Nrf2点突变稳转肺癌细胞株构建及鉴定

目的构建核转录因子Nrf2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)点突变逆病毒稳转细胞株,并检测其在A549人肺癌细胞中的表达效果,为基因靶向治疗提供研究基础。方法针对人Nrf2基因序列,扩增目的片段并与Teasy载体连接,构建Nrf2-Teasy重组质粒,用Fast Mutagenesis System对Nrf2进行定点诱变,使其第2号外显子有T35C和G37A的点突变。并将突变的Nrf2片段插入逆病毒载体pMSCV,构建pMSCV-MUT-Nrf2重组质粒。利用逆病毒系统将其稳转入A549肺癌细胞,运用RT-PCR技术检测Nrf2 mRNA表达水平。结果稳转后的A549目的细胞可观察到荧光,且其Nrf2 mRNA表达水平较未转染细胞显著增高。结论成功构建点突变的逆病毒质粒,并有效感染目的细胞,为进一步研究Nrf2基因突变在肺癌中的作用提供细胞模型。     

HIV感染/AIDS患者相关支原体感染与免疫指标及炎症因子水平的关联性

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者相关支原体感染与免疫指标、炎症因子水平的关联性。方法选取2015年1月-2017年12月的102例HIV感染/AIDS患者作为研究对象,对其尿液样本中的生殖支原体、梨支原体、发酵支原体等相关支原体的感染情况、外周血CD_4~+T淋巴细胞计数、血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平进行检测和分析。结果:共有67例患者尿样中检出支原体核酸,感染率为65.69%;其中,检出生殖支原体感染23例、检出梨支原体感染15例,检出发酵支原体感染29例,感染率分别为22.55%、14.71%、28.43%,差异无统计学意义(P=0.059);HIV感染患者与AIDS患者三种支原体感染率的差异均无统计学意义;CD_4~+T淋巴细胞水平<500个/μL患者的三种支原体感染率高于CD_4~+T淋巴细胞水平≥500个/μL的患者(P<0.05);合并支原体感染患者的血清IL-2、TNF-α水平均低于未合并支原体感染患者,血清IL-4水平高于未合并支原体感染患者(P <0.05)。结论 HIV感染/AIDS患者具有较高的致病性支原体感染率,免疫功能较差患者的支原体感染率较高,支原体感染患者可表现为炎症因子的低表达,但尚不能认为支原体感染能够影响患者的免疫功能。     

国产新冠病毒灭活疫苗接种16问(上)

世界卫生组织根据新冠病毒疫苗的研发途径及组成成分的不同,把新冠病毒疫苗分为灭活疫苗、腺病毒载体疫苗、mRNA核酸疫苗、重组蛋白疫苗等。这些不同的新冠病毒疫苗的组成成分分别为灭活的新冠病毒或其裂解片段、无害的腺.病毒和新冠病毒的S蛋白基因、编码新冠病毒S蛋白的基因片段新冠病毒的S蛋白等。     

UPLC-QTOF-MS法探讨温肾清毒方对大鼠生殖器官中依非韦伦浓度的影响

目的?探索温肾清毒方“艾可清”对大鼠生殖器官中依非韦伦浓度（EFV）的影响。方法?24只雄性SD大鼠随机分为4组， EFV+高剂量艾可清组、EFV+低剂量艾可清组、EFV组及空白组，每组6只。大鼠灌胃给药7天后处死；腹腔静脉采血，取上清液；取前列腺、睾丸、附睾、膀胱组织，按组织和4 ℃双蒸水1：2比例配置匀浆液。超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱分析（UHPLC-QTOF/MS） 检测血清和匀浆中EFV响应浓度。结果?空白组无离子响应。EFV组、EFV+高剂量组、EFV+低剂量组各组内血浆和组织中离子响应浓度比较差异无统计学意义（均P>0.05）；3个组的血浆的EFV浓度比较差异无统计学意义（P>0.05），但是EFV+高剂量艾可清组及EFV+低剂量艾可清组组织中EFV浓度高于EFV组（P=0.018）。各组组织和血浆中EFV的分布如下：EFV+低剂量组> EFV+高剂量组>EFV组。结论?艾可清能够提高大鼠生殖器官组织中EFV浓度。     

