TSG101的下调对乳腺癌细胞的作用

目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSGl01)的下调对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的作用及TSG101在乳腺癌组织中的表达.方法:应用脂质体法将靶向TSG101的小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)转染入乳腺癌细胞系MCF-7细胞中.分别使用MTT法、流式细胞仪、transwell小室法检测siRNA干扰后MCF-7细胞增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率和细胞迁移能力的变化.使用免疫组织化学方法检测TSG101在54例乳腺浸润性导管癌及癌旁正常乳腺组织中的表达.结果:MTT结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞与对照组相比,增殖能力减弱.细胞周期结果显示.TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞周期G0/G1期及S期比例(70.51±0.23;23.65±0.78)与对照组(59.15±0.77,34.96±0.45)、(59.21±0.68.34.89±0.30)相比,G0/G1期比例增多,S期比例减少.细胞凋亡结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞(13.71±1.31)与对照组(4.37±0.87)、(6.00±0.08)相比,细胞凋亡率增加.细胞迁移结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞(4.60±0.80)与对照组(24.47±1.90)、(23.80±2.20)相比,细胞迁移能力减弱.免疫组化实验结果显示,TSG101蛋白主要定位于乳腺癌细胞质和(或)细胞核内,呈棕黄色颖粒.54例乳腺癌组织中TSG101阳性表达40例(74.07%),TSG101在癌旁正常乳腺组织中不表达或呈微弱的胞质表达,TSG101在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常乳腺组织.结论:TSG101的下调能够抑制乳腺癌细胞系MCF-7细胞的增殖,诱导凋亡,阻滞细胞周期于G1/S期,并且降低其迁移能力.TSG101可能参与乳腺癌的发生、发展过程.     

肺癌组织Axin与DNMT1表达及其生物学意义的探讨

目的:分析Axin和DNA甲基转移酶1(DNMT1)在肺癌组织中的表达和相关性,及其与肺鳞癌和腺癌临床病理因素的关系。方法:采用免疫组化方法检测Axin和DNMT1在100例肺癌组织中的表达情况。结果:Axin在肺鳞癌和腺癌组织中表达明显减少,其细胞质表达与肺癌的分化程度相关(P=0.044),核表达与肺癌的组织学类型(P=0.001)和TNM分期(P=0.016)相关。DNMT1在肺癌组织中的表达明显增加,并与肺鳞癌和腺癌的组织学类型(P=0.005)、分化程度(P=0.038)、TNM分期(P=0.031)和淋巴结转移(P=0.032)显著相关。Axin在肺癌组织中的低表达与DNMT1高表达显著负相关(r=-0.222,P=0.027),而在肺腺癌组织中Axin的核表达也与DN-MT1的表达显著负相关,r=-0.308,P=0.026。结论:Axin在肺鳞癌和腺癌组织中的低表达与DNMT1的高表达显著相关。DNMT1的表达可以作为肺癌恶性程度和进展情况的指标之一。     

Ki67在结节性筋膜炎的表达及意义

目的观察Ki67在结节性筋膜炎患者中的表达及其临床意义,并与纤维瘤病及纤维肉瘤进行比较。方法收集72例结节性筋膜炎、20例韧带样型纤维瘤病及20例纤维肉瘤患者的病理标本,利用免疫组织化学方法检测Ki67的表达,计算平均每张切片阳性细胞的百分比即为Ki67指数。分析Ki67指数与结节性筋膜炎各临床病理因素之间的关系。结果 72例结节性筋膜炎均可见不同程度的Ki67染色,平均Ki67指数为(24.1±14.9)%,70.8%的结节性筋膜炎患者Ki67指数为10%~50%。韧带样型纤维瘤病平均Ki67指数为(3.2±1.3)%,明显低于结节性筋膜炎的平均指数(P<0.01);纤维肉瘤平均Ki67指数为(26.2±3.3)%,与结节性筋膜炎比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ki67指数与病史长短有关(P<0.05),病史≤2个月者Ki67指数明显大于病史>2个月者,而与患者年龄、性别、病变大小、病变部位等均无关(P均>0.05)。45例结节性筋膜炎患者获得随访,随访时间为12~66个月,平均31个月;截止随访结束,有2例(4.4%)局部复发。结论结节性筋膜炎患者有较高Ki67指数及较大的变化范围,不能因为Ki67指数高而将结节性筋膜炎误诊为肉瘤。     

