活体标本应激反应及其排除方法

电镜的高分辨和高放大性能,能够精确反映被观察客体真实结构。传统电子显微术强调,活体标本由离开母组织至固定的间隔时间应在几十秒之内,一般不能超过1分钟。这种取材原则,是试图避免死后自溶造成人工假象,从而达到保持组织细胞各种成份的天然结构的目的。但在生理学上,任何生活细胞对取材的机械等一些刺激都会发生不同程度的应激反应。这在具有收缩功能的心肌、骨骼肌和平滑肌等组织表现得最为显著,以致常常难以与病理性反应相鉴别,甚至造成诊断错误。本文就     

克山病心肌细胞线粒体钙化及其发病机理探讨

作者等最早提出肌膜和线粒体(M)的变化在克山病最先出现,本文探讨M钙化及成因。克山病心肌标本18例(急型14例,亚急型4例),包括心室壁,室中隔及乳头肌,按常规制备超薄切片,H600A型等电镜观     

心脏瓣膜病瓣膜置换术中心肌保护的研究Ⅲ．顺灌或逆灌冷钾稀释血对线粒体及所含钙影响的动态定量观察

体外循环条件下（降温至３０℃）顺灌或逆灌冷钾稀释血（４℃）实施瓣膜置换术中，应用焦锑酸示踪法作为钙探剂对２０例风心病患者右心房肌线粒体及Ｃａ~（２＋）含量做了动态定量研究。结果表明，顺灌时在停跳开始（时相Ⅰ）线粒体结构变化极轻，至缺血４０分（时相Ⅱ）含钙线粒体及所含钙粒的Ｖｖ（体密度））增长不显著。逆灌组在同时相出现钙高峰，说明膜通透性升高，其钙高峰出现于时相Ⅱ，含钙线粒体及所含钙粒的体密度分别增大１３倍和５倍。这与顺灌钙高峰的水平相一致，但较顺灌提前一个时相发生，顺灌组在复跳期（时相Ⅲ）才出现钙高峰，含钙线粒体及所含钙粒的Ｖｖ剧增，较时相Ⅱ分别增加９４％和８２％，显示逆灌能使心肌组织获得更充分的灌注，顺灌组复跳时钙的剧增可能是瞬间血流再灌注导致的损伤。逆灌组第２个钙高锋出现于时相Ⅲ，其水平高于时相Ⅱ，但无统计学意义，到时相Ⅳ则急剧下降，而顺灌组的含钙线粒体及所含钙颗粒的体密度则基本未变。这说明逆灌的保护效果优于顺灌，复跳２０分时心肌细胞的结构和功能基本恢复到原始状态，能进一步降低受累心肌对缺血的致敏性（逆灌组耐缺血时间约为１００分钟，顺灌组约为８０分钟）。     

心脏瓣膜病瓣膜置换术中心肌保护的研究──Ⅰ．顺灌冷钾氧合稀释血对线粒体及所含钙影响的动态定量观察

本文在顺灌（由主动脉根部灌）冷钾氧合稀释血实施换瓣术条件下，对１０例风心病患者心房肌线粒体变化做了动态定量研究，体外循环条件降温至３０℃，灌注液４℃。结果表明，在停跳开始（时相Ｉ）至缺血４０分钟（时相Ⅱ），线粒体损伤主要是Ｉ级，而含钙粒线粒体及所含钙粒的Ｖｖ（体密度）增长不显著。复跳期（时相Ⅲ），Ⅱ级损伤病例增至５０％，含钙粒线粒体及所含钙粒的Ｖｖ剧增，较时相Ⅱ分别增加９４％和８２％。这可能是瞬间血流再灌注导致的损伤，显示经历８１分钟（平均）缺血的线粒体已有钙超载及再灌注损伤的异常反应性。在本文条件下，估计心肺旁路最佳时间为４０～５０分钟，最大耐受时间在８０分钟以内，有些病例术后心功恢复不佳，大概与顺灌不全或术时过长有关。     

心肌组织能量物质快速等浓度洗脱的高效液相色谱技术

测定缺血与缺氧心肌组织中能量物质含量,已成为国内外学者研究心肌缺血患病机制的一项重要生化指标。虽然许多学者已应用高效液相色谱技术检测正常心肌与缺血缺氧或再灌损伤心肌组织中部分能量物质的含量。然而,能量物质中肌酸化合物(肌酸和磷酸肌酸)和腺苷酸(AMP、ADP和ATP)吸收光波长不同,所以难以同     

