2007-2008年北京地区儿童手足口病的病原学分析

目的 通过病毒分离和鉴定了解2007-2008年春夏北京地区手足口病的病原学特征,为手足口病防治工作提供科学依据.方法 分别于2007年4-8月及2008年5-9月收集256例手足口病患儿的咽拭子和疱疹液标本共356份,其中咽拭子255份(包括10份重症患儿标本),疱疹液标本101份.将所有标本接种Vero细胞进行病毒分离,分离阳性的毒株用RT-PCR进行鉴定;对10份重症患儿标本除病毒分离外,还直接进行RT-PCR检测病毒核酸.结果 256例被检测患儿中188例为肠道病毒阳性,阳性率为73.4%.356份标本中共分离到239株肠道病毒,总阳性率为67.1%.其中疱疹液标本分离阳性率为75.2%(76/101),咽拭子标本分离阳性率63.9%(163/255),但两种标本接种细胞后出现病变的速度没有差别.重症患儿标本病毒分离阳性率50%(5/10).2007年的45例病毒分离株经肠道病毒通用引物PCR检测均为阳性,分型PCR显示,其中CA16占95.6%(43/45),EV71占4.4%(2/45);而2008年的143例病毒分离株经肠道病毒通用引物PCR检测142例为阳性,PCR分型显示,EV71占82.4%(117/142),CA16占16.8%(24/142).10份重症患儿标本直接分型检测结果均为EV71.结论 北京儿童手足口病病原体以EV71和CAV16为主,2007年与2008年流行的优势型别不同,2007年主要为CA16,而2008年主要为EV71.本组重症手足口病患儿的病原均为EV71.     

人偏肺病毒基因型双重逆转录PCR检测方法的建立

目的 建立一种鉴别不同基因型hMPV的RT-PCR方法.方法 根据不同基因型的hMPV G蛋白基因序列设计合成A、B基因型的特异性引物,在一次双重PCR反应中根据扩增产物大小鉴别不同基因型.用该方法鉴别37份hMPV阳性的临床标本的基因型.结果 用hMPV G蛋白编码基因的分型引物进行PCR反应,对已知的hMPV阳性标本直接进行分型得到的扩增产物大小易于区分;对常见的呼吸道病毒无非特异扩增,显示引物特异性良好.对37份临床标本进行基因分型结果显示,20份A基因型分型结果与M基因测序分型结果一致,17份经M基因测序分型为B基因型的阳性标本中有14份与M基因测序分型结果一致,3份未得到扩增产物从而不能分型,总符合率为91.9%[(20+14)/37].结论 成功建立了一种可以鉴别不同基因型的hMPV的RT-PCR方法.     

关注细菌感染中抗菌药物的耐药性北大核心CSCD

当抗菌药物在20世纪初问世时,医疗卫生界曾认为人类已经赢得了这场与细菌的战争。然而,随着微生物的持续进化,人们很快就发现,微生物能够对几乎所有正在使用的抗菌药物产生抵抗。感染性疾病一直为人类疾病与死亡的重要原因。抗微生物药物耐药性的出现对感染性疾病的病种与发病人数以及医疗费用的增长都产生了巨大的影响。因此,医疗卫生界有必要对常见的细菌感染的抗微生物药物耐药性问题给予极大的关注。     

