腺病毒荧光定量PCR快速检测方法建立

目的 建立腺病毒双链嵌合荧光染色(SYBR Green)实时定量PCR快速检测方法,用于腺病毒感染的早期诊断及病毒核酸定量分析.方法 建立并优化SYBR Green荧光定量PCR反应体系和反应条件,评价该方法的特异性、灵敏度和重复性,同时进行熔解益线分析,构建定量分析模型,并对84份临床样本进行检测.结果 该方法与其他呼吸道病毒无交叉反应,检测灵敏度10~2拷贝/μL,熔解曲线显示单一的峰,熔解温度为(84.9±0.1)℃,临床样本检测阳性率达30.95%.结论 建立了快速、敏感、特异的腺病毒SYSR Green荧光定量PCR检测方法,适用于腺病毒的早期快速诊断.     

利用转基因植物作为疫苗生产系统的研究进展

植物转化技术是利用分子生物学和基因工程技术，将外源基因插入到受体植物的基因组中并使其在后代植株中得以表达的过程。本文就转基因植物作为疫苗生产系统的方法、优点、研究应用等进行综述。     

门诊肝原性腹泻病人自我护理的指导

肝原性腹泻系指肝脏各种实质性疾病所引起的慢性腹泻,临床上易与肠道感染等腹泻相混淆,因此,及时观察、护理尤为重要。我院于1996～1998年门诊治疗肝原性腹泻47例,现将护理报告如下。 1 临床资料 1.1 一般资料 本组男34例,女13例,年龄18     

浙江省2002年2例柯萨奇B5病毒VP1区基因特性分析

目的：研究2002年浙江省病毒性脑膜脑炎病原CoxB5病毒VP1区的基因特征。方法：用Hep-2和RD两种细胞对患者脑脊液和粪便标本进行病毒分离，提取病毒RNA，再用RT—PCR扩增病毒VP1区基因片断，对纯化产物进行核苷酸序列测定，采用DNAMAN和Bioedit软件进行分析处理。结果：两株CoxB5病毒的VP1区核苷酸长度均为849bp，二者核苷酸同源性为98.7％，氨基酸同源性达100％。结论：浙江省两株CoxB5病毒为同一性状毒株，它们的亲缘关系与侵犯中枢神经系统的CoxB5的原型株AF—114383CoxB5(Swend—16—1998)最为接近。但这两株CoxB5毒株与欧美国家相比，核苷酸同源性仅为79.3％～81．5％，氨基酸同源性为96.82～97．53％，核苷酸序列有了18.5％～20.7％的变异，与国外报道的CoxB5株之间存在一定的差异。这两株病毒与安徽明光市2001年从无菌性脑膜脑炎病人粪便中分离到的两株CoxB5病毒MG—18—2001和MG—39—2001在同一小分枝上，核苷酸同源性达98．5％～98．9％，氨基酸同源性达99．29％～99.65％。     

忽略性因素所致的护理差错的发生与防范

引起护理差错的原因很多,制订防范差错的措施也很多.但在临床上我们发现某些被忽略的差错也屡屡发生.所谓忽略是指人们对其认识不足,从而未能采取有力的防范措施而导致差错的发生.本文就忽略性因素所致的差错进行剖析,以通过剖析提出防范性措施.     

