多次静脉移植人脐血单个核细胞对家兔急性心肌梗死炎症反应的影响

目的 探讨多次静脉移植人脐血单个核细胞(HCBMC)对家兔急性心肌梗死炎症反应的影响.方法 健康成年中国家兔制成急性心肌梗死模型,分为3组.(1)多次移植组:术后7、9、11和13 d分别经耳缘静脉注射3×106个5溴2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的HCBMC;(2)单次移植组:术后7 d注射BrdU标记的HCBMC 3×106个,其他时间点注射生理盐水;(3)心肌梗死对照组:术后4个时间点均注射生理盐水;另以中国家兔10只作为假手术组.移植前、移植后2周和4周超声心动图检测心功能;观察各组心肌组织的病理变化;免疫组化检测心肌BrdU、白细胞介素6(IL-6)和IL-10阳性细胞;酶联免疫吸附试验检测IL-6和IL-10的表达水平.结果 与心肌梗死对照组比较,单次和多次植组左心室射血分数明显较高(P＜0.05),且多次移植组优于单次移植组(P＜0.05);单次和多次移植组梗死心肌周边区域有BrdU阳性细胞,多次移植组阳性细胞数明显多于单次移植组(P＜0.05).与心肌梗死对照组比较,移植后4周时单次和多次移植组心肌组织IL-6水平较低,而IL-10水平较高(P＜0.05);多次移植组IL-6水平低于单次移植组,IL-10水平高于单次移植组(P＜0.05).结论 多次静脉移植HCBMC的抗炎效果和心功能改善情况优于单次移植.HCBMC抑制急性心肌梗死局部炎症反应的机制之一可能是调节IL-6和IL-10的表达.

Abstract：

Objective To investigate the effects of multi-intravenous transplantation of human cord blood mononuclear cells(HUMNCs)on inflammatory responses and interleukin-6(IL-6),IL-10 after myocardial infarction in rabbits.Methods Totally 45 Chinese rabbits were randomly divided into three groups:multi-transplantation group,single cell transplantation group,control group.The rabbits in control group(n=15),which had undergone ligation of the left anterior coronary artery(LAD),were intravenously injected with normal saline 7,9,11,13 days after the operation.The rabbits in single transplantation group(n=15)were intravenously injected with 3×106 HUMNCs labeled with bromodexyuridine(BrdU)at 7th day after the operation,and normal saline at 9th,11th,13th day post-operation.The rabbits in multiple transplantation group(n=15)were intravenously injected with 3×106 HUMNCs labeled with BrdU at 7th,9th,11th,and 13th day after the operation.In addition,10 Chinese rabbits served as the sham operation group,receiving the operation without ligation of the LAD.Cardiac functions were examined by echocardiography,and pathohistological changes of the myocardia were observed under the microscopy.The BrdU positive cells and the expression of IL-6 and IL-10 in the myocardia were examined by immunohistochemical method and ELISA.Results(1)Compared to control group,transplantation of HCBMCs improved left ventricular ejection fraction(LVEF)(P<0.05),while LVEF was improved more significantly in multi-transplantation group than in single-transplantation group(P<0.05);(2)BrdU positive cells were found in the peri-myocardial infarction area in both transplantation groups.Moreover,compared to single transplantation group,the number of BrdU positive cells was increased,and that of inflammatory cells was decreased in multi-transplantation group(P<0.05);(3)Compared to control group,the expression levels of IL-6 were decreased,and those of IL-10 increased in both transplantation groups.Compared to single transplantation group,the expression levels of IL-6 were further decreased (P<0.05),and those of IL-10 further increased in multi-transplantation group (P<0.05).Conclusion The regulation of the inflammatory factors IL-6 and IL-10 in the myocardia is one of the possible mechanisms responsible for acute myocardial infarction treated by intravenous administration of HCBMCs.The multiple intravenous HCBMCs transplantation for myocardial infarction was superior to single intravenous transplantation in improving cardiac function and inhibiting inflammatory responses in the infarct area.     

