脑微血管内皮细胞条件培养液对体外培养正常神经元的影响

目的:探讨体外模拟脑缺血再灌注损伤条件下及通络救脑注射液干预下脑微血管内皮细胞条件培养液(CMEX-CM)对体外正常培养神经元的影响.方法:先分别进行大鼠大脑微血管内皮细胞和神经元的分离纯化培养及建立体外模拟脑缺血再灌注损伤模型,然后用收集的CMECs～CM 1:1和1:5的浓度作用于体外培养的神经元,MTT法测定神经元的活性、存活率,western～blot检测NF-KB的表达.结果:脑微血管内皮细胞条件培养液可影响神经元生存活性,应用中药通络救脑注射液作用于脑微血管内皮细胞后收集的条件培养液可明显提高神经元的生存活性,可以提高神经元中NF-KB的表达.     

大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对皮层神经元活性的影响以及通络救脑注射液的干预作用

目的:探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对神经元活性的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:制备正常、正常用药、拟缺血损伤、拟缺血损伤用药4种脑微血管内皮细胞条件培养液(N-CM、NT-CM、I-CM、IT-CM),分别作用于培养的皮层正常神经元和拟缺血损伤神经元,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测分析各个条件培养液对神经元活性的影响特征。结果:①N-CM对正常神经元无明显影响,但对拟缺血损伤的神经元表现出一定的保护作用,尤其是NT-CM可明显提高受损的神经元活性;②I-CM可降低正常神经元活性,对已受损的神经元则进一步加重损伤,IT-CM可明显改善这种损伤状态。结论:脑微血管内皮细胞的旁分泌作用可能在中枢系统缺血性损伤中起重要作用,有可能是不能透过血脑屏障的中药成分发挥治疗作用的靶点。     

海马注射β-淀粉样蛋白对BACE1 mRNA的影响及通络救脑口服液的干预作用

目的:探讨大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40对BACE1mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其的干预作用。方法:采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测BACE1mRNA表达。结果:模型组BACE12-ΔΔCt为4.67±0.52,2-ΔΔCt显著多于假手术组(1.07±0.08,P<0.01),表明模型组BACE1mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多萘哌齐组(1.80±0.23)、通络救脑口服液48mg、24mg、12mg/kg·d分别为2.92±0.22、1.54±0.25和0.54±0.11,2-ΔΔCt显著减少,表明BACE1mRNA表达下调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织BACE1mRNA表达水平明显增高,通络救脑口服液可以抑制海马组织BACE1mRNA的表达,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。     

电针,神经生长因子影响周围神经再生形态与功能恢复的比较分析

采用神经原纤维镀银、髓鞘染色和前肢运动能力评价相结合的方法 ,动态观察电针、神经生长因子 (NGF)对豚鼠臂丛前索神经损伤再生的影响。结果表明 ,电针、NGF均能够加快轴突再生速度 ,NGF治疗组再生神经有髓纤维密度、轴突直径、髓鞘厚度显著优于电针组和自然恢复组 ,接近健侧水平 ;而臂丛前索运动功能指数 (BPFI)恢复却以电针组最优 ,NGF组与自然恢复组接近。     

快速老化小鼠和脑内注射Aβ1-40小鼠模型的神经行为学差异

目的:比较同品系小鼠,使用不同方法建立拟老年痴呆症模型的神经行为学差异,为不同功效的中药复方药效评价体系寻找有效的指标。方法:选用8月龄SAMP8和SAMR1小鼠,对SAMR1小鼠双侧海马注射Aβ1-40(400 pmol/只)。通过Morris水迷宫、避暗实验检测小鼠行为学改变。结果:行为学显示两种模型小鼠均出现不同程度学习记忆能力下降。SAMP8小鼠游速低于SAMR1小鼠,注射Aβ1-40的SAMR1小鼠在避暗实验的表现不如SAMP8小鼠。结论:注射Aβ1-40的SAMR1和自然衰老SAMP8小鼠神经行为学表现有差异,可根据不同中药复方的功效特点选用不同模型小鼠进行深入研究。     

通络救脑口服液对AD大鼠海马单胺氧化酶活性、脂褐素含量的影响

目的从单胺氧化酶(MAO)活性和脂褐素含量两个方面探讨通络救脑口服液对海马注射β-淀粉样蛋白1-40建立的老年性痴呆(AD)模型大鼠的治疗作用。方法采用大脑海马立体定向注射凝聚态β-淀粉样蛋白1～40(Aβ1～40)诱导老AD动物模型。药物干预4w后,用分光光度法检测大鼠海马MAO活性,用荧光分光光度法检测脂褐素的含量。结果与假手术组比较,模型组海马MAO活性和脂褐素含量均明显升高(P0.05);与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组MAO活性和脂褐素含量均明显降低(P0.05)。结论通络救脑口服液能降低Aβ1～40建立的AD模型大鼠海马MAO活性和脂褐素含量,对AD有一定的治疗作用。     

