乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

高效液相色谱法测定新疆紫草毛状根中乙酰紫草素的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定新疆紫草毛状根中乙酰紫草素含量的方法。方法:采用YMC ODS-A C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲酸(700∶300∶0.5);检测波长275nm;流速1.0mL·min-1;柱温35℃。结果:乙酰紫草素对照品在51.55～1031.0mg·L-1与峰面积线性关系良好,相关系数r=0.9999,平均回收率为99.81%,RSD2.00%(n=9)。结论:高效液相色谱法操作简单快速,重复性好,可用于新疆紫草毛状根中乙酰紫草素含量的测定。     

Photochemical decomposition of alkannin/shikonin enantiomers

Alkannin/shikonin ((±)-5,8-dihydroxy-2-(1-hydroxy-4-methyl-3-pentenyl)-1,4-naphthoquinone), isolated from Macrotomia euchroma, is sensitive to light exposure. A chloroform solution of alkannin/shikonin was exposed to sunlight for 1 month. The major photolytic product, a newly discovered naphthoquinone derivative, was isolated by adsorption chromatography. The chemical structure of the purified photolytic product was identified by NMR, MS and FTIR techniques to be (−)-5,8-dihydroxy-2-(1-hydroxy-3-oxo-4-methyl-4-pentenyl)-1,4-naphthoquinone, indicating that a photo-oxidation reaction had occurred.     

紫草素诱导甲状腺髓样癌TT细胞自噬的实验研究

目的探讨紫草素能否诱导甲状腺髓样癌细胞发生自噬。方法采用透射电镜观察不同浓度紫草素对甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬的形态。利用Western-blot分析紫草素作用甲状腺髓样癌TT细胞后自噬标志物Beclin-l和LC3蛋白的表达,利用荧光显微镜观察自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的点状聚集情况。结果不同浓度紫草素作用24~72h对TT细胞均有自噬现象发生。2μg/m L、4μg/m L紫草素处理组作用24h后透射电镜观察TT细胞自噬的形态,发现TT细胞出现典型的自噬囊泡：双层膜包绕的圆形或椭圆形结构。紫草素处理自噬相关基因Beclin-l的表达明显低于空白对照组,参与自噬降解的p62表达水平下降,其下降水平与剂量呈相关性,自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达明显提高。将TT细胞转染GFP-LC3质粒24h后,用紫草素处理24h,于荧光显微镜下观察,处理组与空白对照组相比,胞浆上出现大量的LC3-Ⅱ点状聚集。结论紫草素能诱导甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬,透射电镜下可见自噬体,荧光显微镜下可观察到自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ。紫草素诱导TT细胞自噬,可能与降低自噬抑制基因Beclinl表达水平相关。     

紫草素通过抑制STAT3-MMP2信号通路抑制胃癌MGC803细胞的迁移能力

目的:研究紫草素对人胃癌MGC803细胞迁移能力的影响,并探究其作用机制.方法:不同浓度的紫草素(0,1,2μg·mL-1)作用于人胃癌MGC803细胞,利用Transwell小室实验检测紫草素对人胃癌MGC803细胞侵袭和迁移能力的影响.进一步利用实时定量PCR和Western blot技术,检测不同浓度紫草素作用的...     

紫草素调节有氧糖酵解代谢诱导急性淋巴细胞白血病细胞凋亡

目的:探讨紫草素通过调节白血病细胞能量代谢影响细胞增殖与凋亡的具体机制。方法:采用MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blotting 法检测细胞凋亡相关蛋白的表达,包括cleaved-caspase 8、cleaved-PARP、cleaved-caspase 3。利用丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒评估紫草素对PK酶活性的影响;利用海马能量代谢检测仪检测Reh细胞经紫草素处理后其有氧糖酵解代谢水平的变化。结果:紫草素以时间剂量依赖性的方式抑制白血病细胞增殖,并诱导白血病细胞凋亡,凋亡率与药物剂量呈正相关关系（P＜0.01）。紫草素激活caspase级联反应,凋亡相关蛋白cleaved-caspase 8、cleaved-PARP及cleaved-caspase 3的表达随紫草素的剂量增加而增加。紫草素抑制白血病细胞PK酶的活性,并抑制有氧糖酵解代谢的代偿能力（P＜0.001）。结论:紫草素抑制急性淋巴细胞白血病Reh细胞有氧糖酵解代谢的代偿能力,并诱导Reh细胞以caspase依赖性的方式凋亡。     