人脐血干细胞静脉移植对急性心肌梗死胶原重构及组织基质金属蛋白酶9表达的影响

目的 探讨人脐血单个核细胞静脉移植对急性心肌梗死(简称心梗)后胶原重构及组织基质金属蛋白酶9表达水平的影响.方法 45只健康成年中国家兔随机分为3组:移植组15只,结扎冠状动脉左前降支复制急性心肌梗死模型后24h,经耳缘静脉注入BrdU标记的人脐血单个核细胞(HCBMCs)悬液2×107/mL;对照组15只,结扎冠状动脉左前降支后同时间、同途径注入等量生理盐水;假手术组15只,左前降支穿线不结扎,术后同时间、同途径注入生理盐水.移植后1、2和4周超声检测心功能;心肌组织切片HE染色观测心肌病理变化;免疫组织化学法检测心肌BrdU阳性细胞,ELISA和RT-PCR检测血浆基质金属蛋白酶MMP-9水平及心肌组织MMP-9 mRNA表达水平,Masson染色观察心肌胶原蛋白变化.结果 与对照组比较,移植组移植后1、2和4周左室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)均明显改善(P＜0.01);免疫组织化学显示仅移植组梗死区及周边区存在BrdU阳性细胞.ELISA及RT-PCR显示,与对照组比较,移植组血浆基质金属蛋白酶MMP-9水平和MMP-9 mRNA表达水平显著减低(P＜0.01);Masson染色显示,与对照组比较,移植组胶原沉积明显减少,且胶原纤维基本处于有序状态.结论 对兔急性心肌梗死模型静脉移植人脐血单个核细胞能迁移并存活于梗死周边区域,并抑制心肌组织基质金属蛋白酶MMP-9表达,减少胶原蛋白沉积,改善心功能.提示抗胶原重构是人脐血单个核细胞静脉移植改善心梗心功能机制之一.     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰CD34+细胞静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死

背景：近年来,已有实验证实经颅直接给予胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)或携带GDNF基因病毒载体有显著减少脑梗死体积、促进神经功能恢复的疗效,但其治疗方法有创,临床应用有限。 目的：观察GDNF基因转染的人脐血CD34+细胞经静脉移植对自发性高血压大鼠脑梗死的疗效,并探讨其机制。 方法：分离人脐血CD34+细胞,脂质体方法转染pEGFP-GDNF质粒和pEGFP空载体至CD34+细胞制备pEGFP-GDNF-CD34+和pEGFP-CD34+细胞;制备60只雄性自发性高血压大鼠大脑中动脉栓死模型并随机分为3组：pEGFP-GDNF-CD34+细胞移植组(基因细胞组)、pEGFP-CD34+细胞移植组(单纯细胞组)、生理盐水组。改良神经功能损害评分评价神经功能恢复状况;图像分析法观察TTC染色脑梗死体积;酶联免疫法检测细胞培养液与脑组织匀浆GDNF水平,荧光显微镜及免疫组织化学检测绿色荧光蛋白标记CD34+细胞及其人神经胶质纤维酸性蛋白和人神经元核抗原表达。 结果与结论：经静脉移植pEGFP-GDNF-CD34+细胞向自发性高血压大鼠脑缺血区域迁移、存活、并向神经细胞定向分化,促进神经功能恢复。GDNF基因转染CD34+细胞在脑组织存活、向神经细胞分化及对大脑神经功能保护作用优于CD34+细胞。脑组织GDNF水平可能是GDNF基因转染CD34+细胞和单纯CD34+细胞移植治疗自发性高血压大鼠局灶性脑缺血疗效差异机制之一。     

