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目的:评价hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值.方法:采用RT-PCR检测早期乳腺癌患者CK19、hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞.结果:hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞阳性率(52.0%)均高于良性乳腺疾病患者(16.7%)和健康体检者(5.0%), P值分别为0.004和0.000;阳性率与癌组织HER-2过表达相关,P=0.049.联合检测的敏感度为57.5%,特异度为88.6%.26例联合检测阳性患者,13例随访期出现转移复发,P=0.001;中位无瘤生存期明显降低,P=0.000.结论:hMAM和CK19 mRNA是一组敏感度和特异度较好的诊断早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞的基因标志,可能作为早期乳腺癌术后监测转移复发辅助指标. 相似文献
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基因重组构建MDR基因表达载体及其表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用基因重组技术,成功地构建了MDR I基因片断的表达载体pGE-Hmdr-1,用氯化钙方法转化E.coli HB101,挑选20个克隆扩增培养,经提质粒,酶切,Agarose电泳检测证实:其中4个克隆含有重组质粒,选用含重组质粒载体的菌株扩增培养,经IPTG诱导,超声波破碎,抽提蛋白,GSH-agarose亲和层析纯化,SDS-PAGE电泳检测证实:此重组载体已表达所需的目的蛋白(GST-mdr 相似文献
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目的:本文是为了探讨、评价骨恶性肿瘤及骨转移癌瘤段切除重建的意义,此法对延长寿命、提高生存质量将起到积极的作用。材料和方法:应用瘤段切除后根据患者的年龄、肿瘤是原发还是继发,肿瘤生长的部位,采用不同的方法来修复。1、北京亚华公司提供的长柄人工股骨头6例;2、自制的甲基丙烯酸甲酯(牙托粉假体)4例(全肱骨假体1例、肱骨上段假体1例、桡骨远段假体1例、加长人工股骨头假体1例);3、自体腓骨骨移植显例、自体排骨加髂骨移植1例;4、瘤段切除后关节融合术3例,5、腓骨上端骨肉癌瘤段广泛切除1例。结果:1、近期疗效:18例患者术后疼痛消失14例占87%,术后疼痛减轻2例占13%。下肢瘤段切除人工关节置换者均在3周下床活动走路中不使拐仗着占66%、使用单拐者占33%。2、中远期疗效:术后随访5月-13年,平均4.8年,现存活共计11例占74%。结论:瘤段切除后应用上述不同的方法修复重建保留肢体是一种可行和有效的方法,能恢复肢体绝大部分和部分功能、消除和减轻疼痛、延长寿命、减低残疾率,提高生存质量等都起着至关重要的作用。 相似文献
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患女,14岁,哈尼族,因左下肢胫骨肿块切除术后复发入院.患者于1996年7月无明显诱因感左下肢疼痛,活动后加重,1997年11月到当地地区医院就诊,行左胫骨下段肿块切除术,曾诊断为“骨肉瘤”,1998年7月原手术部位再次发生包块,遂来我院就诊.查体:左小腿下部皮下胫骨表面粗糙,凹凸不平,有一个1cm×2cm骨性隆起,压痛明显,表皮温度不高,无静脉曲张.左踝关节活动自如,行走步态正常.实验室检查:血常规、肝肾功能及电解质正常,血沉21mm/h、ALP140u/L、LDH105U/L.左小腿X线片示胫骨下段骨干增粗变形,其间见多个大小不等的囊性溶骨性破坏区,骨皮质膨胀变薄,边缘锐利清楚,无骨膜及应,其周围未见软组织肿块影(见图1).病理诊断为左胫骨下一步段造釉细胞瘤.手术切除胫骨瘤段9.5cm,取对侧骸骨10cm、腓骨14cm,行自体骨游离移植,以螺钉、钢丝内固定.术中切除标本病检结论仍为造釉细胞瘤(见图2).术口拆线后左下肢管形石膏固定后出院.术后3个月复查X线片示:移植骨已有中量骨痴生长,内固定牢固(见图3). 相似文献
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目的构建VEGFR-3胞外区基因真核表达载体pcDNA3.1-VR-3,并在体外进行表达和鉴定。方法采用 RT-PCR技术,扩增C57BL/6小鼠胚胎VEGFR-3胞外区cDNA片段,通过基因重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组质粒pcDNA3.1-VR-3。经限制性酶切鉴定和DNA 序列测定结果证实后,将重组质粒经脂质体法转染COS-7细胞, Western blotting检测其蛋白表达。结果克隆了C57BL/6小鼠胚胎VEGFR-3胞外区cDNA片段,并构建了真核表达载体pcDNA3.1-VR-3,Western blot 证实目的基因可在COS-7细胞中表达。结论构建的真核表达载体pcDNA3.1-VR-3,可在真核细胞内正确表达,这为进一步的动物实验奠定了基础。 相似文献
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目的:研究靶向抑制sox4基因的表达对宣威地区女性肺癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:构建靶向抑制转录因子sox4的shRNA重组载体pGFP-V-RS-sox4shRNA并转染宣威地区女性肺癌细胞XWLC-05,以转染pGFP-V-RS-scramshRNA的XWLC-05细胞及亲本XWLC-05细胞作为对照,研究sox4表达抑制对Caspase-3表达、细胞形态、细胞周期和凋亡率等凋亡指标的影响.使用Caspase-3抑制剂z-VAD-FMK处理转染细胞,检测上述细胞凋亡指标.结果:成功构建了能高效抑制sox4基因表达的pGFP-V-RS-A-sox4shRNA重组载体;转染后48及72 h,实验组细胞sox4 mRNA表达水平分别为0.09±0.018及0.44±0.06,比转染后24 h降低了88%和40%,与同一时段中的阴性对照及空白对照组相比表达水平明显降低(P<0.05),其中以转染后48 h的抑制最为明显,而Caspase-3 mRNA表达与阴性对照及空白对照组相比均明显升高(P<0.05),以48 h升高最明显;空白对照组与阴性对照组间比较,转染48及72 h后sox4 mRNA(P=0.071;P=0.063)和Caspase-3 mRNA(P=0.103;P=0.229)的表达水平差异无统计学意义;抑制sox4基因的表达后细胞出现典型的凋亡形态学改变;流式细胞术(FCM)检测显示,转染干扰质粒后48 h,细胞出现明显的亚二倍体峰,实验组细胞的凋亡率平均为(34.8±3.37)%,显著高于阴性对照组(0.45±0.05)%及空白对照组(0.44±0.06)%,P均为0.000.经z-VAD-FMK阻断Caspase-3酶活性后,实验组细胞中活化的Caspase-3 (13.6±1.76)%显著低于阴性对照组(50.5±6.15)%,差异有统计学意义,P=0.000;实验组细胞的凋亡率(10.8±1.05)%也明显低于阴性对照组细胞(38.3±3.16)%,P=0.000.结论:抑制sox4的表达可促进宣威地区女性肺癌细胞凋亡;转录因子sox4可能通过抑制Caspase-3依赖的凋亡途径而促进宣威地区女性肺癌的发生发展. 相似文献
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