脑出血不同时机灶周细胞凋亡的研究

目的观察不同时间点血肿周围的细胞凋亡性改变程度。方法以乳猪自体血脑叶出血为模型,获取不同时间点的血肿周围脑组织,用原位杂交和TUNEL试剂盒检测灶周细胞的Bax基因的转录和细胞凋亡程度。结果Bax阳性细胞数于24h达高峰,3h与6h间差异无显著性意义(P=0．986);细胞的吸光度3h与6h、12h间差异均无显著性意义(P＞0．05),24h与3h、6h、12h间差异均有显著性意义(P＜0．05)。凋亡阳性细胞计数24h达高峰(P<0．001),3h与6h之间差异无显著性意义(P=0．999);凋亡阳性细胞面积3h与6h组间和12h、24h、48h间差异均无显著性意义(P＞0．05)。结论脑出血急性期灶周继发性神经元凋亡在3～6h内较轻,在24～48h明显加重,为减轻细胞凋亡,宜尽早采取有效的干预措施。     

急性期脑出血灶周水肿的磁共振弥散加权成像临床初步研究

目的应用磁共振弥散加权成像(DWI)探讨急性期脑出血血肿周围水肿性质及形成机制。方法对满足检查条件的连续发病2周内的44例脑出血患者进行DWI成像,测量血肿周围1cm区域和水肿区表观弥散系数(ADC)的变化情况,对水肿区相对ADC与水肿体积做相关分析。结果44例脑出血患者血肿周围均存在水肿,40例患者血肿周围ADC升高,水肿区ADC较对侧对称区域升高58．6%差异有非常显著性意义(P＜0．001),血肿周围1 cm区域较对侧对称区域ADC升高24．1%;水肿区相对ADC与绝对水肿体积和相对水肿体积呈正相关(P=0．003)。另4例患者血肿周围水肿区ADC降低。结论急性期大部分血肿周围水肿ADC升高,血管源性水肿是其主要的发生机制;少数患者血肿周围水肿ADC下降,提示细胞毒性水肿占主导地位,患者病情多危重,预后不良。     

对比研究经颈动脉和立体定位注射骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑卒中

目的探讨安全高效移植骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cells,MSCs)治疗脑缺血的方法.方法采用连续传代培养的方法纯化MSCs,Brdu标记后分别经颈动脉(1×104/μl,200 μl)和立体定位(1×105/μl,10 μl)注射至大鼠脑缺血2 h再灌注1 d模型,各自设立对照组,观察术后神经功能评分以及脑部Brdu阳性细胞的分布.结果经颈动脉注射组较立体定位注射组爬杆实验评分低(P＜0.05),Brdu阳性细胞存活多,迁移范围更广.结论 MSCs具有卒中后脑保护作用,而经颈动脉的给药方式优于立体定位注射.     

饥饿状态引起大鼠海马细胞DNA损伤

目的研究饥饿状态对海马细胞DNA的损伤。方法分别运用单细胞电泳(彗星实验)和缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞核DNA单链及双链损伤,半胱天冬酶3(caspase3)活性片段免疫组化检测海马细胞caspase-3激活;结合神经元尼(氏)体染色和苏木素伊红(HE)染色了解海马神经元形态和数目变化。结果经受饥饿状态1周的动物可见海马细胞DNA单链损伤,海马各区caspase-3活性片段免疫反应阴性,但TUNEL法检测到一种具非典型凋亡特征的阳性显色;经受饥饿状态2个月的动物,DNA单链损伤持续存在,海马CA1区caspase-3活性片段免疫组化见广泛细胞浆阳性表达,海马其他区域仅有零星阳性细胞,但TUNEL检测无阳性细胞。神经元尼(氏)体染色示,饥饿状态1周和2个月海马神经元部分尼(氏)体溶解消失。HE染色示,经受饥饿状态1周和2个月的动物,海马CA1区锥体层细胞数减少(P<0.05)。结论饥饿状态可造成大白鼠海马细胞染色体DNA损伤及部分细胞死亡。     

