人不同程度疲劳状态唾液蛋白标志物的肽谱研究

目的　利用目前比较成熟的唾液飞行时间质谱分析技术探索疲劳状态与非疲劳状态下有差异的大分子量肽段,为研究疲劳更加便捷稳定的标志物提供重要的理论基础。方法　采集10名健康志愿者唾液样本,采用磁珠富集（MB）和原液直接检测两种样品处理方式进行飞行时间质谱分析,以MB的唾液质谱和离心后直接取上清液（原液）的唾液质谱建模。结果　磁珠和直接采样均在2 000~15 000 Da具有很好的谱图,富集会丢失部分峰。每个人早、晚的谱图均有差异,由于样本份数有限,暂未行交叉验证,因此每个样本采两张谱图,早晚各用20张谱图进行建模分析：在原液样本两组间发现3个差异肽。MB模型的交叉效度为92.06%,原液模型的交叉效度为95.49%。结论　人不同程度疲劳状态唾液蛋白标志物的肽谱在分子量2 000~15 000 Da范围内有差异峰,为进一步实现基于生物传感器技术等的便捷疲劳检测方法提供科学依据,具有重要的理论和现实意义。     

空肠弯曲菌耐药谱特征分析

目的 分析十几年间我国空肠弯曲菌临床分离株对10种抗生素耐药谱特征,了解我国空肠弯曲菌耐药的变迁趋势。 方法 采用世界卫生组织(WHO)全球食源性病原菌感染网络(GFN)推荐的弯曲菌琼脂稀释法,测定1995年至今分离的116株空肠弯曲菌对6类10种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)。 结果 经对实验结果整体分析,甲硝唑的总体耐药率最高为97.4%(113/116),四环素为82.8%(96/116),环丙沙星为80.2%(93/116),萘啶酸为79.3%(92/116),左氧氟沙星和氨苄西林耐药率相同,为40.5%(47/116),氯霉素为18.1%(21/116),庆大霉素为8.6%(10/116),链霉素为4.3%(5/116),最低为红霉素0(0/116)。随着时间的推进,萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星和氨苄西林的MIC有明显增高趋势;四环素、红霉素、庆大霉素、氯霉素和甲硝唑的MIC值变化不明显;链霉素的MIC值变化有下降的趋势。6.1%的菌株出现了8种抗生素多重耐药的结果,且菌株均出现在2010年后。经统计学分析,萘啶酸、环丙沙星、链霉素、庆大霉素、氯霉素和氨苄西林6种抗生素在2001年前、2001-2005年、2006-2010年和2010年后4个时间段中耐药率差异有统计学意义。 结论 空肠弯曲菌对红霉素、庆大霉素以及链霉素3种抗生素依旧保持了较高的敏感性,对萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、甲硝唑以及氨苄西林6种抗生素产生了较大程度的耐药。     

一种新的幽门螺杆菌克拉霉素耐药相关基因

目的:分析不同克拉霉素浓度下H pylori菌株耐药的发生机制,以期发现新的耐药基因．方法:以H pylori 26695株为初发菌株,经抗生素压力筛选、转座子Tn5插入失活、E-test检测等实验方法探讨H pyolri对克拉霉素的耐药机制．结果:经12次传代,在0．5 mg／L克拉霉素浓度下培养出的耐药株经-80℃冻存30 d复苏,仍为抗性菌株;克拉霉素抗性的转座插入株于 700 bp左右出现条带;经96-168 h培养,单纯经抗生素选择压力筛选的低浓度耐药株E-test 出现椭圆形抑菌环,而经Tn5插入的克拉霉素抗性菌株无抑菌环出现．对插入位点基因的测序发现该片段与H pylori 26695菌株中“H pylori 1469”完全同源,为编码Omp3l的基因．结论:H pylori对克拉霉素的低浓度耐药,经转座后可转化为高浓度耐药,其耐药性的发生与23S rRNA点突变以外的Omp31基因有关．     

比对三种方法手术治疗肾结石

目的比较运用开放手术、经皮肾镜取术和纤维肾镜取石术治疗肾结石的临床效果.方法 选取2008年9月-2012年9月在我科治疗的270例肾结石患者临床资料进行回顾性分析,分别运用开放手术、经皮肾镜取术和纤维肾镜取石术治疗肾结石,比较三者术后的临床效果情况.结果 开放手术组、经皮肾镜组、纤维肾镜组三组在结石清除率上无明显差异性,开放手术组、经皮肾镜组在出血量、血尿、手术时间上无明显差异性,而经皮肾镜组和纤维肾镜组在住院时间上无明显差异性,p>0.05,无统计学意义,其他的下床活动时间、并发症、肾造瘘引流时间纤维肾镜组最好,经皮肾镜组其次,开放手术最后,而住院平均费用刚好相反,以上情况有显著的差异性,p<0.05,有统计学意义.结论 纤维肾镜取石术利用人体本来就有的生理通道,手术无痛苦,对肾脏损伤最小,临床效果满意,是治疗肾结石的最佳选择方法.     

