极低密度脂蛋白受体在肝脏脂类代谢中的研究进展

近年来,随着脂肪肝病患者的增多,对低密度脂蛋白受体家族的研究也逐步深入,其中极低密度脂蛋白受体(VLDLR)已逐渐成为医学、生理学与分子生物学等学科的研究热点,特别是肝脏VLDLR过表达诱导高脂饮食小鼠和长期饮酒小鼠肝脏脂肪变性。现已发现多种核受体和转录因子参与VLDLR表达的调控、转录后调控。因此,探讨引起VLDLR在肝脏和脂肪组织差异性表达的相关机制对于治疗脂肪肝病具有深远意义。     

沉默己糖激酶结构域蛋白1表达对胃癌细胞增殖、侵袭、转移和上皮间充质转化的影响

目的探讨己糖激酶结构域蛋白1(HKDC1)成为胃癌潜在治疗靶点的可能性。方法用脂质体法向胃癌细胞NCI-N87,BGC-823和HGC-27转染沉默HKDC1表达的小干扰RNA(siRNA)(siRNA-1和siRNA-2),同时设阴性对照siRNA(siRNA-NC)组,分别获得NCI-N87-siRNA-NC,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞,BGC-823-siRNA-NC,BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞,HGC-27-siRNA-NC,HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞,用Western印迹法检测siRNA对HKDC1表达的抑制效果,并计算抑制率。将上述细胞接种入96孔板,孵育72 h后,磺酰罗丹明B(SRB)染色法检测细胞存活,计算细胞存活率。将上述细胞分别接种入无基质胶和铺有基质胶的Transwell小室,24 h后计数小室下室细胞数,分别检测细胞迁移和侵袭能力。收集上述细胞提取蛋白质,用Western印迹法检测上皮间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和Snail的表达。结果分别转染siRNA-1和siRNA-2,对NCIN87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞HKDC1表达的抑制率分别为(20.5±0.1)%和(48.6±0.1)%,对BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的抑制率分别为(56.5±0.1)%和(58.9±0.1)%,对HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的抑制率分别为(63.5±0.1)%和(85.9±0.1)%。与对应的阴性对照组细胞相比,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞的存活率分别为(68.2±2.5)%和(70.4±2.1)%(P<0.01),BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的存活率分别为(77.0±0.1)%和(73.7±0.1)%(P<0.05),HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的存活率分别为(63.2±0.6)%和(70.4±0.1)%(P<0.01,P<0.05)。NCI-N87-siRNA-NC,NCI-N87-siRNA-1和NCI-N87-siRNA-2细胞的迁移数分别为488±43,319±27和262±37(P<0.01),侵袭数分别为143±8,68±2和30±2(P<0.01);BGC-823-siRNA-NC,BGC-823-siRNA-1和BGC-823-siRNA-2细胞的迁移数分别为1131±69,830±159和579±57(P<0.01),侵袭数分别为1127±113,781±97和565±96(P<0.01);HGC-27-siRNA-NC,HGC-27-siRNA-1和HGC-27-siRNA-2细胞的迁移数分别为453±36,190±25和57±16(P<0.01),侵袭数分别为645±53,462±62和264±47(P<0.01)。与对应阴性对照组相比,3种细胞HKDC1 siRNA-1和HKDC1 siRNA-2组细胞内E-钙黏蛋白的表达显著升高(P<0.05),N-钙黏蛋白和Snail的表达显著下降(P<0.05)。结论沉默HKDC1表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭和转移,并抑制上皮间充质转化。     

骨髓增殖性肿瘤JAK2V617F突变与中医证候的相关性分析及清肝化瘀解毒方的临床干预作用

目的观察骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者JAK2V617F基因突变与中医证候的相关性,以及清肝化瘀解毒方联合西药干预的疗效。方法将75例中医辨证为肝热血瘀证的MPN患者按照JAK2V617F基因突变结果分为阳性组(44例)和阴性组(31例),2组均给予清肝化瘀解毒方加减联合羟基脲、干扰素治疗,以1个月为1个疗程,3个疗程后进行疗效判断。观察治疗前后2组患者的西医有效率、中医主要症候积分和有效率、血常规、脾肿大情况及并发症发生率。结果 75例患者的JAK2V617F基因突变率为59%(44/75),其中真性红细胞增多症(PV)为71%(20/28),原发性血小板增多症(ET)为56%(14/25),骨髓纤维化(MF)为45%(10/22)。阳性组在临床及中医证候疗效上优于阴性组。阳性组血常规异常和脾肿大(P<0.05),但清肝化瘀解毒方联合西药治疗可明显改善MPN患者外周血象和脾肿大情况,阳性组尤为明显(P<0.05)。阳性组具有更明显的血瘀证表现,特别是在刺痛、瘀血、瘀斑方面、肌肤甲错和麻木方面(P<0.05)。治疗后,2组患者在主要症状方面均有明显的改善,各项证候计分均有所下降,2组治疗前后差异均有统计学意义(P<0.05)。阳性组并发症发生情况高于阴性组,但差异无统计学意义。结论 JAK2V617F基因突变阳性的MPN患者具有更高的外周血象、脾肿大发生率和更典型的血瘀证表现;但JKA2V617F基因突变阳性的MPN患者对清肝化瘀解毒方联合西药治疗具有敏感性。     