人淀粉样前体蛋白基因与绿色荧光蛋白融合基因筛选系统的建立

目的 构建携带人淀粉样前体蛋白（APP）的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）载体。以利于初步筛选对APP mRNA水平作用的药物。方法 将pEGFP质粒和携带野生型APP695亚型的pXCJL经Hind Ⅲ酶切，连接．PCR初筛，酶切鉴定。进一步经测序证实。携带野生型人类APP751亚型cDNA的pCDNA3．1质粒用XbaⅠ酶切．Klenow酶填平．再用HindⅢ酶切．回收APP751片段；质粒EGFP用SmaⅠ和Hind Ⅲ酶切。将目的基因APP751片段与EGFP载体片段连接生成重组质粒．酶切鉴定．测序证实。构建好的重组质粒转染COS-7细胞．观察EGFP的表达情况。结果 APP695和APP751重组质粒上的EGFP在COS-7细胞内得以表达。结论 构建的APP—EGFP融合基因重组质粒．有助于方便、快速地初筛出作用于APP mRNA水平的药物。     

缺氧诱导因子-1 α、VEGF在脑出血灶周的表达研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor--1α,HIF-1α)、(vascular endothelialgrouth foutor,VEGF)在脑出血灶周中的表达,并探讨其表达的意义.方法应用免疫组织化学技术检测37例脑出血灶周脑组织中HIF-1α、VEGF的表达.结果37例脑出血灶周脑组织中HIF-1α阳性率为40.6%,HIF-1α在出血量＞60mL时高表达,其阳性率为88.9%,与其他出血量(30～45mL,45～600mL)阳性率的表达比较有显著意义(P＜0.05).HIF-1α表达与手术时间明显相关,随着手术时间的推迟而增加,差别有显著性意义(P＜0.05).HIF-1与VEGF的表达呈正相关(n=15,r=0.79)(P＜0.01).结论脑出血后HIF-1α的表达与出血量及手术时间相关,为判断脑出血灶周缺血半暗带的存在提供了依据;HIF-1 α与脑出血后微循环的重建有关.     

血管性痴呆的实验研究

血管性痴呆 (vasculardementia,VD)是因脑血管疾病所致的智能及认知功能障碍的临床综合征。随着世界人口老龄化 ,脑血管病的发病率逐年升高 ,并发血管性痴呆也随之升高。VD不仅严重损害患者健康 ,影响患者的生命质量 ,也给社会和家庭带来沉重的负担 ,引起了世界各国的普遍关注。它是老年医学领域中的一个重要课题。因此近年来关于血管性痴呆的实验研究日渐增多 ,并取得了一定的成绩。但由于造模方法不同如双侧颈总动脉结扎 (2VO)、4血管结扎 (4VO)、缺血再灌注、卒中倾向高血压大鼠 (stroke pronesponta neouslyhyertensiverats,SHRSP…     

阻塞性脑血管病的脑循环动态CT的初步观察

动态CT(DCT)技术是采用第三、四代具有动态程序等高性能的CT扫描机,通过静脉快速注入造影剂后连续进行快速CT扫描,以检查血管和局部组织血液动力学变化的新型检查方法。一方面可直接显示出血管和组织的病变,另一方面也可了解由于阻塞性血管病变引起的血管内血流变化及组织灌注异常情况。近年来才有一些国外作者运用DCT来深入     

凋亡敏感基因在短暂性缺氧再复氧复注血清后的大鼠星形胶质细胞中的表达及其意义

目的研究一种新发现的抗氧化蛋白质--凋亡敏感基因(SAG)在短暂性缺氧再复氧复注血清诱导的细胞坏死和凋亡中的作用.方法用短暂性缺氧再复氧复注血清来诱导原代培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞损伤,用免疫细胞化学方法检测凋亡敏感基因的表达,并作图像分析;用流式细胞仪检测胶质细胞在短暂缺氧再复氧复注血清后不同时间点的凋亡率.结果凋亡敏感基因在缺氧15 min再复氧复注血清5 h后表达最高,在复氧复注血清16 h后恢复至对照组水平;细胞凋亡率在缺氧15 min再复氧复注血清1h时达到最高,而在再复氧复注血清5 h后降至对照组水平.结论凋亡敏感基因具有抗凋亡的作用,可减轻星形胶质细胞的缺血再灌注损伤.