紫草素对内皮细胞血管新生活性的影响

目的:探讨紫草素对内皮细胞的作用,明确其抗血管新生机制。方法:利用塞唑兰(MTT)法测定紫草素对内皮细胞增殖的影响,利用迁移实验和体外管腔形成实验观测紫草素对内皮细胞迁移及管腔形成能力的影响。结果:紫草素可在体外抑制内皮细胞的血管新生活性,20μmol·L-1的紫草素对内皮细胞增殖、迁移及管腔形成能力的抑制率分别为38.66%±0.05%、79.69%±0.03%及80.95%±0.05%。结论:紫草素可直接作用于内皮细胞,通过抑制其增殖、迁移及管腔形成而发挥其抗血管新生作用。     

新疆紫草质量稳定性研究

目的:研究不同产地紫草中紫草素的含量,对质量较好者研究温度对其含量的影响,为新疆紫草的规范化生产提供依据.方法:采用药典方法测定不同部位、不同产地紫草素含量,并分析不同温度条件下紫草素含量变化的影响因素.结果:新鲜产的新疆紫草紫草素含量较高,质量较好.50～70℃的温度对紫草素影响很小,当温度超过80℃后,紫草素含量快速降低.结论:在与紫草素有关的应用时应优先选择近期生产的新疆紫草,在药物的干燥、保存、提取和制剂等工艺过程中,应尽量避免高温.     

Shikonin reverses pyruvate kinase isoform M2-mediated propranolol resistance in infantile hemangioma through reactive oxygen species-induced autophagic dysfunction

Infantile hemangioma (IH) is the most common benign tumor in infancy. Propranolol, a nonselective β-adrenergic receptor blocker, is now the first-line therapy for IH. Recently, low sensitivity to propranolol therapy has become one major reason for the failure of IH treatment. However, the exact underlying mechanisms are yet to be fully elucidated. Here, we reported that pyruvate kinase isoform M2 (PKM2), an essential glycolytic enzyme, played a critical role in regulating the progression of IH and the therapeutic resistance of propranolol treatment. Shikonin reversed the propranolol resistance in hemangioma-derived endothelial cells and in hemangioma animal models. Moreover, shikonin combined with propranolol could induce excessive reactive oxygen species (ROS) accumulation and lead to autophagic dysfunction, which is essential for the enhanced therapeutic sensitivity of propranolol treatment. Taken together, our results indicated that PKM2 has a significant role in hemangiomas progression and therapeutic resistance; it could be a safe and effective therapeutic strategy for those hemangiomas with poor propranolol sensitivity combined with shikonin.     

生肌止痛方坐浴联合紫草纱条引流促进小儿肛周脓肿术后康复临床研究

目的探讨生肌止痛方坐浴联合紫草纱条引流促进小儿肛周脓肿术后康复的临床效果。方法选择肛周脓肿患儿90例作为研究对象,采用随机数表法分为A、B、C 组,各30例。3组均给予肛周脓肿一次根治术,A组术后采用高锰酸钾坐浴联合凡士林纱条引流,B组术后采用高锰酸钾坐浴联合紫草纱条引流,C组采用生肌止痛方坐浴联合紫草纱条引流。观察3组术后1、7、14 d时创面分泌物情况、创面缩小率,记录3组创面愈合时间,统计3组术后1、14 d时血清P物质(SP)、五羟色胺(5-HT)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果术后7 d和14 d,B组和C组创面分泌物评分均低于A组,且C组创面分泌物评分均低于B组(均P<0.05)。术后7 d和14 d,B组和C组创面缩小率均高于A组,C组创面缩小率均高于B组(均P<0.05)。B组和C组切口愈合时间均低于A组,C组切口愈合时间低于B组(均P<0.05)。术后14 d,3组5-HT、SP、TNF-α、IL-1β水平与术前1 d时比较均显著降低(P<0.05);术后14 d,3组5-HT、SP、TNF-α、IL-1β水平差异明显(P<0.05),B组和C组均低于A组,C组水平均低于A组和B组(均P<0.05)。结论生肌止痛方坐浴联合紫草纱条引流可促进肛周脓肿患儿创面愈合,缩短愈合时间。