北京地区婴幼儿诺如病毒与轮状病毒所致腹泻的临床比较分析

目的 在病原学检测的基础上分析、比较婴幼儿诺如病毒腹泻与轮状病毒腹泻的临床特点.方法 对2002年1月至2006年12月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊的779例急性腹泻患儿收集粪便标本,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法检测轮状病毒基因,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)对其中318份标本检测诺如病毒抗原.结果 779份标本检出轮状病毒阳性263例,阳性检出率为33.8%;318份标本中诺如病毒阳性79例,阳性检出率为24.8%;其中16例为轮状病毒和诺如病毒混合感染.诺如病毒组在发热程度上与轮状病毒组差异有统计学意义,其他临床表现如发病年龄、日平均腹泻次数、疾病病程等均相似,而混合感染组与其他两组临床表现的差异均无统计学意义;但流行季节有所不同,轮状病毒腹泻更集中于寒冷季节,始于10月,直至次年4月,而于10月至次年1月的检出阳性率最高;诺如病毒的检出没有明显的季节性,一年四季均可检出,但是冬季的检出率略高于其他季节.结论 轮状病毒仍是秋冬季婴幼儿急性腹泻的主要病原,诺如病毒也是引起婴幼儿急性腹泻的重要病原之一,两者也是引起院内急性病毒性腹泻的主要病原,但两者的临床表现没有差异.     

新生儿胆道闭锁与病毒感染相关性的研究进展

新生儿胆道闭锁( biliary atresia,BA)是一种新生儿出生时或出生后几周内出现肝内胆管、肝管或胆总管发生闭锁或不发育的胆道破坏性疾病[1].该病在我国和日本的发病率要高于欧美地区[1],其临床表现为不同程度的持续性黄疸、陶土色粪便、浓茶样尿和肝脾肿大,晚期会出现胆汁性肝硬化、腹水、腹壁静脉曲张和凝血障碍,绝大多数患儿最终需进行肝移植手术,如不进行有效治疗,最终可因肝硬化、肝衰竭或严重的血凝障碍而导致死亡.     

2004年冬季北京患儿中低滴度甲3型流感病毒HA1基因特性分析

目的 分析2004年流感流行季节北京地区流感样病患儿患者分离的低滴度甲3型流感病毒血凝素（HA1）基因的特性。方法用2004年流感流行季节分离的22株低滴度甲3型流感病毒提取病毒RNA，经RT．PCR扩增得到HA1区基因片段。用生物信息软件分析HA1区基因特性。结果扩增的血凝素HA1区基因均为987bp。22株HA1氨基酸序列与当年的疫苗参考株比较，发现氨基酸变异，变异位点在3个抗原决定簇（A、B、D）和受体结合部位的位点，提示本流行季节的流感病毒变异较大，与世界卫生组织推荐2005年疫苗参考株比较，与南半球参考株有2个抗原决定簇（A、D）的氨基酸存在不同，与北半球参考株无明显差异。还发现1株变异，在高保守受体结合部位的底部98位氨基酸也发生了变异。结论2004年冬季流感流行株的变异倾向值得密切关注。     

儿童下呼吸道人类偏肺病毒感染的临床流行特征

目的 了解儿童人类偏肺病毒（hMPV）呼吸道感染的流行情况及临床特征。方法 收集2004年8月-2005年1月我院452例急性下呼吸道感染儿童的呼吸道分泌物标本，采用直接免疫荧光抗体法检测呼吸道合胞病毒、流感病毒甲型和乙型、副流感病毒1～3型和腺病毒，以上病毒检测阴性的245份标本再用逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测hMPVM基因，随机挑选部分PCR扩增产物送核苷酸测序作基因分析。结果 245份标本中hMPV阳性例数为59例（241％），452例患儿中单一hMPV感染率13．1％。冬季月份中hMPV检出数高于其他呼吸道病毒。59例hMPV感染患儿，平均月龄27．7月，各年龄组hMPV检出率差异无显著性（P〉0．05）。hMPV感染者临床特征与其他呼吸道病毒感染无明显差异（P〉0．05）。23份hMPVM基因部分核苷酸片段与GenBank中hMPV M基因序列同源性为82．8％～100％，基因进化树分析提示存在2种不同的hMPV基因。不同hMPV基因型感染者的临床表现差异无显著性（P〉0．05）。结论 hMPV是2004年冬季我院儿童下呼吸道感染流行的病毒病原，临床表现无特征性，2种不同基因型感染的临床特征也相似。     

