中国人LHON患者mtDNA继发突变的筛查

目的分析中国人Leber遗传性视神经病变(Leber's hereditary optic neuropathy,LHON)线粒体DNA 4个继发突变位点与LHON发病的关系.方法分别用突变特异性引物聚合酶链反应,异源双链-单链构象多态性,限制性片段长度多态性和DNA测序方法,对137例LHON患者、60例不明原因球后视神经炎进行mtDNA3394C、9438A、13708A、4216C 4个继发位点的检测,并以100例正常人作对照.结果在4例LHON患者(包括3例11778突变、1例3460突变)、2例不明原因球后视神经炎患者及1例正常人中发现存在13708位点突变(G→A),引起ND5蛋白第458位中度保守丙氨酸变成苏氨酸(A458T).经χ2检验,无统计学意义.在1例正常人中检测到3394位点T→C突变,造成ND1蛋白第30位高度保守酪氨酸变成组氨酸(Y30H).137例LHON患者及60例不明原因球后视神经炎患者均未发现此位点突变.在137例LHON患者、60例不明原因球后视神经炎患者及100例正常人中未检测到9438及4216位点突变.结论我们的研究结果与日本、韩国研究结果相似,初步排除了在中国人kber遗传性视神经病变患者中13708A、3394C、9438A、4216C四种突变协同原发突变发病的可能性.     

高度近视人群METTL4基因的单核苷酸多态分析

目的:分析位于18p11.31的METTL4基因的单核苷酸多态(SNPs),探讨它们与高度近视发病的关系。方法:收集正常对照人群71例及高度近视患者177例,其中常染色体显性遗传家系先证者(AD组)59例、常染色体隐性遗传家系先证者(AR组)46例、无明显家系的散发患者(SF组)52例。制备外周血基因组DNA,PCR扩增METTL4基因的外显子序列,应用异源双链-单链构象多态性(HA-SSCP)方法分析PCR产物,对存在差异条带的PCR产物进行测序分析。结果:在METTL4基因的编码区发现2个SNPs位点:SNP7438A→C位于第2外显子,Glu 230 Asp,在GenBank未见报道;SNP131C→A位于第4外显子,Gln310Lys。正常人与高度近视各组SNP7438A→C的基因型分布无明显差异;AR高度近视组、SF高度近视组的SNP131C→A基因型分布与对照人群无显著差异,而AD高度近视与对照组差异显著(P<0.05)。结论: SNP7438A→C与高度近视的发病无关。SNP131C→A与AD高度近视发病的关系需要进一步研究。     

葛根素腹腔注射在家兔房水中的药代动力学研究

目的　测定腹腔注射葛根素后不同时间家兔房水中的质量浓度 ,计算其药代动力学参数 ,研究药代动力学特点。方法　 44只健康新西兰成年家兔随机分为 11组 ,各组每只家兔腹腔注射葛根素 80mg/kg加等量 5 %葡萄糖液 ,在用药后 0、0 5、1、2、3、4、6、8、12、16、2 4h取房水 ,采用反向高效液相色谱法 (RP HPLC)进行测定。 3P87软件拟合药代动力学参数。结果　注射后其质量浓度在正常家兔房水呈二室模型 ,3P87软件拟合药代动力学参数数值为 :达峰质量浓度(Cmax)为 1 613 μg/ml,达峰时间tmax为 1 680h ,半衰期t1/ 2α为 1 3 5 8h、半衰期t1/ 2 β为 19 72 2h ,表观分布面积 (V/F)为 4 888L ,曲线下面积 (AUC)为 8 5 0 1μg/(ml·h) ,清除率 (CL)为 2 165L/h。实测值 :3 0min为 ( 0 778± 0 2 89) μg/ml,2h达峰值为( 2 3 18± 0 14 7) μg/ml ,随后逐渐下降 ,2 4h几乎测不到。 结论　本方法灵敏、特异、准确 ,可用于房水中葛根素质量浓度测定 ;葛根素通过腹腔注射能透过血房水屏障进入房水 ,半衰期长。此结果为葛根素全身用药治疗眼部疾病提供了实验依据。     

混浊的晶体后囊的处理——一种囊膜切除新技术

避免在白内障摘出术中扰乱玻璃体,是减少视网膜脱离或黄斑囊样水肿等严重并发症的重要条件。因此,为保护玻璃体前界膜,许多医生喜用囊外摘出术或抽吸术。但当后囊明显混浊时,囊外手术仍需打开乃至除去后囊。以往依据后囊的情况及病人的年龄,分别使用后囊刺开、Nd-YAG激光囊膜切开、全囊膜切除、用剪刀或玻璃体切割器切除后囊,但这些囊膜切除法多会引起玻璃体完整性的明显破坏。为保持玻璃体完整,作者介绍一种后囊切除时玻璃体保护技术在     

10遗传型视网膜母细胞瘤肿瘤Rb基因突变分析

１０例遗传型视网膜母细胞瘤肿瘤组织Ｒｂ基因突变分析张清炯箕田健生曾瑞萍吴中耀遗传性视网膜母细胞瘤（ｒｅｔｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，ＲＢ）是由Ｒｂ基因两次突变而失活所致，第一次突变为生殖细胞性突变，第二次突变为体细胞性突变。生殖细胞性突变决定携带者患ＲＢ的...     

