产气肠杆菌突变株EAM-Z1的培养和核苷磷酸化酶活力的研究

目的：大规模培养具有高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌突变株(E．aerogenes EAM-Z1)，利用静息细胞酶法合成抗肿瘤核苷药物中间体5—氟尿苷(FUR)。方法：补料分批培养产气肠杆菌，发酵过程流加葡萄糖、控制发酵液的pH和pO2，摇瓶培养基中加入底物胞苷诱导核苷磷酸化酶，通过酶法合成FUR时菌体对底物尿苷的转化率来研究菌体的核苷磷酸化酶活力。结果：葡萄糖既可满足产气肠杆菌碳源的需要，又能维持培养液的pH，培养24h发酵液菌体温重为19．1g／L，以尿苷(UR)和5—氟尿嘧啶(FU)为底物，产气肠杆菌游离湿菌体对UR的酶转化率为56．7％；摇瓶培养基中加入3．0g/L胞苷诱导核苷磷酸化酶，静息细胞的酶转化率提高了10．2％；酶反应间隙流加底物UR浓度达30mmol/L时，产物FUR的浓度最高，进一步增加底物浓度则抑制产物的合成。结论：通过大规模培养可获得产高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌，其静息细胞可用于抗肿瘤核苷药物中间体FUR的制备。     

发酵液中重组水蛭素的分离纯化

目的：建立毕赤酵母(pichia)高密度表达的重组水蛭素(recombinant hirudin-2,rHV2)分离纯化工艺。方法：高密度培养重组毕赤酵母并诱导表达水蛭素至胞外，发酵液经超滤、透析、离子交换层析。分离纯化rHV2目的蛋白；采用SDS-PAGE和抗凝血酶活力分别检测目的蛋白纯度和活性。结果：纯化样品经SDS-PAGE电泳检测为单一条带，重组水蛭素比活性为6000ATU／mg，纯化收率达38．6％。结论：超滤、透析和离子交换层析可用于发酵液中大规模分离纯化重组水蛭素。     

超声心动图评价胸腔积液抽液前后的心脏结构和功能

采用多普勒超声仪评价 71例不同量及不同部位胸腔积液患者抽液前后的心脏结构和功能。提示双侧大量胸腔积液对心脏结构和功能可产生明显影响 ;右侧胸腔不仅对右心结构和功能产生明显影响 ,且对左心功能有影响 ;左侧胸腔积液主要对左心结构和功能产生影响 ,抽液后明显改善。     

酶法合成5-氟尿苷

采用产气肠杆菌ＣＰＵ７８５６变异株的游离细胞,利用其中的嘧啶核苷磷酸化酶通过碱基交换进行酶法合成目的物。试验以３０ｍｍｏｌ／Ｌ尿苷（ＵＲ）,３０ｍｍｏｌ／Ｌ５－氟尿嘧啶（ＦＵ）,３０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液ＰＨ７．８）的混合物加入１０％的产气肠杆菌湿菌体反应３ｈ,底物ＵＲ的转化率可达５０％。     

口炎清冲剂治疗复发性口疮近期疗效观察

为探讨治疗复发性口疮的有效方法，以中医成药口炎清冲剂和维微乐对比治疗复发性口疮。结果：口炎清冲剂治疗复发性口疮疗效显著高于维微乐，是一种有肯定疗效的治疗复发性口疮的药物。     

产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2′-脱氧-5-氟尿苷的酶法合成

研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明：摇瓶培养时，延长菌体培养时间，菌体部分自溶时酶的转化率最高；发酵培养基中加入１０ｇ／Ｌ乙酸钠可使底物转化率提高７．７％，０．００１ｇ／Ｌ的底物ｄＵ诱导可使酶活力提高１１．０％；流加底物ｄＵ对酶反应转化率无显著影响，表明该酶促反应为非２′－脱氧尿苷底物抑制型；反应过程存在扩散控制，酶反应的最佳摇床转速为１６０ｒ／ｍｉｎ。     

形状记忆合金内固定的临床应用探讨

形状记忆合金内固定物以其独特记忆功能已被临床广泛应用。我院自2003年1月至2005年12月,采用上海昕昌记忆合金科技公司研制的钛镍形状合金环抱接骨板和髌骨爪治疗骨折,取得满意效果,现报告如下。1资料与方法1.1一般资料本组109例,男76例,女33例,年龄28~83岁,平均38.5岁,其中锁     

发酵法生产辅酶Q10的研究进展

微生物发酵法生产辅酶Q10因其具有生物活性高、没有原材料的限制并实现了产业化等优点而受到国内外学者的关注。该文概述菌株选育及代谢调节工艺优化等方面的研究进展。     

脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的共表达

目的：构建共表达载体pETDuet-aroB-qutB，在大肠杆菌中同时表达奎尼酸合成途径中的关键酶脱氢奎尼酸合成酶（DHQase）和奎尼酸脱氢酶（QDHase）。方法：分别以大肠杆菌（B21）和构巢曲霉（ATCC24919）基因组为模板，采用PCR法扩增得到脱氢奎尼酸合成酶基因aroB和奎尼酸脱氢酶基因qutB，克隆接入pETDuet-1载体中，转化入大肠杆菌BL21，在宿主菌中共表达脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶。结果：获得了包含pETDuet-aroB-qutB共表达载体的重组大肠杆菌。IPTG（0．5mmol／L）诱导重组菌4h后，脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶表达量分别占菌体总蛋白的18．7％和30．5％，酶活力为70．4U／L、40．2U／L，分别提高了14．1倍和22．3倍。结论：实现了脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的高效共表达，为基因工程法生物合成奎尼酸奠定了基础。     

发酵液中重组人血清白蛋白的纯化

采用摇瓶培养重组毕赤氏酵母（Pichia pastoris）表达并分泌重组人血清白蛋白（recombinant human se-rum alburmin，rHSA）至胞外，发酵液经（NH4）2SO4沉淀、离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤分离纯化rHSA，纯化样品经SDS-PAGE检测为单一条带。