活性骨组织体外调节和促进成骨细胞黏附特性的作用

目的:研究兔活性骨组织在共培养条件下对同种骨髓基质细胞来源成骨细胞黏附特性的影响。方法:分别应用生理盐水和三蒸水浸泡新鲜兔骨碎粒5h后与同种骨髓基质细胞来源成骨细胞共培养作为实验组;未进行共培养的成骨细胞作为对照组。应用体视学计数法观察接种后0.5,1,2,4,8h各时间点成骨细胞贴壁情况,计量贴壁细胞数,计算出细胞贴壁率。结果:实验组的成骨细胞贴壁率均显著高于对照组(P<0.01),与三蒸水浸泡的兔活性骨组织共培养的同种成骨细胞的贴壁率最高。结论:活性骨组织在体外具有调节和促进同种成骨细胞黏附特性的作用,用三蒸水浸泡的活性骨组织的作用最强。     

透视下经皮空心钉治疗中青年股骨颈骨折的疗效观察

目的观察空心钉治疗中青年股骨颈骨折的临床疗效。方法 47例中青年股骨颈骨折患者于透视下经皮应用空心钉内固定术治疗,术后进行复诊并拍摄X线片观察,并参照Sanders髋关节创伤后功能评分对患者髋关节功能进行评分。结果术后随访12～36个月,47例患者中骨折愈合44例（93.62%）,股骨头坏死3例（6.38%）,股骨头坏死者全部为GardenⅣ型患者。按Sanders髋关节创伤后功能评分标准的评估结果为：优30例,良14例,差以下3例。结论经皮空心钉治疗中青年股骨颈骨折的疗效值得肯定,也是临床医疗中比较实用的治疗方法。     

糖尿病合并慢性骨髓炎保肢治疗

目的研究糖尿病合并慢性骨髓炎的综合治疗方法。方法从1999年5月-2009年5月,采用手术、放疗、抗生素抑制及中药等综合治疗糖尿病合并慢性骨髓炎84例,其中男性51例,女性33例,年龄42～82岁,平均62岁。结果研究组84例均获1～6年随访,平均随访51个月,其中临床治愈72例,3个月～3年内复发12例,5年治愈率达85.71%。结论综合治疗可明显提高糖尿病并发慢性骨髓炎的治愈率。     

腰椎后路钉棒系统结合椎间植骨融合治疗腰椎滑脱62例

目的评价应用腰椎后路钉棒系统加椎间植骨融合治疗腰椎滑脱症的治疗效果。方法共治疗62例腰椎滑脱,按症状改善、骨性融合、内固定材料牢固情况进行疗效评价。结果58例获得1～5年随访（平均2年8个月）,优44例,良12例,可2例,无症状加重患者,无内固定松动断裂发生。结论腰椎后路钉棒系统结合椎间植骨治疗腰椎滑脱能达到很好复位及牢固固定,疗效满意。     

后路减压复位椎间植骨结合椎弓根螺钉固定治疗胸腰椎爆裂性骨折

目的探讨一种治疗胸腰椎爆裂性骨折伴脊髓神经损伤的方法。方法对45例胸腰椎爆裂性骨折采用后路减压复位、椎问植骨、椎弓根螺钉固定治疗,对其预后及随访结果进行分析。结果38例获随访,平均16个月（8～48个月）,Cobb角降至平均5°（O～13°）,骨折术后椎体高度平均恢复至94．0％,椎管狭窄率平均恢复至6．4％（O％～15．0％）。神经功能恢复良好,无一手术节段失稳。结论本方法具有创伤相对较小、减压充分、内固定牢固、植骨融合率高等优点,是一种治疗胸腰椎爆裂性骨折的有效方法之一。     

半月板损伤机制实验研究

[目的]通过正交的3个方向上测定人膝半月板前、中、后段组织块的拉伸断裂强度。[方法]使用材料为新鲜膝关节半月板10个(均为外侧),将每个半月板分为前、中、后3个等份段,分别沿长轴、横轴和纵轴上切取中间最小面积为1mm2的双曲面体样本,共计90个,即分别为半月板前(长轴)、前(横轴)、前(纵轴)、中(长轴)、中(横轴)、中(纵轴)、后(长轴)、中(横轴)和中(纵轴)共9个组,每组分别为10个样本。[结果]半月板在长轴,横轴和纵轴上的拉伸断裂强度比较中,长轴明显高于其他两个维度,差异有统计学意义(P﹤0.05),长轴分别显著性大于横轴和纵轴,横轴显著大于纵轴(P﹤0.05)。[结论]半月板长轴上的拉伸断裂强度值最大,为半月板损伤机制提供有有利的证据。     

老年糖尿病足综合治疗的研究

目的探讨老年糖尿病足新的综合治疗方法。方法1999年5月-2009年5月,采用常规治疗方法加放疗治疗糖尿病足44例,其中男性31例,女性13例,年龄60—82岁,平均65岁。结果研究组44例均获1—6年随访,平均51个月,其中临床治愈36例、3个月-3年内复发8例,5年治愈率达81．81％。结论常规治疗方法加放疗治疗可明显提高老年糖尿病足的治愈率。     

