nicotine,Nic）治疗组、1 mg/kg Nic治疗组和Nic +α7?nAChR特异性拮抗剂甲基牛扁碱（methyllycaconitine,MLA）治疗组,对照组小鼠则注射等体积的生理盐水。模型制备后7、14、21 d应用Von Frey纤维丝评价小鼠疼痛行为指标机械缩足反射潜伏期;第21天时处死小鼠,取膝关节标本进行甲苯胺蓝和番红固绿染色,评估膝关节软骨破坏情况并进行关节软骨退变评分;应用原位末端转移酶标技术（terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick end labelling,TUNEL）分析关节软骨细胞的凋亡水平;应用免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl?2、Bax、cleaved caspase?9和caspase?9的表达。结果：模型制备后21 d,MIA组小鼠机械缩足反射潜伏期阈值显著下降至（0.28 ± 0.02）g,关节软骨退变评分和蛋白聚糖损失评分分别升高至（5.33 ± 1.19）分和（2.33 ± 0.27）分,关节软骨细胞凋亡率升高至（31.83 ± 3.89）%。而1 mg/kg Nic能显著减轻MIA引起的小鼠膝关节疼痛行为（P < 0.05）,降低MIA诱导的软骨退变（P < 0.05）和关节软骨细胞凋亡坏死（P < 0.05）。进一步机制研究发现,MIA可明显降低Bcl?2的表达,增加Bax和cleaved caspase?9的表达,而Nic治疗组能逆转MIA诱导的软骨细胞凋亡相关蛋白表达的影响,显著升高Bcl?2的表达,降低Bax的表达和cleaved caspase?9/caspase?9的比率（P < 0.05）,上述这些Nic的作用均能被MLA消除。结论：激活α7?nAChR能抑制关节软骨细胞的凋亡,对OA模型小鼠的软骨损伤具有保护作用,其抗凋亡机制可能与线粒体凋亡途径有关。     

基于“木郁达之”探讨化肝煎之临证运用

“木郁达之”意指肝气郁结当疏泄通达。化肝煎出自明代医学家张景岳的《景岳全书》,由青皮、陈皮、山栀子、牡丹皮、泽泻、芍药、土贝母7味中药组成,可疏肝畅达清热,为治肝郁化火之证的代表方,也是“木郁达之”治法的具体体现。现代临床可用于胃痛、胁痛、腹痛、头痛、烦热、咳吐痰血、妇女月经不调、目赤眼胀等多种病症的治疗。临证之时应抓住肝郁化火之辨证要点,基于“木郁达之”的原则,灵活化裁,以使肝气条畅,气血冲和,病症得除。     

一种简易、多用途的小鼠固定装置

目的：介绍一种简易、多用途的小鼠固定装置的制作和使用方法。方法：选用废弃的50 mL离心管,按设计方案进行切割、组装制成简易小鼠固定装置。选取60只小鼠,随机分为2组,对照组采用传统固定方法,研究组则采用本装置固定,先后对小鼠进行尾静脉注射、断尾采血、膝关节腔内注射,观察比较两组操作时间和成功率等指标。结果：单个50 mL离心管仅重约12 g,制作时间约15 min。对照组和研究组小鼠尾静脉注射时间分别是（32.10±1.97）s和（30.27±2.20）s,成功率均为100%,断尾采血时间分别是（30.10±1.73）s和（28.67±1.55）s,成功率也均为100%,两组在操作时间上差异均具有统计学意义（P＜0.01）,而在成功率方面均无统计学差异（P＞0.05）。两组膝关节腔内注射时间分别是（40.77±2.73）s和（38.73±2.16）s,成功率分别为83.33%和95.00%,两组在操作时间及成功率方面差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：该小鼠固定装置具有材料易得、制作简单、携带方便、用途多样等优点,为实验小鼠的固定提供了一种新的安全、实用的方法。     

人多能干细胞诱导类肾的实验研究

目的：体外诱导人多能干细胞（human pluripotent stem cell,hPSC）来源的类肾体,探讨类肾的结构成熟度、血管化和非肾系分化现象。方法：通过肾上皮分化试剂盒诱导hPSC成类肾,用免疫荧光观察类肾元结构中特异性标志物CDH1、LTL和PODX的表达,透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）观察肾小球和肾小管微观结构;第15天类肾移植到SCID小鼠肾包膜下,4周后处死动物,取移植物行组织形态学观察,免疫荧光法观察移植物中人抗核抗原（human nuclear antigen,HNA）、CDH1、PODX和MECA?32的表达。结果：肾脏特异性标志物CDH1、LTL和PODX呈阳性表达,电镜观察到不成熟的足细胞和肾小管结构;移植后的类肾体积增大,观察到肉眼可见的血管,HE染色移植物内可见红细胞和类软骨组织,HNA、CDH1、PODX和MECA?32呈阳性表达。结论：hPSC可体外诱导结构不成熟的类肾,在体内环境下,类肾可完成血管化并持续生长,但存在大量非肾系结构。