非小细胞肺癌中Chibby的表达及与β-catenin表达的关系

目的探讨Chibby在非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)的表达及与临床病理因素,β-catenin表达之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测100例NSCLC及相应癌旁正常肺组织中Chibby和β-catenin的表达,采用Western Blot方法检测35例新鲜肺癌组织及其癌旁正常肺组织中Chibby的表达情况。结果 Western Blot结果显示NSCLC中Chibby蛋白表达水平与癌旁正常肺组织相比无显著差异(>0.05)。免疫组化结果显示Chibby在NSCLC组织中的细胞核阳性率为43.0%(43/100),其在正常肺组织中的细胞核阳性率为82.0%(82/100),差异显著(<0.05);肺腺癌中Chibby细胞核阳性率57.9%(33/57)显著高于其在肺鳞癌中的阳性率23.3%(10/43,<0.05);无淋巴结转移组中Chibby的细胞膜阳性率38.9%(21/54)显著高于淋巴结转移组19.6%(9/46,<0.05)。β-catenin在细胞浆中的异常表达与NSCLC的分化程度呈负相关(<0.05)。Spearman相关性分析发现,NSCLC中Chibby在细胞膜/浆中的定位分别与β-catenin在细胞膜/浆的定位具有相关性(<0.05)。结论 Chibby在NSCLC组织中的细胞核表达显著低于正常肺组织,Chibby可能作为β-catenin的分子伴侣并调控β-catenin在细胞内的定位。     

乳腺癌中TSG101与MAPK／ERK信号通路的关系

目的 研究乳腺癌中TSG101与MAPK／ERK信号通路的关系。方法应用脂质体法将靶向TSG101的siRNA转染入乳腺癌细胞株MCF-7中。分别使用免疫荧光和Westernblot方法检测siRNA干扰后MCF-7中p-ERK蛋白表达的改变。使用免疫组织化学方法检测TSG101、p-ERK蛋白在54例人乳腺癌组织中的表达。结果TSG101siRNA转染后的MCF-7中p-ERK蛋白表达明显减少。TSG101和p-ERK蛋白在乳腺癌组织中的阳性率分别为74．07％、81．48％。TSG101和p-ERK在乳腺癌组织中的蛋白表达存在正相关（r=0．371,P〈0．05）。结论TSG101在乳腺癌中可能通过MAPK／ERK信号通路发挥生物学作用。     

非小细胞肺癌中MTA1的表达及临床意义

目的：研究非小细胞肺癌中MTA1蛋白表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学法检测96例非小细胞肺癌组织MTA1蛋白表达情况,并探讨其与非小细胞肺癌临床病理因素的关系。结果：MTA1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于癌旁正常肺组织（P〈0.05）,其表达与患者年龄、性别、病理组织学分型及肿瘤大小无明显相关性（P〉0.05）。MTA1的表达水平与淋巴结转移及TNM分期相关,在有淋巴结转移的病例中的表达（阳性率为75.6%）显著高于无淋巴结转移的病例（阳性率为54.5%）,在Ⅲ和Ⅳ期病例中的表达（阳性率为76.3%）显著高于Ⅰ和Ⅱ期（阳性率为55.2%）（P〈0.05）。结论：MTA1表达水平与患者的TNM分期密切相关,在非小细胞肺癌进展包括淋巴结转移的过程中起到重要作用,可能成为潜在的治疗靶点。     

黏附调节因子p120ctn 3A细胞核靶向表达质粒的构建及鉴定

目的：既往少数研究表明p120ctn存在核浆穿梭现象,为研究细胞核内p120ctn的功能,我们试图构建p120ctn 3A细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 3A。方法：采用PCR方法扩增人p120ctn 3A活性片段,将其插入细胞核定向表达载体pCMV/myc/nuc,构建重组体pCMV/p120ctn 3A,经脂质体介导转染肺癌细胞A549,用荧光显微镜观察绿色荧光信号,免疫细胞化学及Western blot鉴定其在肺癌细胞A549中的表达与定位。结果：限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入pCMV/p120ctn 3A的片段为2496bp左右,与预期p120ctn 3A基因片段大小相同。荧光显微镜观察到绿色荧光信号定位于细胞核内,免疫细胞化学结果显示表达的p120ctn 3A定位于A549细胞核。Western blot结果显示转染pCMV/p120ctn 3A的A549细胞p120ctn 3A蛋白表达量显著上调。结论：成功构建了p120ctn 3A细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 3A。     

