HLA-G反义寡核苷酸对绒癌细胞免疫逃逸的影响

采用非经典MHCI类免疫耐受分子HLA G反义基因 ,封闭和阻断肿瘤细胞上HLA G分子的释放 ,逆转肿瘤细胞的免疫抑制作用 ,为肿瘤生物治疗提供新的理论和实验依据。利用反义核酸技术 ,合成HLA G反义寡核苷酸 (ASODN ) ,硫代化修饰与脂质体形成复合物 ,转导入表达HLA G的绒毛膜癌细胞系JEG 3。采用RT PCR方法检测HLA GmRNA表达水平的变化。流式细胞术检测细胞表面HLA G蛋白表达水平的变化 ;ASODN处理后 ,对JEG 3诱导外周血单个核细胞凋亡的影响 ;MTT法检测ASODN作用后 ,JEG 3作为第 3种抑制细胞对同种异体混合淋巴细胞反应的影响。结果表明 ,HLA GASODN可显著抑制JEG 3细胞HLA GmRNA和蛋白水平的表达 ,逆转HLA G分子诱导的免疫效应细胞的凋亡作用 ,逆转HLA G分子对同种异体混合淋巴细胞反应的抑制作用     

FasL反义寡核苷酸逆转肝癌细胞免疫逃逸的实验研究

目的:研究FasL反义寡核苷酸对肝癌细胞Fas/FasL途径免疫逃逸的逆转作用。方法:用流式细胞术检测肝癌细胞系HepG2.2.15细胞表面Fas、FasL的表达及Jurkat细胞表面Fas的表达;用HepG2.2.15细胞与Jurkat细胞共培养方法,研究FasL诱导T细胞凋亡的功能;用脂质体介导法转导FasL反义寡核苷酸入肝癌细胞,并通过检测细胞表面FasL表达、RTPCR及细胞共培养方法研究FasL反义寡核苷酸转导对肝癌细胞免疫抑制的逆转作用。结果:①HepG2.2.15细胞低表达Fas,却表达有功能的FasL,与高表达Fas的Jurkat细胞共培养可诱导后者凋亡;②肝癌细胞转入FasL反义寡核苷酸后,FasLmRNA降低;细胞表面FasL表达下降;与Jurkat细胞共培养,Jurkat细胞的凋亡率下降。结论:肝癌细胞表达的FasL可抑制T细胞的免疫功能,是肝癌细胞免疫逃逸的重要机制之一;FasL反义寡核苷酸转导可以逆转肝癌细胞的免疫抑制作用。     

济南假单胞菌制剂体外抑瘤作用及其机制的研究

为进一步探讨济南假单胞菌制剂（ＰＪＡ）抗瘤作用机制,将ＰＪＡ作用于人高转移肺癌细胞ＰＧ,采用ＭＴＴ、放免、流式细胞术、粘附实验、运动侵袭实验等多种手段进行了检测。显示ＰＪＡ有显著的抑瘤作用,并能影响ＰＧ细胞周期的时相分布,使Ｓ期减小。其对ＰＧ细胞内ｃＡＭＰ无明显影响,但能降低ｃＧＭＰ水平,提高ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值,同时降低ＰＧ细胞对胞外基质的粘附性及侵袭、运动能力,从而逆转肿瘤细胞的恶性表型。提     

Tiam-1反义基因抗肿瘤侵袭转移作用的研究

目的：从基因—蛋白—细胞效应多层次水平，观察Tiam1反义基因下调肿瘤细胞内转移相关基因Tiam1 mRNA和调节细胞骨架结构的Rho蛋白表达水平,探讨遏制肿瘤侵袭转移的作用和机制。方法： 采用反义核酸技术合成Tiam1反义寡核苷酸，硫代化修饰与脂质体形成复合物（Tiam1 ASODNSLf）,转导入人高转移巨细胞肺腺癌 PG细胞。采用 RTPCR技术检测Tiam1的表达水平，流式细胞术检测Rho蛋白表达水平，Matrigel体外转移模型检测PG细胞的侵袭转移力。结果： Tiam1ASODNSLf抑制PG细胞Tiam1 mRNA表达水平，其相对表达值从0.86下降为0.38；显著抑制PG细胞内Tiam1介导的信号传递相关Rho蛋白表达水平，其表达率从27.96%降至16.86%(P<0.001)。显著抑制穿过人工基底膜的侵袭转移PG细胞数，从945±40下降为649±35(P<0.05)。结论：Tiam1反义基因下调PG细胞中侵袭诱导基因mRNA表达及其介导的信号传递蛋白Rho的表达，从而遏制其侵袭和转移能力     