高脂血症对脑缺血大鼠模型脑皮质MMP-2表达和神经元凋亡的影响

目的 探讨高脂血症病理条件对脑缺血大鼠脑皮质MMP-2和神经元凋亡的影响.方法 线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),免疫组化法检测大鼠脑皮质缺血边缘区MMP-2、Bcl-2和Bax的表达.结果 与正常及假手术组相比,MMP-2在单纯脑缺血组、高脂血症组和复合脑缺血组的表达显著增多(P＜0.05);与高脂血症及高脂血症假手术相比,复合脑缺血组的MMP-2的表达也是明显增多的(P＜0.05),且MMP-2在复合脑缺血7d组的表达显著高于在单纯脑缺血组的表达.Bcl-2、Bax在伴有脑缺血模型各时间点均有高表达,复合脑缺血组和单纯脑缺血组与相应假手术组组内比较,差异显著(P＜0.05);复合脑缺血组与单纯脑缺血组比较,表达下降,缺血后3、7d组间差异显著(P＜0.05);Bcl-2/Bax比值升高,在缺血后7d组间差异显著(P＜0.05).结论 高脂血症的病理基础条件下,MMP-2表达的增加可能对脑缺血后神经元有修复和保护作用.     

通络救脑注射液对氧糖剥夺大鼠脑微血管内皮细胞分泌巨噬细胞炎性蛋白-1β的影响

[目的]观察通络救脑注射液对氧糖剥夺损伤(OGD)的大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液中巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)分泌情况及其受体--趋化因子受体5(CCR5)表达的影响.[方法]氧糖剥夺法建立内皮细胞OGD模型,酶联免疫银光法(ELISA)法检测脑微血管内皮细胞条件培养液中MIP-1β含量的变化,免疫组化法及Western blot法观察内皮细胞中MIP-1β及其受体CCR5的表达情况.[结果]OGD组的内皮细胞分泌大量MIP-1β至上清液,该组内皮细胞胞浆大量表达MIP-1β,同时CCR5的蛋白表达量亦随之上升,加入通络救脑注射液的OGD组,其上清液中MIP-1β分泌量显著性下降(P<0.01),MIP-1β及其受体CCR5在内皮细胞上的表达也有不同程度的下降.[结论]通络救脑注射液能够抑制OGD损伤时内皮细胞M1P-1β的分泌,减少MIP-1β和CCR5的表达,对内皮细胞缺氧损伤后趋化因子释放的抑制是其发挥解毒通络药效的途径之一.     

精制清开灵及其组分对中风后大鼠内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的：清开灵是一种治疗脑中风的传统中药复方。精制清开灵是从清开灵衍生出的有效成分复方，既往研究证明，此药具有减轻大脑中动脉栓塞（MCAO）大鼠血管内皮细胞损伤和抑制炎症过程的作用，从而体现出神经保护的效果。而内皮型一氧化氮合酶（eNOS）来源的一氧化氮在脑缺血发作后的病理过程中起到重要的保护作用，是近年药理学研究的热点之一。本实验研究了大鼠持久性局灶性脑缺血72h后精制清开灵及其各组分对抗脑缺血损伤的作用以及它们对eNOS表达的影响。方法：以线栓法复制SD大鼠持久性大脑中动脉栓塞（PMCAO）模型。缺血72h后，取出脑组织做冠状切片，1TrC染色计量梗死程度，并以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆内皮细胞凝血因子Ⅷ相关抗原（血管性假血友病因子，vWF）含量。以免疫组织化学染色方法观察大鼠脑组织eNOS的表达情况。并根据免疫组织化学分析的结果，取缺血侧脑组织以免疫印记法验证精制清开灵及其各组分对eNOS表达水平的影响。结果：PMCAO72h，模型组大鼠eNOS蛋白在缺血半暗带的血管内皮细胞表达增加。与模型组动物相比，精制清开灵及其各组分治疗组动物eNOS蛋白的表达明显增加，而脑梗死范围则显著缩小。结论：持久性局灶性脑缺血后，在缺血半暗带血管内皮细胞表达增加的eNOS可能具有重要的代偿作用。精制清开灵及其各组分能够不同程度地促进缺血后半暗带eNOS的表达，这可能是它们阻抑脑缺血损伤的重要机制之一。     

不同中药复方对拟老年痴呆症小鼠的治疗比较

目的:比较两种不同功效中药复方对SAM小鼠的治疗差异,为中药复方评价体系提供依据。方法:选用8月龄SAMP8小鼠,分为模型(P)组、六味地黄颗粒(PL组)和通络救脑滴丸(PT组)治疗组。同月龄SAMR1小鼠为对照(N)组。通过水迷宫、避暗实验检测小鼠行为学改变,IH染色观察组织病理学变化,WB检测脑组织APP表达差异。结果:与N组比较,P组及PT组行为学、IH、WB检测指标均出现统计学差异。与P组相比,PL组水迷宫潜伏期缩短,避暗潜伏期延长,海马APP表达减少。结论:六味地黄颗粒可以减少SAMP8小鼠海马APP表达,改善其学习记忆障碍,起到治疗痴呆症的作用,但通络救脑滴丸的疗效不佳。此外,不同中药复方的作用特点有差异,应选择适合的动物模型进行药效评价研究。