食品中真菌毒素危险性分析的方法及现状

对真菌毒素进行危险性分析具有重要的公共卫生意义.真菌毒素（mycotoxins）是某些真菌产生的二级代谢产物.在目前发现的300多种真菌毒素中,与食品安全相关的真菌毒素主要包括黄曲霉毒素（aflatoxins）、赭曲霉毒素（ochratoxin）、展青霉素（patulin）、玉米赤霉烯酮（zearalenone）、伏马菌素（fumonisins）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol）、T -2毒素（T-2 toxin）、杂色曲霉素（sterigmatocystin）、环匹阿尼酸（cyclopiazonic acid）、麦角胺（ergotamine）、细交链孢菌酮酸（tenuazonic acid）等[1],这些真菌毒素不仅可以污染食品引起食物中毒,而且有些还具有致癌、致畸、致突变作用,对健康造成极大威胁.     

噬菌体展示肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位的研究

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阻断,模拟表位的共有序列为IRPMVXX,X为任意氨基酸。以其中的P2号克隆建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～8000pgml,检测下限为150pgml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。     

单次灌胃杂色曲霉素对小鼠大脑细胞的影响

目的　探讨单次ig杂色曲霉素 (ST)对小鼠大脑细胞的影响。方法　采用形态学观察和流式细胞术定量检测方法 ,研究ST对BALB/c小鼠大脑神经细胞的影响。结果　病理形态学观察可见 ,ig小剂量ST(3μg·kg-1 )后 1 2h或大剂量ST(3mg·kg-1 )后6h即可见小鼠大脑皮质、丘脑、海马CA2区神经元出现胞核固缩深染、胞浆嗜酸性变、空泡变性等病理变化 ,且随剂量增大和作用时间延长 ,病变神经元逐渐增多 ;光镜下对海马CA2区病变神经元进行计数分析 ,结果表明ST处理组发生病理变化的神经元比例均高于相应对照组 ,且呈剂量和时间依赖性增高 ;流式细胞术定量检测结果表明 ,igST 3,30 ,30 0和30 0 0 μg·kg-1 1 2h后 ,小鼠脑细胞的凋亡率呈剂量依赖性增高 ;ig3mg·kg-1 的ST后 6～48h,随ST作用时间的延长 ,脑细胞凋亡率也明显增高。结论经口给予ST可导致小鼠大脑皮质、丘脑、海马CA2区神经元发生退行性病变 ,诱导并促进小鼠大脑细胞凋亡     

曲霉抗原双抗体夹心ELISA法特异性检测

目的 用2组曲霉单克隆抗体(mAbs)建立特异性识别不同种类曲霉抗原的检测方法.方法 采用天然烟曲霉抗原免疫,获得广谱针对曲霉抗原的单克隆抗体;采用重组烟曲霉抗原获得特异性针对烟曲霉抗原的单克隆抗体,用间接免疫荧光鉴定,并分别建立2种双抗体夹心ELISA法,对19种常见的环境和临床分离曲霉株、马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液进行检测.结果 间接免疫荧光显示,用天然烟曲霉抗原免疫获得的单克隆抗体(mAbs-1)可广谱识别多种曲霉分离株,而重组烟曲霉抗原获得的单克降抗体(mAbS-2)仅能特异性结合临床和环境分离的烟曲霉抗原.用mAbs-1建立的双抗体夹心ELISA法可检测19种常见曲霉株培养液;用特异性针对烟曲霉抗原单克降抗体(mAbs-2)建立的双抗体夹心ELISA法可特异性检测临床和环境分离株烟曲霉培养液;与其他曲霉株无交叉反应;2种双抗体夹心ELISA法与马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液均无交叉反应.结论 2种曲霉单克降抗体双抗体夹心ELISA法,除可广谱检测环境和临床分离曲霉株,还可以区分烟曲霉与其他曲霉,可作为监测环境、农产品、食品中的曲霉污染和早期诊断曲霉病的新技术手段.     