静脉移植人脐血单个核细胞与心肌梗死家兔心肌细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、bax

背景：研究表明经冠状动脉或经心肌内脐血干细胞移植可促进心肌梗死区血管新生、减低心肌梗死范围和改善心功能等,但脐血干细胞静脉移植对心肌细胞凋亡的影响尚不清楚。 目的：观察人脐血单个核细胞静脉移植对急性心肌梗死心肌细胞凋亡及凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。 方法：45只成年家兔随机分3组：移植组15只,于急性心肌梗死后24 h,经耳缘静脉注入2×107 BrdU标记人脐血单个核细胞悬液 500 μL;对照组15只,于急性心肌梗死后24 h,同途径注入生理盐水500 μL;假手术组15只,左前降支穿线不结扎,术后24 h同途径注入生理盐水500 μL。移植后1,2,4周超声检测心功能;移植后4周心肌组织切片苏木精-伊红染色观测心肌病理变化;脱氧核糖核酸末端转移酶介导末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;免疫组化法检测心肌BrdU阳性细胞及Bcl-2、Bax蛋白在心肌细胞表达水平。 结果与结论：①与对照组比较,移植组心功能显著改善。②移植组梗死周边区存在BrdU阳性细胞。③与对照组比较,移植组Bcl-2蛋白水平显著升高,Bax蛋白水平显著降低。④移植术后4周移植组心肌细胞凋亡数显著低于对照组。实验证实经静脉移植人脐血单个核细胞可迁移至急性心肌梗死周边区;调控急性心肌梗死后心肌细胞Bcl-2及Bax蛋白表达水平,抑制梗死周边区域心肌细胞凋亡,并改善心肌梗死后心功能。 关键词：心肌梗死;脐血单个核细胞;移植;细胞凋亡;Bcl-2蛋白;Bax蛋白     

人脐血单个核细胞静脉移植联合培哚普利对急性心肌梗死炎症反应的影响

背景：近期报道骨髓间充质干细胞心肌内直接移植联合培哚普利治疗急性心肌梗死大鼠,可改善心肌组织内环境,并增强急性心肌梗死疗效.目的：观察人脐血单个核细胞静脉移植联合血管紧张素转化酶抑制剂培哚普利对家兔急性心肌梗死心肌组织炎症反应与促炎因子白细胞介素6表达及心功能影响,并探讨联合治疗对急性心肌梗死可能的保护机制.方法：人脐血单个核细胞取自健康足月分娩产妇脐血.60只健康家兔制备急性心肌梗死模型,建模成功后随机数字表法均分对照组、培哚普利组、单纯移植组和联合治疗组.每组随机选5只家兔分别于移植后1,2,4周超声心动图检测家兔心功能指标左室射血分数及左室短轴缩短率;苏木精-伊红染色光镜观察心肌病理变化和白细胞计数;免疫组化检测心肌组织白细胞介素6蛋白表达量;荧光显微镜观测绿色荧光蛋白阳性细胞.结果与结论：①与对照组比较,培哚普利组、单纯移植组、联合治疗组治疗后1,2,4周心功能指标左室短轴缩短率及左室射血分数改善（P〈0.05）,单纯移植组高于培哚普利组（P〈0.05）,联合治疗组改善最显著（P〈0.05）.②与对照组比较,培哚普利组、单纯移植组、联合治疗组治疗后1,2,4周心肌组织白细胞计数及白细胞介素6的表达均显著减低（P〈0.05）,且单纯移植组低于培哚普利组（P〈0.05）,联合治疗组最低（P〈0.05）.③联合治疗组、单纯移植组治疗后1,2,4周均可见绿色荧光蛋白阳性细胞散在分布于梗死周边区域,且联合治疗组细胞计数多于单纯移植组（P〈0.05）.说明培哚普利联合人脐血单个核细胞静脉移植治疗急性心肌梗死实验动物,能提高移植细胞在心肌组织内存活率,并进一步改善心功能.其机制可能与联合治疗抑制心肌局部炎症反应及促炎因子白细胞介素6水平表达作用增强有关.     

内皮祖细胞对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的 观察内皮祖细胞对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞表型转化的影响.方法 采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,EGM-2细胞培养基进行培养,诱导单个核细胞贴壁向内皮祖细胞分化.采用荧光显微镜双染色、流式细胞术鉴定内皮祖细胞,间接免疫荧光检测血管平滑肌细胞标志物平滑肌α-肌动蛋白、钙调节蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹检测早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞收缩表型标志基因平滑肌α-肌动蛋白以及合成表型标志基因骨桥蛋白表达变化的影响.结果 与对照组比较,血管紧张素Ⅱ(10-6mmol/L)诱导血管平滑肌细胞增殖48 h后,平滑肌α-肌动蛋白mRNA和蛋白表达明显减少,而骨桥蛋白mRNA和蛋白表达明显增加,提示血管平滑肌细胞从收缩表型向合成表型转化;与血管紧张素Ⅱ组比较,早期内皮祖细胞条件培养液、晚期内皮祖细胞条件培养液以及人脐静脉内皮细胞条件培养液处理后均不同程度抑制血管紧张素Ⅱ诱导的平滑肌α-肌动蛋白表达减少和骨桥蛋白表达增加,其中以早期内皮祖细胞条件培养液的抑制效果最明显.结论 内皮祖细胞能够抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞从收缩表型向合成表型转化.     

