紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其可能的机制

目的：观察紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响，并探究其作用机制。方法：采用不同浓度的 紫草素（0、 1、 5、 10 μmol/L）处理TE-1细胞，MTT法检测24、 48、 72 h后各组细胞增殖水平；紫草素处理各组TE-1细胞48 h后，采用 Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况，流式细胞术检测细胞的凋亡水平及周期变化，Western blotting检测TRAP1/Akt/ mTOR信号通路相关蛋白表达变化。结果：紫草素呈时间和浓度依赖性抑制TE-1细胞增殖（P<0.05或P<0.01）；与对照组相比， 紫草素能显著促进TE-1细胞凋亡（P<0.01）， 使TE-1细胞周期发生G0/G1期阻滞（P<0.05或P<0.01），同时降低TRAP1、p-Akt以及 p-mTOR表达水平（P<0.05或P<0.01），以上作用具有剂量依赖性。结论：紫草素能显著抑制TE-1细胞的增殖，诱导细胞发生G0/ G1期阻滞并促进其凋亡，这可能与其抑制TRAP1/Akt/mTOR信号通路有关。     

紫草素诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡对减少癌症的发生有重要的意义。研究发现紫草素可通过产生ROS,活化MAPK相关通路,增加P53蛋白,调控Bc1-xL及Bax活性,引起Cytc从线粒体释放,激活Caspase引起细胞凋亡,也可通过抑制PI3K/Akt信号途径、泛素蛋白酶体,激活Caspase引起细胞凋亡。其详细作用机理还有待进一步阐述。     

紫草素通过抑制PKM2/PHD3/HIF-1α通路诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨紫草素诱导人肝癌细胞SMMC-7721死亡的可能机制。方法 体外培养人肝癌细胞（SMMC-7721）和正常肝细胞（L-02）,实验分为对照组和紫草素给药组（4、8、16 μmol/L）。 采用3（-4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐 3（-4,5-二甲基噻唑-2-yl）-2,5-二苯基四氮唑溴盐,MTT法检测细胞活力,试剂盒检测三磷酸腺苷（ATP）和乳酸水平,免疫共沉淀和免疫荧光双染实验明确M2型丙酮酸激酶（PKM2）、脯氨酰酸羟化酶3（PHD3）、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）三者之间的作用关系及蛋白表达情况;Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot观察PKM2、PHD3、HIF-1α 及凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2表达水平;采用小干扰核糖核酸（siRNA）干扰法建立 PKM2低表达的人肝癌SMMC-7721细胞,Western blot检测 PKM2低表达对人肝癌SMMC-7721细胞中的 PHD3、HIF-1α 蛋白表达水平的影响。结果 紫草素对SMMC-7721和L-02细胞的半抑制浓度（IC50）分别是8.041 μmol/L与31.75 μmol/L,与对照组相比紫草素能抑制肝癌SMMC-7721 细胞中 PKM2、HIF-1α和PHD3蛋白表达及PKM2、HIF-1α入核（P<0.05）。免疫共沉淀和免疫荧光双染实验证实,紫草素可以抑制PKM2/PHD3/HIF-1α复合体形成（P<0.05）,并且抑制有氧糖酵解产物乳酸和ATP含量（P<0.05）。与对照组相比,PKM2敲低后PHD3和HIF-1α表达明显降低（P<0.05）;与未处理组相比,紫草素处理后凋亡率明显升高且凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达升高,Bcl-2表达下降（P<0.05）。结论 紫草素靶向PKM2调控PHD3/HIF-1α复合物,从而抑制肝癌细胞的有氧糖酵解,破坏其供能途径,导致肝癌细胞凋亡。     

基于UPLC指纹图谱的菟丝子酒炙前后化学模式识别及多成分定量测定

目的 建立生菟丝子Cuscutae Semen与酒菟丝子UPLC指纹图谱,并结合多元统计分析和定量测定研究菟丝子酒炙前后化学成分的变化,为菟丝子质量评价提供参考。方法 采用UPLC法进行测定,色谱柱为Thermo AccucoreTM C18柱(100 mm×4.6 mm,2.6μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,柱温30℃,梯度洗脱,进样体积为2μL,体积流量为0.4m L/min,采用分段波长,建立15批酒菟丝子及15批生菟丝子指纹图谱。通过相似度评价、层次聚类分析(hierarchical clustering analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)来对指纹图谱进行分析评价,同时对9个主要成分进行定量测定,寻找炮制前后差异成分。结果 建立的UPLC指纹图谱中,共匹配了19个共有峰,宁夏产区与内蒙产区的生菟丝子和酒菟丝子相似度均较高,HCA中可将酒菟丝子与生菟丝子明显区分,PCA提取出4个主成分,能够明显区分菟丝子生品及炮制品。正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squ...     