洛伐他汀产生菌的原生质体制备、灭活及融合条件研究

目的 探索构建洛伐他汀高产菌株的原生质体制备和融合方法.方法 考察了各种细胞裂解酶和渗透压稳定剂等对红曲霉和土曲霉的原生质体制备、灭活及融合的影响.结果和结论 土曲霉和红曲霉在加石英砂混合酶体系中获得的原生质体数最多,而最适宜的渗透压稳定剂为0.6 mol/L的NaCl.红曲霉的原生质体在紫外灯(18 W)下15 cm照射50 min和土曲霉的原生质体在60 ℃水浴下保持40 min灭活率均达到100%.最适合红曲霉和土曲霉的原生质体融合的条件为20% PEG在28 ℃下处理15～20 min.     

呼吸科重症加强治疗病房院内肺部真菌感染47例临床分析

目的 了解近年来呼吸科重症加强治疗病房(RICU)院内肺部真菌感染的发病情况、相关因素、菌株分布及治疗现状.方法 对2000年7月～2005年6月长海医院RICU诊断的47例院内肺部真菌感染患者的临床资料进行回顾性分析.结果 近五年RICU共诊断院内肺部真菌感染47例,均为临床诊断,其发病率显著高于同时期普通病房的发病率(10.8%比1.8%,P＜0.005).慢性阻塞性肺疾病和细菌性肺炎是最常见的呼吸系统基础疾病,分别占38.3%和36.2%;41例患者(87.2%)具有肺部真菌感染的危险因素.与普通病房相比,RICU患者曲霉感染所占比例更高(14.3%),但二者无显著差异(P＞0.1);热带念珠菌及耐氟康唑的光滑念珠菌等的比例也较高,但克柔念珠菌较低.抗真菌治疗的有效率为79.1%,氟康唑为最常用的抗真菌药物.与普通病房相比,RICU患者的死亡率升高(18.6%),但二者无显著差异(P＞0.1).结论 RICU患者院内肺部真菌感染的发病率明显高于普通病房,其中曲霉和耐氟康唑的念珠菌感染所占比例较高.因RICU院内肺部真菌感染患者预后相对较差,应早期采用有效的干预措施.     

HPLC法测定红曲霉发酵液中洛伐他汀含量

目的建立测定红曲霉发酵液中洛伐他汀含量的方法。方法采用HPLC法,以甲醇作溶剂、摇床振荡(150 r/min)3 h提取洛伐他汀,色谱条件:以甲醇-18 mmol/L磷酸溶液(体积比为80∶20)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为237 nm。结果洛伐他汀在5~50μg/mL质量浓度范围内与峰面积线性关系良好,加样平均回收率为100.75%,RSD为0.87%。结论本方法简便有效,重复性好,可作为红曲霉相关产品的质量控制方法。     

非血液／恶性肿瘤患者侵袭性肺曲霉病11例临床分析

肺曲霉病是由曲霉感染或吸入曲霉病原引起的一组急慢性肺部病变，临床上一般将肺曲霉病分为曲菌球、变态反应性支气管肺曲霉病和侵袭性肺曲霉病（IPA）三种类型，其中IPA危害最大、病死率最高。现将复旦大学附属中山医院呼吸科2005年4月～2007年4月诊断的11例IPA报告如下。     

侵袭性曲霉感染的药物治疗进展

侵袭性曲霉感染是一种死亡率高,难以诊断的疾病,早期诊断和及时发现是关键。侵袭性曲霉感染的药物治疗的目的主要是初步维持患者的生命,直至宿主免疫力恢复,主要药物包括两性霉素B及其新制剂,三唑类抗真菌药伊曲康唑,伏立康唑和特比萘芬,其中常规用两性霉素B为治疗的一线药物,其主要毒性有骨髓抑制和肾脏毒性。     

杂色曲霉素致人胚肺细胞p53及Ki-ras基因突变研究

为探讨中国恶性肿瘤高发区粮食中优势污染霉菌毒素－杂色曲霉素（Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｃｙｓｉｎ,ＳＴ）的致癌作用,运用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析了不同浓度的ＳＴ（１μｇ／ｍｌ和３μｇ／ｍｌ）对体外培养的人胚肺细胞恶性转化过程中抑癌基因ｐ５３第５、６、７、８显外子及癌基因Ｋｉ－ｒａｓ的突变情况。结果显示ＳＴ处理后第２２周,人胚肺成纤维细胞ｐ５３基因的第８外显子和Ｋｉ－ｒａｓ癌匀出现异常泳动带型,表明Ｓ