高浓度反全式维甲酸对人舌鳞癌细胞Cal27增殖的影响

目的探讨较高浓度反全式维甲酸对口腔鳞癌Cal27细胞系增殖、凋亡、周期、迁移等生物学过程的影响,为其在口腔鳞癌临床治疗中的作用提供理论支持。方法用不同浓度反全式维甲酸对口腔舌鳞癌Cal27细胞进行刺激,分别用CCK-8法检测增殖,流式检测细胞凋亡、细胞周期,细胞划痕法检测细胞迁移能力。结果反全式维甲酸对舌鳞癌Cal27细胞进行处理,发现不同浓度反全式维甲酸均可抑制Cal27细胞增殖,尤其在100μmol/L时,细胞增殖明显变慢,几乎处于增殖停滞状态,而相同浓度反全式维甲酸对正常皮肤成纤维细胞的增殖未见有显著影响。在迁移实验中,3个浓度梯度均能减慢细胞迁移,60μmol/L与100μmol/L 2个浓度对迁移影响较大,特别是在100μmol/L时,细胞24 h几乎未有任何迁移。凋亡结果显示,不同浓度作用细胞时,均存在凋亡增加的现象,但不同药物浓度之间凋亡细胞数量未见明显差异(P 0.05)。结论反全式维甲酸可通过增加凋亡,改变细胞周期,进而抑制舌鳞癌细胞的活性,减慢细胞增殖,抑制程度随浓度增高而增强。     

玻璃体切除术治疗增殖期视网膜病变的临床研究

目的对玻璃体切除术治疗增殖期视网膜病变的手术情况进行研究分析。方法选择2013年12月~2015年1月来我院应用玻璃体切除术治疗治疗的增殖性糖尿病视网膜病变患者50例(80眼)的手术方法、术后视力改善情况、眼压变化情况、并发症情况进行研究。结果术后随访1~8个月,50例(80眼)增殖性糖尿病视网膜病患者中,术前视力≥0.1合计48眼(A组),其余术前视力0.1合计32眼(B组)。其中A组术后视力改善35眼,无明显变化12眼,视力下降1眼。B组术后视力改善24眼,视力下降3眼,无改善5眼。术前所有患者的平均眼压(13.4±2.1)mm Hg,术后1周眼压升高,达(19.8±2.3)mm Hg,与术前比较,差异有统计学意义(P0.05),术后3周所有患者的眼压均恢复正常,平均眼压为(14.1±1.7)mm Hg。术中5眼在剥膜时发生医源性裂孔,术后5眼眼压一过性升高,经药物治疗后缓解;术后3眼角膜水肿,3~7d无特殊治疗自行恢复。8眼术后经眼底荧光血管造影补充视网膜光凝。1眼未能及时随诊7个月后发生新生血管性青光眼,经睫状体冷凝眼压正常。结论玻璃体切除术治疗增殖期视网膜病变手术效果确切,可以明显改善患者的视力,使眼压恢复正常水平,术后并发症少,值得推广和应用。     