寻常型银屑病患者血清中IL-17的表达及紫草素对IL-17刺激HaCaT细胞分泌IL-6和IL-23的影响

目的：探讨寻常型银屑病患者血清中白细胞介素17（IL-17）的表达水平及IL-17刺激后HaCaT细胞分泌白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素23（IL-23）的变化,阐明其临床意义及紫草素的干预作用。方法：以25名正常对照者、29例寻常型银屑病患者和不同组别HaCaT细胞（空白对照组、IL-17刺激24h组、IL-17刺激36h组、IL-17刺激48h组、紫草素+IL-17组、环孢素A+IL-17组和IL-17组）为研究对象,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测寻常型银屑病患者血清IL-17水平和HaCaT细胞各组上清液中IL-6、IL-23水平;实时荧光免疫定量-聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测各组HaCaT细胞中IL-6和IL-23p19 mRNA表达水平;采用细胞计数盒-8（CCK-8）法检测各组HaCaT细胞活力。结果：与正常对照组比较,银屑病组患者血清IL-17水平明显升高,以重度皮损银屑病组升高最为明显（P < 0.05）;IL-17刺激24、36和48h组HaCaT细胞及其培养上清中IL-6和IL-23水平及其mRNA表达水平均高于空白对照组（P < 0.01）;紫草素+IL-17组和环孢素A+IL-17组HaCaT细胞及其培养上清中IL-6和IL-23水平及其mRAN表达水平均低于IL-17组（P < 0.05）。与空白对照组比较,其他各组细胞活力差异无统计学意义（P > 0.05）。结论：银屑病患者血清IL-17表达水平升高,尤其是重度皮损银屑病患者血清IL-17表达水平升高明显,IL-17可促进HaCaT细胞分泌IL-6和IL-23,呈时间依赖性,紫草素可抑制IL-17的促炎症作用。     

紫草素对角质形成细胞株增殖的抑制及凋亡的作用

目的：探讨紫草素对角质形成细胞株colo-16增殖及凋亡的调节作用。方法：利用体外细胞培养技术、MTT法、流式细胞仪、荧光显微镜技术检测不同浓度的紫草素对colo-16细胞株增殖及凋亡的影响。结果：紫草素对colo-16细胞株的作用与浓度及时间呈一定的关系，浓度越高，时间越长，其抑制作用越强。终浓度为0．25μg/ml、0．5μg/ml的紫草素，培养48h后，细胞的凋亡率分别为9．89％、25．04％，正常对照组为5．86％，两者相比差异显著。结论：紫草素值得进一步深入地研究与探讨。     

HPLC测定新疆紫草中紫草素的含量及提取方法的优化

目的:采用超声方法提取新疆紫草中紫草素,并以左旋紫草素为指标,建立HPLC测定紫草素的含量。方法:利用超声波协同甲醇提取40 min;色谱条件为Shim-pack CLC-ODS-18色谱柱(4.6 mm×250 mm,10μm),检测波长516 nm,流动相甲醇-水(85∶15),流速1.0 mL·min-1,柱温室温。结果:左旋紫草素进样量在0.127~1.143μg具有良好的线性关系,回归方程为Y=338 763X-198 347(r=0.999 8),平均回收率99.3%,RSD 1.18%,左旋紫草素超声法提取率是回流提取法的1.29倍。结论:经方法学验证,该实验所采用的实验方法重复性好、稳定、准确、可靠,可用于中药紫草药材中紫草素的含量测定。     

复方四季青软膏的制备及质量控制

目的鉴别复方四季青软膏中各主药的真伪;研究复方四季青软膏的制备方法;建立复方四季青软膏含量的控制方法。方法以薄层色谱法鉴别四季青叶、大黄、紫草;以紫外分光光度法测定紫草中左旋紫草素的含量。结果左旋紫草素的乙醇溶液在5.64～33.87μg/mL范围内,A与C呈良好线性关系,r=0.9999（n=6）,平均回收率为98.80%,RSD（%）=0.88（n=6）。结论该方法准确、简便,重现线好,可用于复方四季青软膏中紫草含量的控制。     

Shikonin is a novel and selective IMPDH2 inhibitor that target triple‐negative breast cancer

Triple‐negative breast cancer (TNBC) is heterogeneous disease with a poor prognosis. It is therefore important to explore novel therapeutic agents to improve the clinical efficacy for TNBC. The inosine 5′‐monophosphate dehydrogenase 2 (IMPDH2) is a rate‐limiting enzyme in the de novo synthesis of guanine nucleotides. It is always overexpressed in many types of tumors, including TNBC and regarded as a potential target for cancer therapy. Through screening a library of natural products, we identified shikonin, a natural bioactive component of Lithospermum erythrorhizon, is a novel and selective IMPDH2 inhibitor. Enzymatic analysis using Lineweaver–Burk plot indicates that shikonin is a competitive inhibitor of IMPDH2. The interaction between shikonin and IMDPH2 was further investigated by thermal shift assay, fluorescence quenching, and molecular docking simulation. Shikonin treatment effectively inhibits the growth of human TNBC cell line MDA‐MB‐231, and murine TNBC cell line, 4T1 in a dose‐dependent manner, which is impaired by exogenous supplementation of guanosine, a salvage pathway of purine nucleotides. Most importantly, IMPDH2 knockdown significantly reduced cell proliferation and conferred resistance to shikonin in TNBC. Collectively, our findings showed the natural product shikonin as a selective inhibitor of IMPDH2 with anti‐TNBC activity, impelling its further study in clinical trials.