无精症患者的YRRM基因分析

无精症患者的ＹＲＲＭ基因分析周作民沙家豪林敏王黎熔周亚东朱虎（南京医科大学组织胚胎学教研室，南京２１００２９）苏川吴海玮陈淑贞张兆松（南京医科大学医学分子生物学实验室，南京２１００２９）关键词ＹＲＲＭ基因；无精症ＹＲＲＭ（ＹＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅＲＮＡ...     

聚合酶链反应-单链构象多态性分析在精子发生相关基因检测中的应用

用聚合酶链反应方法检测了染色体核型正常的２００例无精子症患者基因组ＤＮＡ中的ＤＹＳ１基因，发现８例有ＤＹＳ１的缺失。选择６０例ＤＹＳ１阳性患者进行聚合酶链反应 单链构象多态性分析，发现１例有多态性的改变，提示ＤＹＳ１的点突变亦与无精子症相关。认为，对于ＤＹＳ１阳性的无精子症患者有必要进行聚合酶链反应 单链ＤＮＡ多态性分析。     

特发性无精子症和严重少精子症患者无精子因子检测的临床意义

20 0 1年10月至2 0 0 3年1月,我们采用PCR方法对5 0例正常生育男性和5 0例特发性无精子症和严重少精子症患者进行无精子因子(AZF)检测,现报告如下。材料与方法　5 0例正常生育男性。年龄2 8～38岁,平均33岁。精液常规检查精子数均>4 0×10 6/ml。5 0例特发性不育男性患者年龄2 8～4 2岁,平均34岁。临床检查排除相关的泌尿生殖系疾患。精子计数(2～5×10 6/ml) ,符合WHO诊断标准。患者均有正常4 6XY核型,外周血性激素指标正常。38例无精子症患者睾丸病理检查符合精子发生不完全的诊断。取抗凝血1ml,加入5倍体积重蒸馏水溶解红细胞,离心…     

人精子抗原基因－2表达产物相关抗体对精子运动的影响

在构建成人睾丸ｃＤＮＡ文库的基础上，用兔抗人精子抗体自文库中筛选出了８株阳性克隆，并对其中的ＨＳＧ２表达产物进行理化特性测定和抗ＨＳＧ２表达产物抗体的生物学活性测定。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示溶原蛋白的分子量约为１５５ＫＤａ。抗ＨＳＧ２表达产物抗体能明显的抑制精子的运动能力，对精子凝聚、顶体蛋白酶和精子表面的ＣｏｎＡ受体无影响。提示ＨＳＧ２表达产物可能成为精子疫苗的候选成份。     

男性无精子或少精子患者YRRM基因检测

ＹＹＲＭ（ｙｃｈｒｏｍｓｏｍｅＲＮＡｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｍｏｔｉｆ）为ＡＺＦ的生要候选成分。应用ＰＣＲ方法检测了５０例正常男子、２３６例无精子症和８２例严重少精子症男子基因组ＤＮＡ中的ＹＲＲＭ１和ＹＲＲＭ２基因，发现中国男子无ＹＲＲＭ２基因，２１例无精子症和３例严重少精子症患者有ＹＲＲＭ１的丢失。     

养精胶囊联合锌硒宝对不育患者精子DNA完整性的影响

目的探讨应用养精胶囊联合锌硒宝治疗男性不育对患者精子DNA完整性的影响。方法选择60例合并精子DNA完整性异常[DNA片段化指数(DFI)>10％]的不育患者,随机分为治疗组30例与对照组30例,治疗组口服养精胶囊和锌硒宝,对照组服用维生素E,治疗3个月。分别通过精子染色质结构分析(SCSA)和计算机辅助精液分析(CASA)检测DFI和精液常规参数,并分析治疗前后2组患者各参数的变化。结果治疗前2组精子密度、活力、正常形态百分率和DFI各项参数差异无显著性(P>0．05)。治疗前60例不育患者DFI与精子活力呈显著负相关(r=-0．58,P<0．01),而与精子密度和精子正常形态百分率无显著相关性(P>0．05)。治疗3个月后,治疗组的精子密度、活力、正常形态百分率与治疗前相比差异均有显著性(P<0．05),治疗组的DFI值[(9．4±7．2)％]与治疗前[(22．2±10．3)％]相比显著下降(P<0．01);对照组上述参数与治疗前相比差异均无显著性(P>0．05)。结论养精胶囊联合锌硒宝可显著降低不育患者的精子DFI值,提示应用养精胶囊和锌硒宝治疗男性不育可显著改善患者的精子DNA完整性。     