贵阳市327名就诊儿童幽门螺杆菌感染血清流行病学调查

目的 了解贵阳市就诊儿童幽门螺杆菌(HP)的感染状况,进行血清流行病学调查.方法 对14岁以下的就诊儿童进行快速幽门螺杆菌尿素酶抗体检测.结果 327名就诊儿童HP感染率是22.02％,男性感染率20.19％,女性25.44％,两者差异无显著性(P＞0.05)；各年龄组间儿童HP感染差异没有统计学意义(P＞0.05)；自身免疫系统疾病中HP感染率为30.30％,非自身免疫系统疾病为21.09％,未观察到与HP感染的明显相关性(P＞0.05)；消化系统疾病HP感染率是50％,明显高于非消化系统疾病HP感染率(P＜0.05).结论 HP感染相关消化道症状是影响该地区儿童就诊的重要相关因素；对低年龄组儿童因HP感染的就诊行为值得关注.     

布鲁氏菌和O:9型小肠结肠炎耶氏菌两种抗体鉴别的实验研究

采用ＳＡＴ、ＥＬＩＳＡ及ＤＩＢＡ分别对６种布鲁氏菌及耶氏菌Ｏ：９型感染的兔血清抗体的检查结果表明，无论用布鲁氏菌１０４Ｍ、耶氏菌Ｏ：９型菌集抗原做ＳＡＴ检查或用布鲁氏菌１６Ｍ超声波破碎抗原做ＥＬＩＳＡ检查均对布鲁氏菌与耶氏菌Ｏ：９型的兔血清抗体无鉴别意义；而用１６Ｍ可溶性蛋白抗原、外膜蛋白抗原以及用耶氏菌Ｏ：３型可溶性蛋白抗原、外膜蛋白抗原做ＥＬＩＳＡ或ＤＩＢＡ均能对布鲁氏菌与耶氏菌Ｏ：９型的兔血     

BIOMIC药敏分析系统对最小抑菌浓度判读能力的评价

目的评价BIOMIC药敏分析系统对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant IS.aureus,/IMRSA)最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）的判读能力。方法用纸片扩散法检测50株MRSA对10种抗生素的敏感性,用BIOMIC药敏分析系统进行结果判读,与Etest结果进行比较,WHONET 5.4为分析软件。用BIOMIC推算的MIC值与Etest测得值的比值（BIOMIC MIC/Etest MIC）进一步比较两种方法测得的MIC一致性。结果两种方法测得庆大霉素结果( S、I、R)的一致率为98.00%,次要误差率为2.00%,其余抗生素结果( S、I、R)的一致率为100%。BIOMIC MIC/Etest MIC 比值分析结果为,MIC总一致率为83.92%。 结论BIOMIC分析系统和Etest方法对于检测MRSA具有较好一致性,尤其是药物敏感菌株,可以用于临床检测或耐药监测的初步判定。     

空肠弯曲菌外膜蛋白rOMP18的克隆表达及抗原性分析

目的构建空肠弯曲菌omp18基因的重组表达质粒、克隆表达rOMP18重组蛋白、对表达产物进行鉴定并评价其抗原性。方法PCR扩增空肠弯曲菌的omp18基因片段,将其连接到表达载体pET32a(+)中并转化至大肠杆菌(E.coliBL21(DE3)),诱导表达后SDS PAGE分析其表达产物并纯化目的蛋白。应用空肠弯曲菌感染免疫血清,利用Western blot方法分析其抗原性。结果与结论单、双酶鉴定结果显示已成功构建rOMP18的重组表达载体pET32a omp18,IPTG诱导表达产物的相对分子质量与理论相符34kD（HIS16kD）。Western blot检测结果表明重组蛋白rOMP18具有抗原性,为空肠弯曲菌感染的特异抗体的检测提供候选抗原。     

犬种布鲁氏菌外膜蛋白的特征及宿主牦牛对其外膜蛋白的影响

SDS—PAGE揭示出犬种布鲁氏菌外膜蛋白具有布鲁氏菌属的共同性,同时也具有其种的特征性。其独特表现为:具有一组非热修饰蛋白成分;且其微孔外膜蛋白解聚后除解聚成正常单体外,还有一组特殊的热修饰组分,此二成分受不同宿主影响而有所差异。     

幽门螺杆菌作用后AGS细胞内钙离子的动态变化研究

背景幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与胃癌发生密切相关,但致病机制尚未清晰。细胞毒素相关蛋白A(CagA)是Ⅰ型Hp的主要毒力因子,在Hp诱导的疾病特别是胃癌的发展中起重要作用。前期的研究发现,Hp作用后人胃腺癌上皮细胞(AGS)的钙离子相关蛋白钙网织蛋白CRT以及钙离子结合蛋白CALNUC磷酸化程度发生改变,提示Hp可能会影响AGS细胞的钙稳态,通过钙离子通路影响细胞的增殖或凋亡。目的研究Hp作用于人胃腺癌上皮细胞后,AGS细胞内钙离子的时序性变化,以及CagA对AGS细胞内钙离子的影响,进一步揭示Hp的致病机制。方法采用钙离子荧光标记示踪法,AGS细胞以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,特异性地活体标记AGS内的钙离子,采用激光共聚焦显微镜观察分析Hp26695及其CagA缺失株(Hp26695△CagA)分别作用于AGS细胞1h、2h、3h、4h、5h、6h后,AGS细胞内钙离子的变化情况。结果幽门螺杆菌与AGS细胞相互作用1h,胞内Ca2+部分流失,5h胞内Ca2+大量流失。1～6h内,Hp26695与Hp26695△CagA作用的AGS细胞荧光强度没有显著差异。结论Hp作用会导致AGS细胞内Ca2+剥夺,且与CagA的存在无明显关联性。