ICA,PJM逆转肿瘤细胞恶性表型及其机制的研究

目的:研究ICA,PJM逆转肿瘤细胞恶性表型,提高免疫效应细胞识别和杀伤的作用和机制。方法:MTT法检测ICA,PJM对PG细胞增殖的影响以及对CD3AK杀伤敏感性的影响;RT-PCR法检测ICA,PJM对bcl-2和c-fos基因mRNA表达水平的影响;流式细胞术检测细胞表面HLA-A,B,C抗原表达的变化以及c-fos,bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:ICA,PJM对PG细胞有明显的增殖抑制作用,可以提高细胞表面HLA-A,B,C分子的表达和c-fos蛋白的表达,抑制bcl-2基因的表达,提高CD3AK细胞对PG细胞的杀伤活性。结论:ICA,PJM可以逆转肿瘤恶性表型,提高免疫效应细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤。     

淫羊藿甙的体外免疫调节作用研究

淫羊藿甙是从朝鲜淫羊藿中提取的主要单体。采用依赖细胞株法和乳酸脱氢酶4h释放法，分别检测了淫羊藿甙协同诱生IL－2、IL－3、IL－6，及对NK、LAK细胞杀伤活性的影响。结果表明：建羊藿甙可协同PHA诱导扁桃体单个核细胞产生IL－2、3、6呈剂量依赖关系，动力学观察表明：IL－2、IL－6的分泌高峰时相为作用后48h，IL－3的分泌高峰时相为作用后72h。淫羊藿甙可以提高扁桃体单个核细胞NK、LAK细胞杀伤活性；动力学观察表明：在诱导第5天时LAK细胞杀伤活性最强。提示淫羊藿甙是一种有效的生物反应调节剂。     

中药淫羊藿苷逆转肝癌HepG2.2.15细胞恶性表型及诱导分化研究

目的: 探讨淫羊藿苷(ICA)诱导HepG2.2.15细胞分化凋亡的作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖;流式细胞术(FACS)检测细胞周期分布;RT-PCR方法检测P27基因、FLIP基因mRNA表达水平的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测ICA处理后HepG2.2.15细胞凋亡的变化;电化学发光法和速率散射比浊法分别检测ICA处理后HepG2.2.15细胞上清液中甲胎蛋白(AFP)和转铁蛋白(Tf)水平变化.结果: ICA作用HepG2.2.15细胞增殖呈抑制作用, 具有时间依赖性. ICA处理后, HepG2.2.15细胞周期各时相分布与对照组相比发生变化, G0/G1期升高, S期减小, 与对照组相比有显著性差异(56.26±1.56% vs 49.68±1.34%, 19.95±1.24% vs 28.02±1.03%;P<0.01). ICA分别上调HepG2.2.15细胞P27和下调FLIP基因mRNA的表达水平(0.78 vs 0.27, 0.54 vs 0.90);HepG2.2.15细胞凋亡率增加, AFP下降, Tf水平升高, 与对照组相比均有显著性意义(7.09% vs 0.59%, 156±46 mg/L vs 285±58 mg/L, 152.1±26 mg/L vs 67.1±24 mg/L;P＜0.05).结论:ICA可能通过升高G0/G1期, 减少S期抑制HepG2.2.15细胞的增殖;上调P27 mRNA和Tf水平, 下调FLIP mRNA的表达和AFP合成的水平来诱导细胞分化.