hCG对成年小鼠睾丸Leydig细胞中睾酮生成酶的调节作用

目的　从分子水平探讨 h CG对成年小鼠睾丸 L eydig细胞中胆固醇侧链裂解酶 (P45 0 scc)、17α-羟化酶 (P45 0 c17)和 3β-羟甾脱氢酶 (3βHSD)的调节作用。　方法　体外培养成年小鼠睾丸 L eydig细胞 ,分别测定培养1、8h h CG刺激组及对照组细胞培养上清中睾酮含量 ,同时运用半定量 RT- PCR及核酸内切酶酶切方法测定两组细胞中 P45 0 scc、P45 0 c17及 I、VI两型总的 3βHSD的 m RNA水平 ,并测定了 I、VI两型 3βHSD m RNA的比值。　结果　 1.培养 1、8h刺激组睾酮含量均明显高于对照组 (1h P<0 .0 1,8h P<0 .0 0 5 ) ;2 .培养 8h,刺激组 P45 0 scc和P45 0 c17m RNA水平明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;而培养 1、8h刺激组 I、VI两型总的 3βHSD m RNA水平和对照组相比均无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,但 VI型 3βHSD m RNA和 I型 3βHSD m RNA的比值逐渐增高。　结论　 h CG能在转录水平刺激 P45 0 scc、P45 0 c17及 VI型 3βHSD的表达 ,促进睾酮生成。     

小鼠睾丸雄激素生成酶活性的测定

睾丸间质细胞是体内产生雄激素的主要细胞，其合成功能依赖于细胞内一系列将胆固醇转化为雄激素的酶，主要有３β－羟类固醇脱氢酶、１７α－羟化酶和１７－甾酮还原酶，这些酶活性的大小可直接反映间质细胞的合成功能。本文应用３Ｈ和１４Ｃ标记技术，通过测定小鼠睾丸内各种酶催化反应产物的数量，显示了上述３种酶的活性。结果显示，小鼠睾丸３β－羟类固醇脱氢酶、１７α－羟化酶和１７－甾酮还原酶，活性分别为１８２１±１３８Ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（睾丸）、６１３±４７Ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（睾丸）和９０７±１０２Ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（睾丸）。     

人精子有效抗原的分析

本实验运用免疫性不育症患者血清和精浆中抗精子抗体对精子可溶性抗原的有效决定簇进行了SDS-PAGE和Westera Blot法的分析。结果表明:1.经反复冻融所提取的精子可溶性抗原具有较高的特异性。2.男性血清中抗精子抗体的靶抗原种类多于女性。3.精浆中抗精子抗体的靶抗原种类多于血清。4.精子抗原中58KD_a、69KD_a和91KD_a成份为抗精子抗体阳性的男性血清和精浆、女性血清共同识别的靶抗原。5.精子抗原中20KD_a成份可能是刺激男性生殖道淋巴组织产生与免疫不育有关抗体的特异性、功能性抗原。提示由于精子抗原对生殖道刺激产生抗体的方式、途径和部位不同,导致血清和精浆中抗精子抗体的克隆数不同。     

人睾丸cDNA文库的构造

本研究运用异硫氰酸胍-酚-乙醇法提取人睾丸组织中的RNA,并用高效Oligo(dt)cellulose从中纯化mRNA,以此为模板,在AMV反转录酶作用下,制备互补的DNA(ss-cDNA),RNaseH降解模板mRNA,经DNA多聚酶I作用以ss-cDNA为模板合成第二链(ds-cDNA)。用T_4DNA多聚酶制备cDNA的平末端,在T_4DNA连接酶的