正交试验法优选吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的闪式提取工艺

【目的】优选吴茱萸药材最佳闪式提取工艺。【方法】采用闪式提取技术,以吴茱萸碱和吴茱萸次碱的得率为指标,采用高效液相色谱法测定。选择乙醇浓度、提取时间和提取电压为考察因素,选用L9(34)正交试验法优选吴茱萸药材最佳闪式提取工艺。【结果】吴茱萸药材的最佳闪提工艺条件为提取电压40 V,提取时间3 min,乙醇浓度体积分数75%和料液比1∶20。【结论】闪式提取吴茱萸药材效率高、时间短,可成为提取吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法。     

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS与网络药理学小儿佛芍和中颗粒成分解析及治疗功能性腹痛药效物质基础及机制预测

目的 通过 HPLC-Q-TOF-MS/MS分析小儿佛芍和中颗粒（XFHG）中的化学成分,依据解析的化学成分结合网络药理学预测其治疗功能性腹痛的药效物质基础,筛选出潜在功效成分,预测作用机制。方法 采用HPLC-Q-TOF-MS/MS对XFHG进行化学成分分析,分别在正、负离子模式下扫描,结合对照品与中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、文献中的碎片离子信息、保留时间进行匹配,确认化学成分。筛选质谱解析得到的化学成分中口服生物利用度≥20%、类药性≥0.5 的成分,同时纳入《中国药典》2020 年版中规定的指标成分以及 SwissADME 数据库筛选得到的成分作为活性成分;通过TCMSP、Massbank、本草组鉴数据库、Genecards数据库及文献筛选,分别建立XFHG活性成分靶点数据库、功能性腹痛相关疾病的靶点数据库,筛选出共同靶点,导入网络可视化软件 Cytoscape 3.9.1中,构建“XFHG-成分-功能性腹痛”靶点相互作用网络图,筛选出核心成分;共有靶点导入STRING11.5数据库中,构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络图,并将得到的数据导入Cytoscape 3.9.1中,筛选出核心作用的靶点;将核心靶点导入DAVID数据库进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路和基因本体（GO）富集分析。结果 XFHG定性分析中共解析出96个化学成分,包括26个黄酮类、17个有机酸类、13个萜类、11个生物碱类、6个柠檬苦素类、8个苯丙素类、4个苯乙醇苷类及11个其他类;筛选出发挥治疗功能性腹痛作用的核心成分 15 个,来源于 6 味药材,包括小檗碱、芍药苷、连翘酯苷 A、连翘苷、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等;XFHG 治疗功能性腹痛的核心靶点有 TNF、AKT1、IL6、IL-1β、VEGFA、TP53、CASP3、PTGS2、CAT、MAPK3;KEGG 通路分析共得到 109 条通路,免疫应答、炎症反应相关的信号通路排名靠前;GO 富集分析得到生物过程（BP）条目 145 个、细胞组分（CC）条目10个、分子功能（MF）条目9个,富集值排名靠前的条目涉及脂多糖介导的信号通路、糖皮质激素反应、一氧化氮生物合成过程的正向调控等与炎症反应相关的生物过程。结论 根据HPLC-Q-TOF-MS/MS解析的化学成分结合网络药理学预测了XFHG治疗功能性腹痛的潜在功效成分,预测其作用机制与免疫调节、抗炎相关。     

粉碎过筛条件对吴茱萸含量测定结果的影响及解决办法

目的研究不同的粉碎过筛条件对吴茱萸含量测定的影响规律,提出能反映取样代表性的粉碎过筛方法,以减小实验误差。方法以绿原酸、金丝桃苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸新碱为指标,采用HPLC法测定不同粉碎过筛条件对其含量测定的影响。通过比较不同条件下各指标成分的含量及分析结果的精密度,剖析粉碎过筛影响含量测定结果的原因,进而确定合适的粉碎过筛方法。结果吴茱萸中6种活性成分的含量与内果皮在粉末中的比例呈负相关。按《中国药典》2015年版方法处理样品,6种活性成分含量测定的日内精密度和重复性试验结果多数不符合要求(RSD5.0%)。当所有粉末都过2号筛时,分析结果的精密度和重复性都符合分析要求(RSD2.0%)。结论内果皮等纤维素颗粒在粉末中的比例是药材粉碎过筛环节最关键的影响因素。所有粉末都能过2号筛的粉碎过筛方式既保证了取样的代表性,又解决了分析结果的精密度和准确度符合分析要求的问题。     

反相高效液相色谱法测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱的含量

 目的建立同时测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱含量的反相离子对液相色谱法。方法采用Agilent ZOR-BAX SB-C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-乙腈-15 mmol·L^-1SDS水溶液(20∶40∶40,pH 7.5)流动相,检测波长343 nm。结果盐酸小檗碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为12～120和0.45～6.81 mg·L^-1,盐酸小檗碱的回收率为99.21%,RSD=1.60%;吴茱萸次碱的回收率为101.40%,RSD=3.32%。结论采用本方法同时测定加味左金丸中盐酸小檗碱和吴茱萸次碱含量具有简便、快速、准确等优点。     

The permeability and the efflux of alkaloids of the Evodiae fructus in the Caco-2 model

The intestinal transport of four indoloquinazoline alkaloids, rutaecarpine (RCP), evodiamine (EDM), dehydroevodiamine (DEDM) and wuzhuyurutine B (WZYB) isolated from the Evodiae fructus was investigated using the monolayers of the human colon adenocarcinoma cell line Caco-2 as a model system for intestinal absorption. The four alkaloids were measured by high performance liquid chromatography (HPLC) coupled with UV detector. Transport parameters and permeability coefficients were then calculated and compared under identical conditions with those of mannitol, propranolol and paclitaxel. Permeability coefficients were also compared with the reported values for model compounds like propranolol and mannitol. The four alkaloids at a concentration of 5 microM were demonstrated substantial transport across the Caco-2 cell monolayers with moderate to high permeability coefficients and WZYB demonstrated higher-level intestinal transcellular efflux. The transports of DEDM and WZYB were concentration dependent at the concentrations of 5-25 microM. Among four alkaloids, EDM and DEDM are better-transported compounds, and RCP and WZYB are moderate transport compounds. The data support the involvement for multidrug resistance-associated proteins (MRPs) in the intestinal transcellular efflux of WZYB.     

