变形链球菌乳酸脱氢酶基因及同源区的克隆和序列分析

目的：克隆变形链球菌乳酸脱氢酶基因(ldh)及其两侧同源区基因片段。方法：应用PCR技术扩增乳酸脱氢酶及其两端同源区序列片段，插入克隆载体pMD18-T中，转化大肠杆菌DH5α，Amp^ 抗性挑选阳性克隆，经酶切及PCR鉴定后进行序列测定。结果：PCR扩增产物特异；抗性筛选的4株菌落均为阳性克隆；用DNASIS将序列测定的结果与基因Bank中报道的序列对比分析，同源性为99．1％。结论：根据同源性分析的结果，可确定该克隆片段为变形链球菌乳酸脱氢酶及其两侧同源区序列。     

同源盒蛋白(Msx1)过度表达抑制成骨细胞碱性磷酸酶表达的实验研究

目的:观察同源盒蛋白(Msx1)过度表达在成骨细胞MC3T3-E1分化培养过程中对碱性磷酸酶的调节作用,以探讨Msx1蛋白对细胞成骨分化过程的调控机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为5组:未转染病毒组作为对照组1(A组);空白腺病毒载体组作为对照组2(B组);未分化组作为空白对照组(C组);分化前1 d转染携带同源盒基因Msx1的腺病毒载体组(D组);分化后1 d转染Msx1腺病毒载体组(E组)。在成骨分化培养基中培养4 d后,检测成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养过程中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性。结果:A、B两组成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养基培养4 d后,ALP活性呈强阳性;C组中未分化成骨细胞MC3T3-E1无ALP活性,D、E两组的成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养4 d后的ALP活性明显较A、B组减低,而且D、E两组间ALP活性无区别。结论:过度表达同源盒蛋白(Msx1)能抑制成骨细胞MC3T3-E1的ALP表达,在其成骨分化的过程中起一定的抑制作用。     

自体同源骨移植治疗根尖周病骨缺损的初步研究

本研究的目的是了解自体同源骨移植治疗根尖周病骨缺损的效果。１８例患者在银行尖刮治术同时接受自体同源骨移植，自体同源骨来自上颌梨状孔边缘骨。随访结果表明：术后局部反应提示自体同源骨移植是根周手术较理想的辅助治疗方法。     

同源盒基因HOXC 13在成釉细胞瘤中的表达

目的研究HOXC13 mRNA在成釉细胞瘤（ameloblastoma，AB）中的表达，探讨其发生的意义。方法采用原位杂交法检测47例AB（原发AB 29例，复发AB 14例，恶变AB 4例），同时选取骨纤维异样增殖症2例，牙源性角化囊性瘤（keratocystic odontogenic tumor，KCOT）10例，正常口腔黏膜上皮7例作对照。结果HOXC13 mRNA AB中阳性率为97．9％（46／47），10例KCOT中7例为HOXC13 mRNA阳性表达，但在7例正常口腔黏膜细胞中仅3例为HOXC13 mRNA阳性表达，AB、KCOT、正常黏膜三组间差异有统计学意义（χ^2=21．665，P=0．001），但角化及颗粒样变退化细胞却为阴性。在部分AB间质成纤维细胞质中也有阳性表达，2例骨纤维异常增殖症纤维也为阳性。结论在AB中存在HOXC13的高表达；HOXC13 mRNA在AB上皮中的表达有异质性，该基因可促进上皮的增殖，其丢失可导致上皮细胞的角化和退变。     

Dlx1基因在大鼠外胚间充质细胞中表达的研究

目的 探讨Dlxl基因在牙胚发育过程中的调控作用。方法 采用外胚间充质细胞组织块培养法；地高辛标记cDNA原位杂交检测方法和斑点杂交方法，观察Dlxl基因在大鼠外胚间充质细胞，人牙乳头细胞，人牙髓细胞中的表达情况。结果 Dlxl基因在外胚间充质细胞和人牙乳头细胞中mRNA呈强阳性表达，而在牙髓细胞中弱表达。结论 Dlxl基因是牙胚发育过程中重要的调节因子，这种调控作用具有一定的时间性与空间性，它可能主要参与调控早期未分化细胞，而对终末分化细胞作用不显著。     

