NK/LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

目的明确免疫活性细胞对肿瘤细胞的杀伤活性是否与肿瘤的耐药性相关。方法采用连续形态学观察及MTT比色法,研究淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞及自然杀伤(NK)细胞,对人口腔癌耐药细胞株KBV200耐药性逆转前后及亲本敏感株KB的杀伤活性。(1)在肿瘤细胞与LAK细胞共育后3 h内连续在倒置显微镜下观察LAK细胞对上述3者的杀瘤效应;(2)采用MTT比色法检测NK及LAK对3株细胞的杀伤率。结果与KB细胞组相比,在KBV200和KBV200 维拉帕米组,LAK细胞出现在靶细胞周围的时间早、数量多,伸出伪足的LAK细胞比率高,出现集落样细胞团块时间亦早。NK、LAK细胞对KBV200细胞株耐药性逆转前后的杀伤率均明显高于敏感株KB(P<0.05),而对耐药株耐药性逆转前后的杀伤率无统计学差异(P>0.05);LAK对各株的杀伤活力均明显强于NK细胞(P<0.05)。结论免疫活性细胞对KBV200细胞株有较强的杀伤作用,逆转耐药性不降低免疫活性细胞杀伤活力,提示细胞过继免疫治疗可能成为控制化疗耐药病人病情发展的一个有效手段。     

Apogossypolone抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导细胞凋亡

目的:研究Apogossypolone(ApoG2)对人乳腺癌细胞系MCF-7体外的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法:采用MTT法和平板克隆形成实验检测ApoG2作用于MCF-7细胞后,对其体外增殖和细胞克隆形成能力的影响;Hoechst 33258荧光染色法观察ApoG2(20μmol/L)作用48 h后,细胞凋亡的形态学变化;FCM检测ApoG2作用于MCF-7细胞后的细胞凋亡率以及细胞周期的变化.结果:ApoG2药物在浓度为5μmol/L、作用14 d后就能对MCF-7细胞增殖起到明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;平板克隆实验表明,经不同浓度(5、10和20 μmol/L)ApoG2作用14 d后,对MCF-7细胞克隆形成能力呈现明显的抑制作用,且同样呈剂量和时间依赖性.Hoechst 33258荧光染色结果显示,ApoG2与MCF-7细胞共培养72 h后,细胞呈现明显的核固缩和碎裂、染色质凝集和凋亡小体形成等细胞凋亡现象.FCM检测结果显示,20 μmol/LApoG2作用72 h后,细胞凋亡率较对照组升高,而且S期和G2/M期细胞比例较对照组升高(P＜0.05).结论:ApoG2能够抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和克隆形成,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡.     

肝动脉栓塞化疗联合氩氦刀消融和无水乙醇注射治疗肝癌

目的 联合应用肝动脉栓塞化疗术(TACE)、经皮局部氩氦刀消融(PLCT)和经皮瘤内无水乙醇注射治疗(PEIT)三种微创方法综合治疗失去手术机会的肝癌,观察其疗效和安全性.方法 针对64例无法手术切除的肝癌患者,联合施行TACE、PLCT、PEIT三种微创治疗.结果 所有患者顺利完成各治疗,无手术相关死亡及严重并发症.无患者完全缓解,26.6%患者部分缓解,56.3%(36/64)患者稳定,17.2%(11/64)患者进展,临床获益率82.8%(53/64).中位疾病进展时间2.8个月,1 年生存率74.2%(46/62).结论 针对无法手术切除的肝癌,TACE联合PLCT和PEIT是一种安全有效的综合治疗方法.     

肝肠钙粘连蛋白单克隆抗体的制备及其对HepG2的生长抑制作用

目的 制备及鉴定肝肠钙粘连蛋白(CDH17)的单克隆抗体,研究其对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用.方法 利用重组CDH17蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗CDH17的单克隆抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA和Western blotting分别对其效价和特异性进行鉴定,以不同浓度的单抗分别作用于HepG2细胞24、48、72和96 h.观察细胞数量和形态的变化,MTT法检测其对HepG2细胞的增值抑制作用.结果 成功建立了2株稳定分泌抗CDH17的单克隆抗体杂交瘤细胞株.两株单抗通过Western blotting实验都能特异性地结合真核细胞内源性的CDH17蛋白.不同浓度的单抗作用后细胞数量明显减少、形态不规则.不同浓度的单抗均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,药物浓度和用药时间之间有交互效应(P<0.05).结论 成功建立了两株效价高、特异性好的抗CDH17蛋白的单克隆抗体,其能抑制HepG2细胞增殖,并呈剂量-时间依赖效应.     

肿瘤靶向性药物载体叶酸-壳聚糖微球的制备及特性研究

目的 探索叶酸偶联壳聚糖(FA-CTS)纳米粒的合成方法 及对肿瘤细胞的靶向性.方法 利用叶酸活性酯与壳聚糖分子上的氨基反应形成稳定的酰胺键,制备FA-CTS.再利用壳聚糖在偏酸性溶液中带正电荷,在高速磁力搅拌作用下能与阴离子凝集的特性,将紫杉醇(PTX)做模型药物,制备负载PTX叶酸偶联壳聚糖(FA-CTS/PTX)纳米粒.采用荧光标记法和MTT法评价其肿瘤细胞靶向性.结果 所制备的FA-CTS/PTX纳米粒,形态均质规则,无粘连,平均粒径282.8 nm,包封率75.4%,载药量9.0%.荧光标记法结果 表明FA-CTS纳米粒的肿瘤细胞亲和性均高于普通CTS纳米粒.MTT法结果 显示FA-CTS/PTX纳米粒组的肿瘤细胞抑制率均高于普通CTS/PTX纳米粒组.结论 合成的FA-CTS纳米粒可通过叶酸受体途径特异靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞.     