人脐血单个核细胞多次静脉移植家兔急性心肌梗死后的胶原重构

背景：以往干细胞移植治疗心肌梗死的研究,均为单次经静脉或冠脉注射移植。 目的：进一步验证人脐血单个核细胞多次静脉移植对家兔急性心肌梗死胶原重构及心功能影响。 方法：取家兔45只结扎冠脉左前降支制备急性心肌梗死模型,随机分为3组,①多次移植组：造模后7,9,11,13 d经耳缘静脉注入BrdU标记人脐血单个核细胞生理盐水。②单次移植组：造模后7 d注入BrdU标记人脐血单个核细胞生理盐水,9,11,13 d注入生理盐水。③心梗对照组：仅注入生理盐水。另取家兔5只为假手术组。 结果与结论：与对照组相比,两移植组心功能左室短轴缩短率、左室射血分数明显升高(P < 0.05);且多次移植组改善效果优于单次移植组(P < 0.05);免疫组织化学显示两移植组造模后2,4周心梗周边区均存在BrdU阳性细胞,但多次移植组BrdU阳性细胞计数多于单次移植组;改良Masson’s染色显示与假手术组比较,对照组梗死区及非梗死区胶原密度显著增加,梗死区域胶原纤维部分融合,排列较紊乱,心肌基本组织结构破坏;与对照组比较,两移植组造模后2,4周梗死周边区域心肌细胞间胶原含量、胶原纤维明显减少,胶原纤维排列较为有序;与单次细胞移植组比较,多次细胞移植组进一步改善。提示多次静脉移植脐血单个核细胞改善急性心肌梗死心功能、阻抑心肌胶原纤维重构疗效优于单次静脉移植。     

甘露醇促进人脐血CD34+细胞通过血脑屏障静脉迁移至高血压脑梗死大鼠脑组织

背景：单纯脐血细胞经静脉移植治疗脑梗死疗效有限,移植细胞经血脑屏障迁入脑内数量不足为重要原因之一。 目的：观察血脑屏障开放剂甘露醇对人脐血CD34⁺细胞经静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死疗效的影响。 方法：分离人脐血CD34⁺细胞,脂质体方法转染pEGFPF质粒,制备pEGFP-CD34⁺细胞;45只雄性SD大鼠经线栓法建立大脑中动脉栓塞模型,造模后24 h随机分为3组：实验组注射1×10⁶ GFP-CD34⁺细胞,继之注射20%甘露醇2 g/kg;阳性对照组注射1×10⁶ GFP-CD34⁺细胞;空白对照组注射等量生理盐水。 结果与结论：①荧光显微镜下实验组每张切片脑组织GFP标记阳性的绿色荧光细胞计数平均值显著多于阳性对照组。②移植后第7天治疗组与其他各组神经功能损害评分差异无显著性意义;移植后28 d,各组神经功能均有不同程度恢复,实验组神经功能恢复明显优于阳性对照组和空白对照组(P < 0.05)。③实验组与其他两组相比,大鼠脑梗死体积均显著减少。④实验组脑组织匀浆胶质细胞源性神经营养因子水平较阳性对照组、空白对照组明显增高。提示血脑屏障开放剂甘露醇促进静脉移植CD34⁺细胞通过血脑屏障迁入至脑组织,并增强静脉移植CD34⁺细胞治疗脑梗死的疗效。     