自体同源骨移植治疗根尖周病骨缺损的初步研究

本研究的目的是了解自体同源骨移植治疗根尖周病骨缺损的效果。18例患者在行根尖刮治术同时接受自体同源骨移植,自体同源骨来自上颌梨状孔边缘骨。随访结果表明:术后局部反应较轻,骨缺损修复较快。术后6个月根尖肉芽肿的治愈率为100％;根尖囊肿的治愈率为92.31％。提示自体同源骨移植是根周手术较理想的辅助治疗方法。     

口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因缺陷型变异株的构建

目的:利用口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因(sopox) 的克隆序列,重组构建新的不能产生H2O2 的口腔链球菌变异株。方法:口腔链球菌株ATCC10557 经培养后用酚-氯仿法抽提细菌染色体基因组DNA ,经PCR 扩增sopox 基因,用BamHI 进行限制酶切;参照Chris 方法进行电转化,挑选阳性菌落测定其上清液中H2O2 的含量;将细菌传3～4 代后再次重复上述检测。结果:转化子经筛选后得到1 株阳性菌落,测定上清液中H2O2 含量,第1 次检测表明变异株产生H2O2 的量仅有所下降(介于阳性对照ATCC 10557 和阴性对照大肠杆菌JM109 之间) ,经3～4 次传代后变异株中上清液H2O2 量已经明显低于阴性对照。结论:成功构建了口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因缺陷型变异株。     

远缘链球菌ftsK基因敲除菌株的构建

目的:构建远缘链球菌细胞分裂蛋白相关基因ftsK敲除菌株。方法:首先根据已知的远缘链球菌的ftsK基因序列,设计PCR引物,扩增并克隆了ftsK内部结构基因,亚克隆于自杀质粒后,通过同源重组替换野生型ftsK基因。结果:经过western杂交及southern杂交鉴定,证实重组质粒已插入细菌的基因组中。结论:成功构建远缘链球菌ftsK基因敲除菌株,为研究ftsK在致龋过程中细菌的扩增所起的作用奠定了基础。     

敲低ALKBH3对膀胱癌细胞生长、迁移与肿瘤血管生成的抑制作用及其机制

探讨敲低烷基化修复同源体3（ALKBH3）对膀胱癌细胞生长、迁移与肿瘤血管生成的影响,并阐明其相关机制。     

CDX2、HNF4α、SOX2蛋白联合检测对幽门螺杆菌感染相关高危胃癌的诊断价值

目的探讨尾侧型同源转录因子2(CDX2)、肝细胞核因子4α(HNF4α)、性别决定相关基因簇2(SOX2)蛋白联合检测对幽门螺杆菌(Hp)感染相关高危胃癌的诊断价值。方法选取胃癌患者(胃癌组)及萎缩性胃炎患者(胃炎组)为研究对象。免疫组化检测两组CDX2、HNF4α、SOX2蛋白表达情况,¹³C-尿素呼气试验检测Hp感染情况。比较两组CDX2、HNF4α、SOX2阳性表达率及Hp阳性率。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CDX2、HNF4α、SOX2及三者联合对Hp相关高危胃癌的诊断效能。结果胃癌组CDX2及SOX2阳性表达率低于胃炎组(P＜0.05),HNF4α阳性表达率高于胃炎组(P＜0.05)。胃癌组Hp阳性率高于胃炎组(P＜0.05)。两组Hp阳性者CDX2及HNF4α阳性表达率高于Hp阴性者,而SOX2阳性表达率低于Hp阴性者(均P＜0.05)。CDX2、HNF4、SOX2对Hp相关高危胃癌的诊断效能低于三者联合的诊断效能。结论胃癌组织中CDX2、HNF4α、SOX2蛋白对Hp相关高危胃癌具有较高的诊断效能,且三者联合可提高灵敏度。