北京地区2000-2004年分离的呼吸道合胞病毒B亚型株G蛋白基因的序列分析

目的 了解近年来北京地区流行的B亚型呼吸道合胞病毒（BSV）G蛋白的基因特征。方法 2000年冬季至2004年冬季自首都儿科研究所附属儿童医院收集的急性呼吸道感染患儿呼吸道标本，从中分离到B亚型RSV毒株，每年随机选取1至2株毒株，用RT-PCR扩增其G蛋白全基因后克隆至pBS-T载体中，筛选出阳性克隆后测序，并与B亚型标准株（CH18537）和文献报道的毒株序列进行比较分析。结果 所测毒株G蛋白全基因核苷酸长度分别为915、921和981bp，推导的氨基酸长度分别为292、293、312和315从。分离株与B亚型标准株CH18537间存在着明显的差异，CH18537株同分离株间的核苷酸的同源性为91．9％～93．7％，氨基酸的同源性只有85．0％～89．0％。分离株间核苷酸的同源性为93．4％～98．8％，氨基酸的同源性为88．2％～98．6％。氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端，而胞内区和跨膜区相对保守。此外，在进行G蛋白基因分析的8株B亚型分离毒株中，我们发现有3株BSVG蛋白在490～495位核苷酸缺失，3株RSVG蛋白在c末端791位后出现了60个核苷酸的插入，导致C末端259位后出现20个氨基酸的插入。这60个核苷酸与相邻的前60个核苷酸高度重复，只出现3至4个核苷酸的差异。该3株分离株与文献报道的有60个核苷酸插入的两株（S00-4和BA4128／99B）核苷酸和氨基酸同源性分别为97．5％～98．6％和95．5～98．1％，在插入的20个氨基酸中，有高达50％（9～10个氨基酸）左右的丝氨酸和苏氨酸氧连接的糖基化位点。结论 RSVB亚型G蛋白基因变异存在着多样性，分离株既有核苷酸替代，又有基因缺失和插入，还有糖基化位点的改变和氨基酸长度的改变。这种变异使G蛋白高度糖基化，提示最终可能导致病毒抗原性的改变。北京分离的有60个核苷酸插入的变异株与日本及西班牙报道的变异株有非常近的亲缘关系，提示这种G蛋白基因中有60个核苷酸插入的B亚型变异株已经在子代病毒中形成稳定遗传并在世界范围内传播。     

2008-2009年北京分离的肠道病毒71型基因组3'末端序列分析

目的 了解2008-2009年北京分离的肠道病毒71型(EV71)基因组3'末端的基因特征(未包括多聚腺苷尾),探讨是否与病毒的致病性有关.方法 于2008-2009年手足口病流行期间采集来首都儿科研究所附属儿童医院就诊的普通手足口病患儿和合并重症神经系统并发症患儿的咽/鼻拭子或疱疹液标本.将标本接种Vero细胞进行肠道病毒分离,同时设计肠道病毒通用引物、EV71和柯萨奇病毒A组16型(CA16)特异性引物通过巢式RT-PCR对分离到的肠道病毒进行型别鉴定.对引起不同临床类型感染的10株EV71分离株的基因组3'末端进行序列测定和分析.结果 10株EV71的3'末端均包含1386 nt的3D、终止密码子TGA和81 nt的3'UTR,由3D核苷酸序列所推导的3D蛋白含462个氨基酸.10株EV71的3D和3'UTR核苷酸同源性分别为95.8%～99.6%和96.3%～100%,重症来源的4株毒株中有3株在3Dpol第140位和第263位同时出现了相同的氨基酸变异(R140K和I263V).10株EV71的3D与C4亚型代表株具有最高的核苷酸和氨基酸同源性,分别为92.7%～94.2%和96.8%～97.6%;在3'UTR与CA16/G10具有最高的核苷酸同源性(88.9%～91.4%).3D区的遗传进化分析表明10株EV71在亲缘关系上与C4亚型最密切,与CA16/G10较密切,而与EV71其他基因型和亚型较疏远.结论 基因组3'末端在EV71进化中可能有一定的作用.