浙江省流行性感冒病毒分离株HA1基因分析

目的 研究浙江省近2年新分离的甲3型流行性感冒（流感）病毒株血凝素HA1基因特性，以了解浙江省流感病毒变异情况和WHO推荐疫苗株对人体的保护情况。方法 采集浙江省近2年类流感病人的咽拭子和含漱液标本进行流感病毒的分离，对分离到的甲3型流感病毒进行核酸的提取，采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行核苷酸序列测定，用DNAMAN和BioEdit生物软件对测序结果进行分析处理，并与WHO推荐疫苗株进行比对。结果 近2年新分离到的甲3型流感病毒株HA，区域的核苷酸序列长度均为987bp，未发现核苷酸的丢失和插入，相应的点突变率为0．8％～1．3％，推导的氨基酸序列长度均为329个。2003年分离的毒株与同期WHO推荐使用的疫苗株A／Moscow／10／99比较，核苷酸同源性只有95．6％～95．9％，氨基酸总变异达20个，发生在抗原决定簇A、B区的有6个位点。2004年分离的毒株与同期WHO推荐使用的疫苗株A／fujian／411／2002（A／Kumamoto／102／2002，A Wyoming／3／2003）比较，核苷酸同源性达98．6％～99．1％，仅发生3～6个氨基酸的变异。基因进化树上，浙江省2003，2004年新分离的毒株均属于同一类性状的毒株，与2004年WHO推荐疫苗株接近．已远离2003年推荐疫苗株。结论 浙江省甲3型流感病毒的抗原性已发生漂移，与我省流感的流行密切相关。2003年WHO推荐使用的甲3型流感疫苗对我省甲3型流感的预防效果不够理想，2004年推荐使用的疫苗对我省甲3型流感的预防效果较好。     

实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒病毒的比较

目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性.方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检的60份疑似流感标本检测甲3型流感病毒.结果细胞病毒分离的阳性数为10份,RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR的阳性数分别为12份和15份.实时荧光定量RT-PCR的灵敏度达0.01TCID50且对甲1型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征冠状病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右.结论实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断.     

浙江省2006年流感监测分析

目的通过浙江省建立的流感监测网络所取得的2006年流感监测结果对流感的流行趋势、病原学变化特点进行分析、总结。方法流行病学监测，哨点医院每周填写流感样病例报表并上报网络；各市县（区）疾控中心（防疫站）的流行病学医师对流感样暴发疫点进行个案调查并上报；病原学监测，监测点医院每周采集流感样病人漱口液5～10份进行流感病毒分离。结果流行病学监测，全年报告暴发疫情40起，罹患率在2．03％～37．95％之间，集中于3～4月份。病原学监测，以B型（Victoria系）为优势流行株，集中于3～4月的暴发疫情，与WHO推荐的2005—2006年度且口前正在使用的流感疫苗株巴拿马系毒株不同。结论呈现冬春季和夏秋季的双峰型分布，上半年以B型为优势流行侏，下半年暴发疫情较少且未发现B型流感暴发。     

TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR快速检测副流感3型病毒

目的:建立特异、快速、灵敏的荧光定量RT-PCR方法用于副流感3型病毒核酸检测。方法:对副流感3型病毒的N基因应用C lustalW软件进行序列同源性比对,在保守区设计特异性引物和TaqM an-MGB探针,并对荧光RT-PCR反应条件进行优化,验证方法的特异性,敏感性和稳定性,同时应用于疑似患者临床标本检测。结果:该方法对副流感3型病毒核酸检测有高度特异性,与副流感1、2、4型,甲型、乙型流感病毒,麻疹病毒,风疹病毒,腮腺炎病毒,呼吸道合胞病毒和腺病毒等均无交叉反应。检测的灵敏度达0.1TC ID50,可从疑似患者含漱液标本中直接检出,从病毒核酸提取至完成检测仅需3 h左右。结论:本研究建立的TaqM an荧光定量RT-PCR是一种快速检测副流感3型病毒特异、敏感的方法,适用于临床早期诊断。     

流行性感冒病毒应急检测中缩减荧光定量逆转录-聚合酶链反应时间的实验研究

目的在相同的敏感度与特异性条件下,进一步缩减流行性感冒(流感)病毒荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的时间,为应急检测服务。方法缩短荧光定量RT-PCR经典检测方法中不同反应阶段的时间参数,并与经典方法进行比较,考察改良方法的检测敏感性与特异性。结果用经典方法与缩短某些时间参数的改良方法检测甲3型流感病毒,结果其特异性与灵敏度差异无显著的统计学意义,并可将检测时间缩短1h左右。结论适当缩短经典荧光定量RT-PCR方法中的逆转录、变性以及延伸时间后,灵敏度和特异性无显著影响,这对于突发疫情的应急检测具有实用价值。