卵巢癌顺铂耐药细胞中DNA转录与修复相关基因的表达

目的 研究DNA转录与修复相关基因的表达与卵巢癌顺铂耐药性之间的关系。方法 以卵巢癌亲本细胞系COC1为对照,应用cDNA微阵列检测其顺铂耐药细胞系COC1/DDP中DNA转录与修复相关基因的表达。结果和结论 与COC1细胞相比,COC1/DDP细胞有143个基因的表达水平发生改变,其中共有20个DNA转录与修复相关基因的表达发生改变,表达上调的有13个基因,表达下调的有7个基因,包括CAD、DDB1、DDIT4等大量DNA修复基因以及一般转录因子RNA多聚酶Ⅰ、Ⅱ基因和DHX9、DDX3X基因的表达上调以及MLH1和BTF3基因的低表达,提示COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性与DNA转录和损伤修复能力的异常有关。     

CD3AK、LAK对KB、KBv200细胞株耐药逆转前后的杀伤作用

目的　探讨免疫活性细胞对肿瘤细胞的杀伤活性与mdr1的关系。方法　利用特异性切割mdr1的ribozyme为工具 ,以表达mdr1的耐药细胞株KBv2 0 0 为靶细胞 ,采用脂质体转染技术 ,将含ribozyme的质粒pHβApr 1neo/ 5mR3及空载体pHβApr 1neo导入KBv2 0 0 及其亲本KB细胞内 ,运用North ernblotting、免疫组化方法观察ribozyme对mdr1mRNA及P 170的影响 ,采用MTT法检测了CD3AK、LAK对KB、KBv2 0 0 细胞株耐药逆转前后杀伤活性的变化。结果　含ribozyme的质粒pHβApr 1neo/ 5mR3及空载体pHβApr 1neo可以在KB、KBv2 0 0 细胞中稳定表达 ,ribozyme可以特异性地切割mdr1,导致KBv2 0 0 / 5mR3的mdr1mRNA含量下降 ,P 170表达减低 ,LAK和CD3AK对KBv2 0 0 的杀伤活性较对KB的强 ,MDR逆转后杀伤活性降至敏感株水平 ,LAK和CD3AK对KB/ 5mR3、KB/vec、KBv2 0 0 /vec的杀伤活性也较KB及KBv2 0 0 / 5mR3强。结论　mdr1 ribozyme在细胞内具有一定的逆转肿瘤多药抗性的生物学效应 ,LAK和CD3AK对MDR肿瘤细胞的杀伤活性与P糖蛋白表达相关     

载表柔比星的PEG化壳聚糖纳米粒对鼻咽癌细胞的增殖抑制作用

目的 探讨包裹抗癌药物表柔比星（EPI）的PEG化壳聚糖纳米粒（PEG/CS-EPI NPs）对5-8F鼻咽癌细胞株的增殖抑制作用。方法 应用阴离子凝聚法制备PEG/CS NPs,并负载EPI,激光粒度分析仪测定其粒径,透射电镜观察其形态特征,通过MTT法测定和研究PEG/CS-EPI NPs对5-8F鼻咽癌细胞株的体外增殖抑制作用。结果 PEG/CS-EPI NPs呈圆形或椭圆形,粒径分布均匀,平均粒径322.1nm,对5-8F细胞株的增殖抑制作用具有浓度和时间依赖性,随药物作用时间的延长和浓度的增大,抑制率逐渐提高。结论 PEG/CS-EPI NPs性能良好,制备工艺简单,有望成为化疗药物的新型制剂。     

结直肠肿瘤中APC基因突变研究进展

APC基因为结直肠腺瘤性息肉的易感基因，定位于人体5号染色体5q21上。APC基因不仅与家族性腺瘤性息肉病（FAP）有关，而且同部分散发性结直肠肿瘤也有关。本文对APC基因突变类型、功能、基因型-表型相关性、检测及临床应用作一扼要介绍。     

神经酰胺代谢在细胞凋亡与自噬中的作用

神经酰胺是鞘脂类的代谢产物,经从头合成及"鞘磷脂循环"形成,调节着细胞对外界不良因素的应激反应.神经酰胺的合成、代谢及信号转导在肿瘤发生、发展、耐药及抵抗放射治疗有着密切的关系.神经酰胺通过内、外在途径促进细胞发生凋亡,还能激活JNK、KSR、PKC等促进细胞凋亡.神经酰胺经PI3K/AKT途径诱导细胞凋亡与自噬,增加Beclin 1水平,诱导自噬发生.本文就神经酰胺及其代谢产物在细胞凋亡与自噬过程所发挥的作用作一综述.