丹参素对大鼠心肌线粒体H~ -ATP酶氧自由基损伤的保护作用

线粒体作为细胞进行呼吸和产生能量的主要场所之一,对氧自由基损伤十分敏感,其结构和功能的破坏将导致心肌细胞的严重损伤以至死亡。研究氧自由基对与线粒体飯量代谢密切相关的H~ -ATP酶的损伤及丹参素的保护作用具有十分重要的意义,国内外尚属首次。     

sMiMi-CK cDNA的克隆、表达及活性检测

目的本实验拟通过ＲＴ－ＰＣＲ技术,克隆及表达大鼠心肌线粒体ｓＭｉＭｉ－ＣＫ基因。方法从大鼠心肌线粒体总ＲＮＡ中扩增出ｓＭｉＭｉ－ＣＫＤＮＡ片段（１３３ｋｂ）,将该片段克隆到载体ｐＵＣ１９上,对其进行酶切和测序,然后将其克隆到ＰＢＶ２２０上,经温度诱导,使其在大肠杆菌中得以表达,并用ＮＡＤＨ法测其活性。结果ｓＭｉＭｉ－ＣＫ基因序列与国外报导的序列完全一致,表达的ｓＭｉＭｉ－ＣＫ分子量为４５８ＫＤ,占菌体总蛋白的１０７％,其活性为２７４×１０５ＩＵ／Ｌ菌液。结论ｓＭｉＭｉ－ＣＫ基因的克隆及表达,为今后从基因水平上研究心肌缺血性损伤的机制及治疗提供了依据。     

交通警察的甲襞微循环

通过对健康交通警察甲襞微微循环的观察,探讨职业因素对交通警察甲襞微循环的影响。方法应用田牛甲襞微循环综合定量评分方法,对８６例健康交警及９２例健康人的甲襞微循环进行观察测量、计分、比较。结果交警组的甲襞微循环总积积分值及管襻形态、流态、襻周状态积分值均明显高于对照组。     

百日咳毒素S1亚单位缺失分子的构建及其在重组杆状病毒中的表达

目的：为探明校基端疏水区对百日咳毒素Ｓ１亚单位分泌性的影响,试图构建缺失羧基端疏水区的Ｓ１亚单位。方法：应用ＰＣＲ技术构建了６种不同信号序列修饰的缺失羧基端疏水区的Ｓ１亚单位编码基因,并使用重组杆状病毒（ｒＢＶ）技术实现了这些缺失Ｓ１亚单位（ｔＳ１）在昆虫细胞中的高水平表达。结果：这些缺失Ｓ１亚单位的表达量为每万个昆虫细胞１．０１～２．２５ｕｇ。细菌信号肽和流感病毒ＨＡ信号肽均能完整表达和正确剪切,但ＨＡ信号肽在昆虫细胞中的处理效率更高。结论：ｔＳ１亚单位缺失羧基端疏水区后在昆虫细胞中的表达量明显提高,这些ｔＳ１亚单位的异源性表达是由于信号肽剪切不全所导致,ｔＳ１分子表观分子量的漂移并不意味着信号肽剪切不正确。     

中国北方地区健康成人甲襞微循环之特点

目的 :探讨年龄因素及地区因素对甲襞微循环的影响。方法 :按田牛甲襞微循环综合评分方法 ,对按不同年龄分组的 142例中国北京地区健康成人甲襞微循环进行观察、测量、计分、分析 ,同时将部分指标与国内报道的正常参考值进行对比分析。结果 :北方地区各年龄组健康成人甲襞微循环积分值分别为 2 0～ 39岁组 1.17± 0 .7、 40～ 5 9岁组1.74± 1.0 8、6 0～岁以上组 2 .48± 0 .6 1。各组的管袢形态、流态及袢周状态积分值及总积分值均随年龄增加呈递增趋势 ,组间比较有极显著差异 (P <0 .0 1)。各年龄组积分值均明显高于国内报道的同年龄组的正常参考值 (P <0 .0 1)。微循环的管袢数、输入枝、输出枝、袢顶管径随年龄增加呈递减趋势 (P <0 .0 5 )。积分值增高主要表现在管袢清晰度下降、畸形管袢率增加、血流缓慢、红细胞聚集、出血、乳头变浅、乳头下静脉丛可见。其中血流缓慢、红细胞聚集、乳头变浅、乳头下静脉丛可见出现率随年龄增加呈递增趋势。结论 :北方地区健康成人甲襞微循环加权积分值偏高且受年龄因素的影响 ,随着增龄积分值增高。