虎杖苷对体外培养乳鼠心肌细胞肥大及成纤维细胞增殖的影响

目的研究虎杖苷对新生乳鼠离体培养心肌细胞和成纤维细胞增殖的影响及其抗氧化作用。方法剪取新生SD大鼠左心室,采用差速贴壁法分离并培养心肌细胞和成纤维细胞,将培养成功的成纤维细胞和心肌细胞均分为5组,即正常对照组、虎杖苷对照组(10-4mol/L)、模型组[10-6mol/L异丙肾上腺素(ISO)]、虎杖苷低浓度组(10-5mol/L+ISO 10-6mol/L)和虎杖苷高浓度组(10-4mol/L+ISO 10-6mol/L),进行相应干预。孵育2天后,采用考马斯亮兰法测定心肌细胞蛋白质含量,并测定其超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;测定成纤维细胞增殖及其培养液中SOD和GSH-Px及NO浓度。结果与正常对照组比较,模型组可诱导心肌细胞蛋白含量增多,明显降低SOD及GSH-Px活力(P0.05);与模型组比较,虎杖苷高低浓度组心肌细胞蛋白含量明显降低,且SOD及GSH-Px活力明显升高(P0.05);虎杖苷高浓度对GSH-Px活性的升高明显较低浓度强,差异有统计学意义(P0.05)。与正常对照组比较,模型组可诱导成纤维细胞增殖,明显降低SOD及GSH-Px活力和NO含量(P0.05);与模型组比较,虎杖苷高浓度组能抑制成纤维细胞的增殖,显著升高NO含量和SOD及GSH-Px活力(P0.05)。结论虎杖苷对ISO诱导的乳鼠心肌细胞肥大和成纤维细胞增殖有一定对抗作用,其作用机制与其抗氧化作用以及影响NO生成有关。     

银杏叶提取物对胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究银杏叶提取物(GBE)对胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响。方法:0、5、10、20、50、100、200μg/ml GBE培养细胞48 h后,MTT法测定细胞活力并计算抑制率。0、10、50、200μg/ml GBE培养细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率。结果:5、10、20、50、100、200μg/ml GBE培养细胞48 h后,对细胞生长有明显抑制作用,且呈剂量依赖关系。10、50、200μg/ml GBE培养细胞48 h后细胞凋亡率升高。结论:GBE可一定程度上抑制SGC7901细胞增殖,诱导其凋亡,以前者为主。     

PPARγ激活物对缺氧缺血性脑损伤大鼠神经行为学功能的影响

目的探讨激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ对缺氧缺血性脑损伤(HIBI)大鼠神经行为学功能的影响。方法 80只成年SD大鼠随机分为假手术组、HIBI组、曲格列酮(TGZ,PPARγ激动剂)组和GW9662(PPARγ抑制剂)组。采用RICE法制备HIBI模型后,TGZ组和GW9662组分别于HIBI后腹腔注射20 mg/kg TGZ或10 mg/kg GW9662。采用早期神经反射分析术后2、4、7 d的悬崖调转、阴性趋地性反射和步态时间,步迹分析术后14 d手术同侧、对侧的步长和趾间距,Morris水迷宫分析术后21 d的游泳距离和逃避潜伏期,干湿质量法测定术后2、4、7 d的脑组织含水量,免疫组化检测术后28 d损伤脑组织中脑神经相关生长蛋白(GAP)-43表达。结果与假手术组比较,HIBI组早期神经反射相关时间指标均延长,手术对侧步长和趾间距及Morris水迷宫的游泳距离、逃避潜伏期和站台所在象限停留时间均缩小,脑组织含水量升高,且GAP-43阳性细胞减少(P0.05)。TGZ可改善HIBI大鼠的以上异常指标(P0.05),但与假手术组仍有显著差异(P0.05);HIBI大鼠以上异常指标经GW9662处理后进一步恶化。结论激活PPARγ可改善HIBI导致的大鼠神经行为学功能异常,减轻脑水肿并促进损伤脑细胞的恢复。     

体外转染Cyclin A2基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响

目的探讨体外转染细胞周期素A2(Cyclin A2)基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响,为心脏再生提供细胞学依据。方法 SD乳鼠12只,分离、培养、鉴定原代乳鼠心肌细胞并分为3组,实验组:转染带有强化绿色荧光蛋白(GFP)和Cyclin A2基因的重组腺病毒(Ad-Cyclin A2-GFP);空病毒组:转染不含目的基因带有GFP的重组腺病毒(Ad-Null-GFP);阴性对照组:未做转染处理,仅加入等量的培养基。利用GFP示踪技术,评估原代心肌细胞转染效率;转染后的细胞继续体外培养3~5d,利用免疫荧光技术分别检测Cyclin A2、磷酸化组蛋白H3(H3P)、心肌肌钙蛋白-T(c Tn T)。结果 1.荧光GFP示踪表明原代心肌细胞的转染效率高达(97±0.74)%;2.免疫荧光标记显示,空病毒组和对照组结果相似;心肌细胞特异性标记蛋白c Tn T分布于细胞质,原代心肌细胞纯度高达(95±0.62)%;心肌细胞Cyclin A2主要在胞核内聚集,少数分布于细胞质。H3P为核蛋白在细胞核内分布。3.转染Cyclin A2后,实验组H3P阳性率明显高于空病毒组和对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组可见大量多核细胞,以双核为主,伴少量3核细胞。结论腺病毒作为转染载体对原代心肌细胞有很好的侵染效率;Cyclin A2超表达促进原代心肌细胞形成双核。