川芎嗪对rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞干预作用的光镜观察

目的通过rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞的病理变化探讨盐酸川芎嗪对遗传性视网膜色素变性小鼠可能的治疗作用。方法rd和rds新生鼠各84只,随机分为两组,实验组和对照组,每组42只小鼠。实验组小鼠从出生当天开始,ip盐酸川芎嗪80mg/kg,每日2次,至出生后35d;对照组ip等量生理盐水。分别于0d和注射后3、7、14、21、28、35d取眼球,立即经10%中性甲醛固定,光学显微镜下观察水平视网膜近赤道部位光感受器细胞的厚度。结果病理结果显示,经盐酸川芎嗪治疗后14、21、28、35d,与未用药的对照组相比较,rd和rds小鼠光感受器细胞层数明显增加(P<0.01)。结论川芎嗪可延缓rd和rds小鼠视网膜光感受器细胞的破坏。     

进一步重视和加强眼底病相关的基因研究

随着医学科学的发展、社会的进步和人民生活水平的提高，一些既往常见的致盲眼病成为可以预防或治疗的疾病，而老年性黄斑变性（AMD）、糖尿病视网膜病变、高度近视视网膜病变、原发性开角型青光眼、视网膜色素变性（RP）、锥杆细胞营养不良、原发性视神经萎缩等涉及视网膜结构和功能异常的一系列眼底疾病成为了难治性眼盲的主要原因。这些疾病的发生都与基因变异有密切关系，是目前国际上研究的热点。人类基因组计划的完成及相关遗传学技术的广泛应用，为眼底病基因研究提供了良好的平台，并且已经取得了一系列突破性进展。     

中国人Leber遗传性视神经病变线粒体DNA突变频谱

目的 分析中国人Leber遗传性视神经病变（Leber′s hereditary optic neuropathy, LHON）线粒体DNA（mitochondrial DNA, mtDNA）3个原发致病基因突变的频谱及其遗传特征。 方法 分别用突变特异性引物聚合酶链反应(mutation-specific priming polymerase chain reaction, MSP-PCR)、异源双链-单链构象多态性（heteroduplex-single strand conformation polymorphism polymerase chain reaction,HA-SSCP ） 、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms,RFLP)和DNA测序等方法,对140个LHON家系的先证者（男120人,女20人）进行mtDNA 3个原发致病突变位点,即G11778A、G3460A和T14484C的检测,并对这些患者的家系进行遗传分析。 结果 在140例LHON 先证者中,130例（男113人,女17人）为G11778A位点突变,占92.9%;2例（男、女各1人）为G3460A位点突变,占1.4％;8例（男6人,女2人）为T14484C位点突变,占5.7%。 结论 中国人LHON患者mtDNA 3个原发致病突变中,以G11778A位点突变为主,少数为G3460A 和T14484C位点的突变。（中华眼底病杂志,2003,19：269-332）     

盐酸川芎嗪经腹腔注射在兔眼视网膜组织中的药代动力学

目的　测定腹腔注射盐酸川芎嗪后不同时间兔眼视网膜川芎嗪的浓度 ,计算其药动学参数 ,研究其药动学特点。方法　 4 4只家兔随机分为 11组 ,每只家兔腹腔注射盐酸川芎嗪 80mg·kg-1,在用药前 (0h)和用药后 0 2 5、0 5、0 75、1、1 5、2、3、5、8、12h取视网膜 ,采用反向高效液相色谱法 (RP HPLC)进行测定。 3P87软件拟合药动学参数。结果　腹腔注射盐酸川芎嗪后 ,其浓度在正常家兔眼视网膜呈开放型二室模型。理论值高峰浓度 (Cmax)为 1 6 3mg·g-1,达收稿日期 :2 0 0 4-0 1-3 1,修回日期 :2 0 0 4-0 2 -2 8基金资助 :广东省自然科学基金 (张清炯 0 10 765 )、国家自然科学基金(杨锦南 3 0 3 0 0 467)和广东省中医药管理局科学基金 (邓新国 10 40 0 64 )资助项目作者简介 :邓新国 ( 1961-) ,男 ,博士 ,研究方向 :眼科药物的开发、药理、药效和药代动力学研究 ;胡世兴 ( 195 2 -) ,男 ,博士 ,美国波士顿哈佛医学院眼科及免疫学博士后研究员 ,教授 ,博士生导师 ,通讯作者 ,Tel:0 2 0 873 3 0 2 89,E mail:Markhu @2 63 .net峰时间 (Tmax)为 0 32h ,半衰期T1/ 2α为 0 35h ,T1/ 2 β为 2 5 0h ,清除率 (CL)为 7 89g·h-1。实测值 15min为 (1 36± 0 16 )mg·g-1,30min达高峰为 (2 5 9± 0 19)mg·     

葛根素腹腔注射在兔视网膜组织中的药动学研究

目的　测定 ip葛根素后不同时间新西兰白兔视网膜组织中葛根素含量 ,计算其药动学参数 ,研究药动学特点。方法　 4 4只家兔随机分为 11组 ,各组每只家兔 ip葛根素 80 m g/ kg加等量 5 %葡萄糖液 ,在用药前 (0 h)和用药后 0 .5、1、2、3、4、6、8、12、16、2 4 h取视网膜组织 ,采用反相高效液相色谱法 (RP- HPL C)进行测定 ,3P87软件拟合药动学参数。结果　 ip葛根素后在兔视网膜组织中药动学符合开放式二房室模型 ,药动学参数理论值为 :Cmax=1.0 8μg/ mg,tmax=1.5 2 h,t1 / 2α=1.0 2 h,t1 / 2β=7.37h,CL =2 .6 7g/ h,AUC=6 .89μg/ (h· m g)。实测值为 :30 min时视网膜中葛根素的量为 (0 .0 6± 0 .0 2 ) μg/ mg,在 2 h达到高峰 Cmax为 (0 .2 1± 0 .0 5 ) μg/ mg,随后逐渐下降 ,8h降至较低为 (0 .0 2± 0 .0 0 )μg/ mg。结论　本方法特异、准确、灵敏 ,可用于视网膜组织中葛根素含量测定 ,葛根素通过 ip给药能透过血 -视网膜屏障 ,进入视网膜组织。