成骨诱导的兔骨髓基质干细胞成骨活性的表达及维持

目的观察成骨诱导的兔骨髓基质干细胞(BMSCs)体内、外环境下成骨活性的表达及维持。方法观察BMSCs在体外成骨诱导培养条件下的成骨分化特性;构建兔BMSCs与活骨组织共培养模型模拟体内“成骨环境”,将成骨诱导的MSCs置于共培养及普通传代培养条件下进行传代培养,观察经成骨诱导的BMSCs在体外及模拟体内的培养条件下细胞的表型维持情况。结果药物成骨诱导培养的BMSCs,其ALP活性及骨钙素均显著高于普通培养组(P<0.05);经过诱导培养的BMSCs,其Ⅰ型胶原、骨钙素免疫组化阳性。RT-PCR法半定量测定Ⅰ型胶原mRNA,成骨诱导培养的Ⅰ型胶原mRNA表达量明显高于普通传代培养对照组。药物成骨诱导后的细胞在体外普通传代培养传5代后,细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素水平及Ⅰ型胶原表达稳定维持在较高水平,保持其成骨细胞的表型;在共培养条件下,ALP活性、骨钙素水平Ⅰ型胶原表达保持在高水平,且ALP活性、骨钙素水平在大部分时间点均高于普通传代培养。结论药物成骨诱导培养呈现促BMSCs向成骨方向转化的特点,能使ALP、骨钙素及Ⅰ型胶原表达短期内达到高水平;经成骨诱导的BMSCs在体外或模拟的体内传代培养条件下,均能维持成骨表型,保持成骨活力。     

传代种植密度对人间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的 :研究人间充质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)传代培养时 ,细胞种植密度对MSCs增殖及成骨诱导分化影响。方法 :将第 2代MSCs以 8× 10 3 /cm2 、 3× 10 3/cm2 、 8× 10 2 /cm2 密度接种 ,分析其生长曲线 ,并扩增培养 18d ,记录细胞扩增数量 ,再分析扩增后细胞的生长曲线和成骨诱导能力。结果 :人骨髓MSCs阴性表达ALP、CD3 4;在 8× 10 3/cm2 种植密度下 ,细胞倍增时间 40h ,18d后细胞数量扩增 (5 1± 13 )倍 ;在 3× 10 3 /cm2 种植密度下 ,细胞扩增 (2 8± 6)倍 ;在 8× 10 2 /cm2 种植密度下 ,细胞总数仅增加 (5± 3 )倍。在低密度下获得的细胞增殖能力强于高密度组 ,两组细胞均具有成骨诱导能力。结论 :种植密度对MSCs增殖有明显影响 ,快速扩增MSCs作为骨组织工程种子细胞 ,宜选择 8× 10 3 /cm2 种植密度。     

绿色荧光蛋白在组织工程关节软骨构建中的示踪作用

目的:探讨绿色荧光蛋白在组织工程关节软骨体外构建和体内移植修复关节软骨缺损中对细胞的示踪作用。方法:实验于2003-09/12在第三军医大学西南医院中心实验室完成。选取清洁级雄性3～4周龄日本大耳白兔2只作为供体,麻醉处死后,切取关节软骨,系列酶消化分离软骨细胞,洗涤,37℃于体积分数为0.05的CO2中培养,传代扩增。再选取清洁级雄性4月龄日本大耳白兔2只作为受体。首先用反转录病毒载体pLEGFPN1感染软骨细胞,将胶原凝胶包埋的绿色荧光蛋白标记软骨细胞接种于聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸三维支架后体外培养3周,再用标记软骨细胞～支架复合物移植修复兔膝关节软骨缺损。倒置荧光显微镜下观察细胞接种支架率和体外培养过程中细胞在支架上生长、增殖、分化、分布及术后4周细胞在缺损区的成活与软骨缺损修复情况。结果:实验共纳入4只日本大耳白兔,作为受体的2只进入结果分析。①绿色荧光蛋白反转录病毒转染第一代关节软骨细胞情况:转染后3d,倒置荧光显微镜下可看到表达绿色荧光蛋白的关节软骨细胞,主要为三角形,少数呈多角形和梭形。随着传代次数的增加,绿色荧光蛋白阳性软骨细胞的形态变为以梭形为主,少数细胞为三角形和椭圆形,体外培养8周,细胞增殖良好,荧光强度无减弱。流式细胞仪检测G418筛选2周后软骨细胞的绿色荧光蛋白表达率为87.3%。②绿色荧光蛋白标记软骨细胞支架复合物倒置荧光显微镜观察结果:软骨细胞三维接种支架后,细胞几乎全部种植于支架上,在支架材料内分布均匀,刚接种的细胞呈圆形,发出明亮的绿色荧光;3～4h细胞开始变形,2～3d即己基本完全变形,细胞的形态以长梭形为主,呈网状排列,随着培养时间延长,支架上的细胞逐渐由梭形变成圆形,移植前(体外培养3周)支架上细胞大多数己呈圆形。体外培养6周,细胞密度增加,荧光强度未见减弱,而不能在荧光显微镜下观察未标记软骨细胞～支架复合物中细胞的形态。③绿色荧光蛋白标记关节软骨细胞在修复区成活及参与软骨缺损修复情况:移植术后4周,大体观察可见移植组织有别于周围软骨,表面尚平整。绿色荧光蛋白标记软骨细胞～支架复合移植修复关节软骨缺损4周,苏木精-伊红染色可见修复区细胞为透明软骨样细胞,排列不规则,表层细胞体积较小,数量较多,深层细胞体积较大,细胞外基质较少,与周围组织分界清楚。甲苯胺蓝染色可见修复区甲苯胺蓝阳性的基质较少,支架材料大部分降解吸收,修复区与周围组织分界清楚,连接处稍不平整,未见淋巴细胞浸润。倒置荧光显微镜进行观察,修复区可见发绿色荧光的圆形细胞及其分裂相,荧光充满整个细胞,荧光细胞未进入周围的软骨及软骨下骨中,与周围正常关节软骨分界清楚。结论:反转录病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染对关节软骨细胞的黏附、伸展、生长和增殖等功能没有明显的影响,可长期稳定的标记关节软骨细胞以及动态观察软骨细胞的生长和增殖等情况,对组织工程软骨体外构建和体内软骨形成有良好的示踪作用。