DNMT1高表达与beta-catenin蓄积及肺鳞癌、腺癌的恶性表型相关

背景与目的 DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)是调控DNA甲基化的重要分子之一,DNMT1的异常表达与抑癌基因的甲基化、失活和多种肿瘤的发生发展有关.本研究旨在分析阐明DNMT1在正常肺组织和肺癌组织中表达的差异及其与肺鳞癌和腺癌临床病理因素的关系,并探讨DNMT1与β-catenin在肺癌中表达的相关性.方法采用组织芯片和免疫组化方法检测DNMT1和β-catenin在84例肺鳞癌、腺癌和相应癌旁正常肺组织中的表达情况.结果 DNMT1在84例肺癌组织中的平均阳性率为(58.04±35.07)%,显著高于癌旁正常肺组织[(6.88±10.26)%](t=12.835,P<0.001).DNMT1的高表达与肺癌组织的腺癌组织学分型(r=0.365,P=0.001)、低 分化程度(r=0.253,P=0.021)和淋巴结转移(r=0.246,P=0.024)正相关.DNMT1 与β-catenin的细胞浆表达显著正相关(r=0.571,P<0.001).结论 DNMT1的高表达是肺鳞癌和腺癌的普遍现象,DNMT1的高表达与肺癌的腺癌组织学类型和恶性表型有关;DNMT1在肺癌中可能与β-catenin协同表达.     

Axin过表达下调β-catenin和TCF-4表达并抑制肺癌BE1细胞的增殖和侵袭

背景与目的 Axin是Wnt通路的重要负性调节因子,其低表达和β-catenin、TCF-4的高表达与多种肿瘤有关.本研究旨在探讨axin在肺癌细胞中的表达与β-catenin和TCF-4的关系,及其对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法 将axin基因转染入axin低表达的肺癌BE1细胞系,应用免疫荧光方法观察转染组和对照组细胞中axin的表达对β-catenin和TCF-4的影响;采用RT-PCR方法检测axin和β-catenin、TCF-4 mRNA表达的变化;采用流式细胞术、MTT和Transwell检测肺癌细胞凋亡、增殖和侵袭能力的变化.结果 肺癌BE1细胞转染axin基因后(BE1-axin),axin的mRNA和蛋白水平均明显增加,β-catenin蛋白表达明显减少,TCF-4的蛋白和mRNA表达均明显下降.同时,BE1-axin细胞的凋亡率增加,增殖和侵袭能力明显下降.结论 Axin过表达能下调β-catenin的蛋白表达和TCF-4的转录,抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力,并诱导肺癌细胞凋亡.     

p120-catenin和Rac1的协同表达与非小细胞肺癌恶性程度相关性的研究

背景与目的 在肺癌组织中,p120-catenin(p120ctn)与small GTP酶家族中的主要成员Rac1的表达是否具有相关性,至今尚不清楚.方法 本研究应用S-P免疫组化、Western Blot、RT-PCR方法观察138例肺癌标本及2种具有不同侵袭转移能力的同源肺癌细胞系中p120ctn和Rac1的表达.结果 在肺癌组织中p120ctn的蛋白和mRNA表达水平均明显低于正常肺组织,而Rac1在肺癌组织中的表达明显高于正常肺组织,p120ctn的异常表达与Rac1的过表达有较好的相关性(Correlation coefficient=0.720,P＜0.001),并与肺癌的分化(P=0.022),分期(P=0.010)和淋巴结转移(P=0.009)相关.同时,在肺癌细胞系中我们还观察到p120ctn表达下降和Rac1的过表达现象在具有高转移能力的BE1细胞系中尤为突出.结论 肺癌中p120ctn的异常表达与Rac1的过表达有关,并与肺癌的恶性程度相关.