基于网络药理学的藏药二十五味肺病丸防治新冠病毒肺炎(COVID-19)可行性分析及机制探讨＊

目的 采用网络药理学方法探究藏药二十五味肺病丸防治新型冠状病毒肺炎（COVID-19 ）的可行性分析及机制探讨。方法 基于课题组藏药大复方的研究经验，通过文献调研，筛选出二十五味肺病丸专属性、特征性化合物，并通过Chemical book数据库以及TCMSP数据库进行验证，确定二十五味肺病丸有效物质成分。将筛选出的成分通过Swiss Target Prediction数据库进行靶点筛选，进而运用Cytoscape软件构建药物-化合物-靶点（基因）网络进行可视化。运用CTD数据库查询与疾病COVID-19 相关的靶点，找出与二十五味肺病丸共有的靶点，将共有基因导入STRING数据库生成蛋白互作网络，并通过DAVID数据库进行KEGG通路富集分析和GO功能富集分析，预测藏药二十五味肺病丸的作用机制。结果 经筛选藏药二十五味肺病丸中檀香、悬钩木、山柰、红花、獐牙菜、甘草、藏木香、宽筋藤等19种药材被纳入到研究中。药材-化合物-靶点网络包含了19种药材，38个化合物和相应靶点419个。通过CTD数据库查询到COVID-19 疾病相关靶点基因472个，与二十五味肺病丸共有靶点基因77个，分别为ESR1、NOS2、PPARG、PTGS2、PPARA、HMGCR、CYP17A1、NR1H4、TLR9等。通过网络拓扑和蛋白互作网络分析筛选出关键靶点涉及PTGS2、ESR1、AKT1、EGFR等。GO功能富集分析得到339条生物过程条目（BP），45条细胞组成条目（CC）和81条分子功能条目（MF）。KEGG通路富集分析筛选得到102条信号通路，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、甲型流感、胰腺癌、T细胞受体信号通路等。结论 二十五味肺病丸可能通过作用于PTGS2、ESR1、AKT1、EGFR相关靶点并通过相关肺病通路、炎症通路、免疫通路对COVID-19起到防治作用。     

一餐饮店三员工同患羊痘

报道3例羊痘。与以往报道的病例多发于畜牧人员不同，本文3例患者为同一餐饮店从业人员。3例患者均表现为结节、脓疱伴痒痛，均有病羊接触史，组织病理特点均符合羊痘诊断。经抗病毒及对症治疗后好转。     

宫颈癌组织中hPygo2蛋白与HR-HPV病毒定量的关系

目的 研究宫颈癌组织中hPygo2蛋白与高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)病毒定量的关系。 方法 以2016年3月－2018年3月永康市妇幼保健院收治的宫颈癌患者79例为研究对象,作为宫颈癌组。另取同期于该院接受治疗的宫颈低度鳞状上皮内病变(LSIL)与宫颈高度鳞状上皮内病变(HSIL)患者各50例,作为LSIL组与HSIL组。再取同期于该院接受子宫切除术治疗的良性病变患者50例作为对照组。分别采用免疫组织化学法检测不同组织中hPygo2蛋白表达情况,采用第二代杂交捕获技术(HC2)法检测研究组、LSIL组与HSIL组HR-HPV病毒定量情况。并分析宫颈癌组织中hPygo2蛋白与HR-HPV病毒定量的相关性。 结果 宫颈癌组、HSIL组、LSIL组以及对照组的组织中hPygo2蛋白阳性表达率分别为87.34%(69/79)、72.00%(36/50)、28.00%(14/50)、12.00%(6/50),呈逐渐降低趋势,差异有统计学意义(χ²=91.144,P＜0.05)。宫颈癌组、HSIL组、LSIL组HR-HPV病毒阳性表达率分别为97.46%(77/79)、92.00%(46/50)、64%(32/50),呈逐渐降低趋势,差异有统计学意义(χ²=31.290,P＜0.05)。经Spearson秩相关性分析可得:宫颈癌组织中hPygo2蛋白和HR-HPV病毒定量存在正相关关系(r_s=0.683,P<0.01)。 结论 宫颈癌组织中hPygo2蛋白存在明显高表达,且与HR-HPV病毒定量存在正相关。临床工作中可通过对上述两项指标进行联合检测,从而有利于诊断宫颈癌。