复方丹参滴丸联合人脐血间充质干细胞移植对急性心肌梗死小鼠作用机制研究

目的 观察复方丹参滴丸（CDDP）联合人脐血间充质干细胞（hUCB-MSCs）移植对急性心肌梗死（AMI）小鼠脾脏和外周血单核细胞 M1/M2 亚型转化、心肌炎症反应和心功能的影响。 方法 雄性Balb/C 小鼠结扎冠状动脉左前降支，制备 AMI 模型。 32 只造模成功小鼠随机分为 4 组，对照组、移植组、CDDP 组和联合治疗组，每组 8 只。 造模术后 24 h，各组均接受生理盐水 0.2 mL 注射及 0.2 mL 灌胃，CD-DP 组将 CDDP 270 mg/（kg窑d）溶于灌胃生理盐水，移植组将 1×106 hUCB-MSCs 溶于注射生理盐水，联合治疗组接受两种治疗。 治疗 7 d 后，每组随机选取 5 只小鼠行超声心动图检测心功能，HE 染色观察心肌病理变化和心梗区白细胞计数，Masson 染色观察胶原沉积情况，流式细胞仪检测外周血及脾脏单核细胞M1/M2 比值，ELISA 检测外周血 IL-10 水平。 结果 HE 染色结果显示各组小鼠梗死区均有不同程度心肌细胞丢失，由大量平行或交错的胶原纤维束组成，形成疤痕组织，可见白细胞浸润。 与对照组比较，其余三组残存心肌细胞数量较多，白细胞浸润减少，三组左室射血分数（LVEF）、外周血 IL-10 水平升高（P<0.05），心梗区白细胞计数、胶原沉积比、脾脏和外周血单核细胞 M1/M2 比例降低（P<0.05）。 与 CDDP 组比较，移植组心梗区白细胞计数增加，联合治疗组心梗区白细胞计数减少，移植组和联合治疗组 LVEF、IL-10 水平升高，外周血单核细胞 M1/M2 比例下降（均 P<0.05）。 与移植组比较，联合治疗组外周血单核细胞 M1/M2 比例下降（P<0.05）。 结论 CDDP 联合 hUCB-MSCs 移植治疗可促进 AMI 小鼠心外单核巨噬细胞 M1/M2亚型转化，减低小鼠心肌梗死局灶炎症反应，并改善心功能，疗效优于单纯 hUCB-MSCs 移植。     

GAD-7和PHQ-9自评心理测评量表评估心内科门诊患者焦虑、抑郁状态

目的目前临床上已有多个量表用于检测患者抑郁和焦虑状态,本研究探讨GAD-7和PHQ-9自评心理测评量表对综合医院心血管疾病患者抑郁和焦虑状态评估。方法连续收集2016年3月至6月我院心内科门诊就诊患者400例,采用近期世界卫生组织推荐的广泛性焦虑量表(GAD-7)、9项患者健康问卷(PHQ-9)评估心内科门诊患者焦虑、抑郁状态,并与汉密尔顿焦虑、抑郁量表(HAMA/HAMD)、Zung焦虑/抑郁自评量表(SAS/SDS)进行比较,评价不同的心理测评量表对患者焦虑、抑郁状态检出效率。结果纳入资料完整的385例患者,HAMA他评量表患者焦虑检出率为39.5%,GAD-7量表患者焦虑检出率为42.9%,两者比较无显著差异,但均显著显高于SAS检出率(31.7%)(P0.05);HAMD他评量表患者抑郁检出率为36.1%,PHQ-9量表患者抑郁检出率为38.6%,两者比较无显著差异,但均显著显高于SDS检出率(26.2%,P0.05)。对经HAMA、HAMD他评量表诊断焦虑、抑郁状态患者,GAD-7和PHQ-9量表检测焦虑、抑郁灵敏性高于SAS、SDS量表,GAD-7和PHQ-9量表检测特异性、阴性预测值均大于90%以上;GAD-7和PHQ-9量表检测焦虑、抑郁评分与HAMA、HAMD他评量表评分显著相关。结论 GAD-7/PHQ-9自评心理测评量表与HAMA/HAMD他评心理测评量表对综合医院心内科门诊患者并焦虑、抑郁状态检出率相似,是筛选综合医院心血管疾病患者抑郁和焦虑的适用评估工具。