北京市2001-2003年3141例儿科急性呼吸道感染中副流感病毒的研究

目的探讨应用传代狗肾细胞（MDCK细胞）进行副流感病毒（PIV）的分离,了解近年来北京地区儿科急性呼吸道感染中PIV的感染状况.方法收集2001年1月至2003年12月急性呼吸道感染患儿的临床标本3141例,应用微量细胞培养法比较MDCK细胞与传代猴肾细胞（Vero细胞）用于分离PIV的敏感性;所有标本接种于MDCK细胞,结合血凝试验及间接免疫荧光法进行PIV检测.结果 Vero细胞PIV分离阳性的标本在MDCK细胞中也得到阳性结果;3141例标本中PIV阳性94例（3.0%）.1191例上呼吸道感染患儿标本中PIV135例（2.9%）,PIV311例（0.9%）;1634例下呼吸道感染患儿标本中PIV115例（0.9%）,PIV3 24例（1.5%）;207例支气管哮喘患儿标本中PIV阳性3例（1.4%）;38例发热患儿中PIV阳性1例;71例其他标本中PIV阳性5例.结论利用MDCK细胞可进行PIV的分离;北京地区儿科急性呼吸道感染中PIV感染是原因之一.     

血浆代用品-海脉素在骨科手术中的应用

目的为了证明海脉素在应用中是一种理想的血浆代用品.方法观察了骨科择期手术中需要输血的大中手术20例,出血量在1000ml以下,术中静滴海脉素500～1000ml,均未予输血.结果输入海脉素后能维持患者的血流动力学的基本稳定,手术前后血常规、血生化测定比较虽有差异性,但各值均在正常范围之内,患者未出现不良反应.结论海脉素是一种安全、有效、便利、快速的较理想的血浆代用品.     

2009甲型H1N1流感流行期间北京急性呼吸道感染儿童常见呼吸道病毒的研究

目的了解2009至2010年甲型H1N1流感大流行期间北京地区急性呼吸道感染患儿中,除流感病毒外的其他几种常见呼吸道病毒感染的流行情况。方法设计并建立检测包括呼吸道合胞病毒（RSV）A/B亚型,副流感病毒（PIV）1、2、3型,腺病毒（ADV）和人博卡病毒（HBoV）在内的多重实时荧光PCR方法,并应用该方法对2009年6月至2010年2月甲型H1N1流感大流行期间,对首都儿科研究所附属儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿中甲型H1N1流感病毒检测阴性的咽拭子标本进行上述呼吸道病毒的核酸检测。结果新建立的多重RT-PCR方法最低可检测的目标基因含量为10～300拷贝数,未见与其他非目标病毒的交叉反应。本研究共检测标本849份,病毒检测总阳性率为39.0%（331份）,5岁以下占87.6%（290/331份）。各病毒的检测阳性率分别为RSV-A亚型1.4%（12份）,RSV-B亚型8.4%（71份）,PIV-1型8.2%（70份）,PIV-2型0.5%（4份）,PIV-3型3.9%（33份）,ADV13.9%（118份）,HBoV2.7%（23份）。RSV检出以B亚型为主（85.5%）,流行高峰在2009年11月至2010年2月。PIV检出以PIV-1型及PIV-3型为主,PIV-1型的流行高峰在2009年7月至2009年10月,PIV-2型及PIV-3型的流行高峰在2009年6～9月。ADV病毒在研究期间均有较高检出率（平均为13.9%）,HBoV的流行高峰在2009年9～12月。结论除流感病毒外,ADV、RSV-B及PIV可能也是2009甲型H1N1流感流行期间引起儿童急性呼吸道感染的重要病原。比较以往的资料可见各病原在2009甲型H1N1流感流行期间的流行季节性及检出率基本未受到新型流感病毒的影响。     

流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用

目的 对一种流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用效果进行评估。方法 2010年12月至2011年4月采集流感样病例患儿咽拭子标本350例,使用甲型及乙型流感病毒抗原检测试剂盒（QuickNaviTM-Flu,胶乳免疫层析法）进行抗原检测,并与病毒分离法进行比较。对于抗原检测和病毒分离法结果不相符的标本采用RT-PCR验证。结果 QuickNaviTM-Flu抗原快速检测流感病毒的结果与病毒分离法的一致性好,其检测甲型流感病毒的敏感度为89.9%,特异度为94.4%。经RT-PCR验证,14例抗原检测与病毒分离法结果不相符样本中13例结果为阳性(与抗原检测一致),使得该抗原检测方法的敏感度和特异度升至91.0%和99.6%。抗原检测乙型流感病毒经RT-PCR验证前后的结果一致,敏感度和特异度分别为87.5%和100%。该方法检测出的阳性标本中包括了甲3型、乙型（Victoria和Yamagata系）流感病毒和新发的2009甲型H1N1,并与常见的呼吸道病毒之间无交叉反应。结论 QuickNaviTM-Flu作为流感病毒抗原检测的试剂盒,可一次同时检测出甲型和乙型流感病毒,耗时短,操作简便,具有良好的敏感度和特异度,适用于流感样病例病原的快速诊断。     

北京地区2007-2008年G9型轮状病毒VP4、VP6、NSP4和NSP5基因分析

本研究室在2007-2008年收集的临床标本中再次发现北京地区儿童中有G9型轮状病毒的感染,并已对其进行了VP7基因分析和VP4基因巢式PCR分型~([1,2]).为进一步了解北京G9型轮状病毒的重要蛋白基因的进化,本研究室对2例从社区感染患儿中发现的北京G9型VP4、VP6、NSP4和NSP5基因进行测序及进化分析,结果简报如下.     