湘产小花吴茱萸的化学成分及抗植物病原真菌活性筛选

目的研究小花吴茱萸Euodia rutaecarpa var.officinalis的化学成分和抗菌活性。方法采用各种柱色谱及制备液相等方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构,利用菌丝生长法进行抗菌活性的初步筛选。结果从小花吴茱萸70%乙醇提取物中分离得到15个成分,分别鉴定为吴茱萸碱(1)、吴茱萸次碱(2)、去氢吴茱萸碱(3)、二氢吴茱萸卡品碱(4)、吴茱萸卡品碱(5)、1-甲基-2-十一烷基-4(1H)-喹诺酮(6)、1-甲基-2-[(4Z,7Z)-4,7-十三碳二烯]-4(1H)-喹诺酮(7)、1-甲基-2-[(6Z,9Z)-6,9-十五碳二烯]-4(1H)-喹诺酮(8)、柠檬苦素(9)、石虎柠檬素A(10)、isolimonexic acid(11)、wuzhuyurutine B(12)、豆甾醇(13)、β-谷甾醇(14)、β-胡萝卜苷(15)。结论化合物5～8和11～13是首次从该植物中得到,不同类型化合物在10μg/m L质量浓度下对植物病原真菌表现出选择性抑菌作用。     

吴茱萸粉末醋调敷日本大耳兔足心的药代动力学分析

目的:研究吴茱萸粉末醋调敷日本大耳兔足心后吴茱萸碱(EVO)和吴茱萸次碱(RUT)的药代动力学特征,探讨吴茱萸穴位贴敷疗法的药动学基础。方法:吴茱萸粉末(1.0 g·kg~(-1))醋调敷雄性日本大耳兔足心12 h,于不同时间点(0,1,2,3,4,5,6,8,10,12,24 h)心脏取血,血浆样品用乙腈萃取并沉淀蛋白,采用LC-MS检测血浆中EVO和RUT的血药浓度,采用Phenomenex Gemini C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-5 mmol·L~(-1)甲酸铵水溶液(62∶38),流速0.4 mL·min~(-1),柱温25℃,以色胺酮(TRY)为内标,采用电喷雾离子化(ESI)和正离子多离子反应监测(MRM)模式检测。采用PKSolver 2.0软件的非房室模型拟合药动学参数。结果:EVO和RUT的主要药动学参数半衰期(t_(1/2))分别为(18.55±7.98),(20.15±1.06)h;达峰时间(T_(max))分别为5,4 h;药峰浓度(C_(max))分别为(4.68±0.34),(9.76±1.05)μg·L~(-1);药时曲线下面积AUC_(0-t)分别为(58.18±5.46),(155.38±13.91)μg·L~(-1)·h,AUC_(0-∞)分别为(101.46±23.34),(300.32±36.22)μg·L~(-1)·h;平均驻留时间(MRT_(0-∞))分别为(27.63±9.34),(31.25±1.47)h。结论:吴茱萸粉末醋调敷日本大耳兔足心后,EVO和RUT均可透皮吸收入血,且撤药后24 h内仍能维持血药浓度,为吴茱萸穴位贴敷给药提供了实验依据。     

高效液相色谱法测定辛萸贴片中吴茱萸次碱的含量

目的建立辛萸贴片中吴茱萸次碱的HPLC测定方法。方法采用ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶0.1)为流动相,流速1.0 mL.min-1,检测波长为343 nm。结果吴茱萸次碱线性范围为10.66~106.0μg.mL-1(r=0.999 9),平均回收率为99.6%(RSD为1.50%)。结论本方法简便、快速、准确,适用于用辛萸贴片的质量控制。     

以体外经皮渗透性为指标优化吴茱萸提取物乳膏处方

采用单因素试验,以吴茱萸碱和吴茱萸次碱体外经皮累积渗透量为考察指标,筛选了乳膏类型、乳化剂和载药量。所得优化处方为:以司盘-60和Cremophor RH40为复合乳化剂,载药量为0.2%的o/w型乳膏。该乳膏为淡黄色半固体,乳滴呈圆球形,pH为6.81±0.04,锥入度在102.4～119.7 mm,离心(1 000×g)30 min未分层,在40℃和-20℃条件下放置10 d稳定。     

不同微乳配方对药物经皮渗透的影响

目的:考察不同微乳配方对左金微乳凝胶中有效成分经皮渗透的影响。方法:采用改良Franz扩散池,以凝胶中盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱4种生物碱为评价指标,用HPLC方法测定接收液中上述4个成分含量。结果:不同微乳配方的左金凝胶中盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱4种生物碱的经皮渗透速率和24h累积透过率有明显差异。结论:微乳处方的组成对药物的经皮渗透能力有一定的影响。