人博卡病毒研究进展

2005年,瑞典Karolinska大学附属医院临床微生物系的研究人员建立了一种集宿主DNA消除、随机PCR扩增、高通量测序、生物信息学分析为一体的分子病毒学方法,以进行大规模的临床标本中新病毒的筛选[1].该研究从下呼吸道感染患儿标本中检测到一种新的病毒,这一发现改变了30年来一直公认的细小病毒B19(B19V)是细小病毒科(parvoviridae)中惟一的感染人类病毒的理论.核苷酸序列比较和系统发生分析表明,这种新发现的病毒也是细小病毒科成员.鉴于此病毒与细小病毒科中牛(bovine)细小病毒及犬类(canine)微小病毒非常接近,将这种从儿童呼吸道感染标本中发现的新病毒命名为人博卡病毒(humanboeavirus,HBoV).至今,世界各地相继报道从儿童呼吸道(鼻咽拭子)、血清和粪便标本中检测到HBoV,这些患儿几乎都有呼吸道或胃肠道感染的临床症状.     

河南省汝阳县一次流行性喘憋性肺炎的调查

流行性喘憋性肺炎 (简称流喘肺炎 )即流行性毛细支气管炎 ,曾多次在我国部分农村地区流行[1] 。 1999年 11月至2 0 0 0年 1月 ,河南省汝阳县发生了一次流喘肺炎的暴发流行 ,首都儿科研究所和汝阳县人民医院协作对这次流行进行了调查 ,报告如下。对象流行期间在汝阳县人民医院门诊和住院的患儿 ,凡符合流喘肺炎诊断标准[2 ] 均被纳为调查对象。方法1.发病人数以流行期间我院门诊日志及各乡卫生院记录完整的患儿进行统计。2 .按首都儿科研究所设计的流喘肺炎调查表 ,从患儿的基本情况、居住环境、卫生状况、家庭情况、喂养方式、过敏史、喘憋…     

改进探针标记法斑点杂交在轮状病毒VP7分型中的应用

目的建立一种更加简便的A组人轮状病毒（HRV）核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查。方法在HRVVP7编码基因各G基因型问高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR分别将地高辛标记HRV5种常见型别（G1～4,G9型）的DNA探针,建立基于VP7的斑点杂交方法;选取经抗原检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测均为HRV阳性的2006至2008年住院腹泻患儿粪便标本200份,RT—PCR扩增VP7全基因,并对扩增阳性产物应用斑点杂交方法进行G型别分析。结果建立的斑点杂交方法在5种型别探针间无交叉反应,各型探针的检测灵敏度可达到10Pg。200份PAGE阳性标本中162份RT—RCR扩增VP7基因阳性,斑点杂交显示G1型41例（25．3％）,G2型2例（1．2％）,G3型63例（38．9％）,G9型35例（21．6％）,混合感染19例（11．7％）,杂交未分出型2例（1．2％）,未检测到G4型HRV。结论本研究所建立的斑点杂交方法敏感度和特异度强,适合在HRV大规模分子流行病学调查时应用。通过该方法的初步应用,发现北京地区婴幼儿HRV除了常见的G1、G2和G3型外,还有G9型感染。     

呼吸道合胞病毒地方株SH蛋白基因序列分析

目的 :分析我国呼吸道合胞病毒 (RSV)地方株SH蛋白基因的遗传特点、变异特征。方法 :从本室保存的不同年份、不同地区、不同流行特征的呼吸道合胞病毒地方株中抽取 7株 ,分别用RT PCR扩增其SH蛋白基因并克隆到PTZ18R载体中进行了序列测定和分析。结果 :我国RSV地方株间SH蛋白基因相比较变异的部位及形式很相似 ,地方株间核苷酸全序列的同源性为 97.0 %～ 10 0 %。结论 :RSV在我国不同地区的不同流行特征与SH蛋白基因的变异无明显关系     

酶免疫吸附法检测北京地区婴幼儿腹泻标本中的Noro病毒

目的: 研究北京地区婴幼儿Noro病毒腹泻的流行特点。 方法: 在2003年10月至2004年12月从首都儿科研究所就诊的腹泻患儿粪便标本中随机抽取167份应用酶免疫吸附试验（EIA）进行Noro病毒抗原检测，并随即抽取61份进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测轮状病毒。 结果: 167份标本中，Noro病毒阳性标本为46份，阳性率为27.54%。其中，GI型阳性标本有20份，占阳性标本总数的43.48%；GII型阳性标本有19份，占阳性标本总数的41.30%；另有7份标本为GI和GII同时阳性，提示为混合感染，占阳性标本总数的15.22%。发病年龄以2岁以下患儿为主，占总患病人数的93.48%。Noro病毒感染性腹泻未见明显的季节性。在检测轮状病毒的61份标本中，轮状病毒阳性的标本有29份，阳性率为47.54%。 结论: Noro病毒感染在北京地区婴幼儿腹泻中占有重要地位，仅次于轮状病毒。