波形蛋白的结构、功能和与肿瘤的关系

波形蛋白是真核细胞骨架系统的组成成分之一,除了对细胞的黏附、迁移、增殖、凋亡等生理功能起重要作用,同时也与间充质细胞来源的肿瘤分化、转移和增殖以及肿瘤微环境有着密切的关系.文章结合近期有关波形蛋白的研究,综述了波形蛋白结构形态、细胞生物学功能上最新的研究进展以及波形蛋白在肿瘤研究中的相关进展.     

大鼠创伤性脑损伤后海马齿状回中脑脂结合蛋白的表达变化

Objective To investigate the change of brain lipid binding protein(BLBP) expression in hippocampus dentate gyrus(DG) at different time points after traumatic brain injury (TBI). Methods Seventy-two rats were divided into the injured group, sham group and control group randomly, and then were subjected to a lateral fluid percussion injury (FPI). Western blotting was used to detect BLBP expression. Brains were sectioned for immunofluorescence staining of BLBP and Vimentin at the time points of 1, 3, 7, 14 days after TBI.Results The results of Western blotting showed that the BLBP expression was lower than that of control group at 1 day post injury（EM>P/EM><0.01） and reached the peak compared with the other groups at 7 days after injury（EM>P/EM><0.01）, then descended at 14 days compared with control group after injury（EM>P/EM><0.01）. The changes of BLBP and Vimentin double-label positive cells were consistent with the results of Western blotting. The BLBP and Vimentin double-label positive cells were found mainly at the subgranular zone of ipsilateral injured hippocampus DG, and most of them were radial glia like cells; BLBP and Vimentin double-labelled positive cells were found at the hilus of DG at 7days after injury, and most of them looked like reactive astrocytes. Conclusion The expression of BLBP in DG after TBI decreased firstly, then increased and reached peak at 7 days after injury, decreased dramatically again at last. The     

电针对兔钝器伤后骨骼肌中转化生长因子-β1和波形蛋白表达的影响

摘要 目的：通过电针足三里和阿是穴,研究急性骨骼肌钝器伤后,电针治疗对转化生长因子-β1（TGF-β1）和波形蛋白表达的影响,探讨电针抑制纤维化和促进肌纤维再生的机制。 方法：将60只新西兰兔随机分为模型组（A组）、阿是穴组（B组）、足三里组（C组）、足三里+阿是穴组（D组）4组,每组15只。电针组在造模后24h治疗,隔日1次。于造模后第7、14、28天取材,运用两步法免疫组化检测TGF-β1和波形蛋白。 结果：与A组相比,各电针组于骨骼肌损伤后（第7天和第28天）TGF-β1表达显著下降（P<0.05),D组表达低于B组和C组,B组低于C组(P<0.05),第14天时,B组与A组无明显差异（P>0.05)。波形蛋白在A组中少量表达,且随着时间延长呈下降趋势,而电针组中在第14天呈上升趋势,B组和C组波形蛋白表达低于D组(P<0.05),但仍高于A组(P<0.05),B组波形蛋白表达低于C组,但差异没有显著性(P>0.05)。 结论：电针有抑制骨骼肌纤维化、促进骨骼肌再生的作用,可能与抑制TGF-β1和提高波形蛋白的表达水平有关;电针刺激阿是穴或足三里均有利于受损骨骼肌的修复且两穴具有协同作用。     

SPINK1和Vimentin在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 1型（serine protease inhibitor Kazal 1,SPINK1）和Vimentin在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及其意义。方法免疫组织化学SP法检测136例NSCLC和62例正常肺组织中SPINK1和Vimentin表达,进行单因素Kaplan-Meier生存分析和多因素Cox回归分析。结果SPINK1、Vimentin在136例NSCLC组织中的阳性率分别为65.4%（89/136）、52.9%（72/136）,在正常肺组织中的阳性表达率分别为4.8%（3/62）、3.2%（2/62）,差异均有统计学意义（P < 0.01）。不同TNM分期、是否淋巴结转移病人的SPINK1和Vimentin表达阳性率差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）,不同分化程度病人SPINK1表达阳性率差异有统计学意义（P < 0.05）。NSCLC组织中SPINK1与Vimentin表达呈正相关关系（r_s=0.368,P < 0.01）。多因素Cox回归分析显示,TNM分期、淋巴结转移、SPINK1及Vimentin表达水平均为NSCLC预后的独立影响因素（P < 0.05~P < 0.01）。结论SPINK1和Vimentin可能在NSCLC的进展、转移中扮演重要的角色,同时SPINK1可能作为预测NSCLC预后的新的标记物。     

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体对类风湿关节炎患者一年关节影像学进展的预测价值

目的探讨抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体对类风湿关节炎(RA)患者1年关节影像学进展的预测价值。方法选2014年11月至2018年7月中山大学孙逸仙纪念医院风湿免疫科门诊和住院的RA患者,收集患者的临床资料,包括基于C反应蛋白的28个关节疾病活动度评分(DAS28-CRP)等。检测患者抗MCV抗体等。随访1年,采用改良Sharp评分总分(mTSS)进行影像学评估。采用单因素或多因素logistic回归分析1年影像学进展的危险因素。结果共入选220例RA患者,其中171例(77.7%)患者抗MCV抗体阳性。与抗MCV抗体阴性者比,阳性者DAS28-CRP[3.8(2.4,5.0)比3.1(2.1,4.0),P=0.007]、出现功能障碍的比例[37例(21.6%)比4例(8.2%),P=0.033]、mTSS[11(2,27)分比4(1,10)分,P=0.005]、关节间隙狭窄评分[4(0,14)分比2(0,6)分,P=0.024]、关节侵蚀评分[5(1,18)分比3(0,5)分,P=0.003]均明显升高。随访1年后,66例(30.0%)RA患者出现关节影像学进展,基线抗MCV抗体阳性者出现影像学进展的比例明显高于阴性者[58例(33.9%)比8例(16.3%),P=0.018]。多因素logistic回归分析显示,基线抗MCV抗体阳性(OR=2.341,95%CI 1.002~5.469,P=0.049)是1年关节影像学进展的独立危险因素。结论基线抗MCV抗体阳性是RA患者1年关节影像学进展的预测因素,未来其不仅能作为RA诊断的补充指标,亦可用于RA病情评估及预测预后。     

热休克蛋白47在2型糖尿病肾病中的表达及其意义

目的:探讨热休克蛋白47( heat shock protein 47,HSP47)在2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的表达及其意义.方法:45例2型DN患者分为DN组25例和轻微病变性肾病(MCD)组20例.使用常规病理组织学方法观察肾小球、肾小管间质和血管的病变程度,免疫组织化学染色法观察各实验组肾组织内HSP47、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)及Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)的表达,并进行免疫双染共定位分析.结果:与MCD组比较,DN组肾小球内HSP47、α-SMA、Vimentin及Col Ⅳ表达明显增加(P＜0.05);肾小管间质纤维化区域内HSP47、α-SMA及Col Ⅳ表达亦明显增加(P＜0.05),Vimentin则在肾小管间质内表达显著性增加(P＜0.01).免疫双染结果显示,DN组在增生硬化的肾小球系膜区及肾小管间质纤维化处,HSP47表达阳性细胞内同时有α-SMA阳性表达,并且HSP47表达阳性细胞同时具有Vimentin阳性表达.结论:HSP47过度表达或许通过帮助前胶原分子细胞内处理及加工,参与2型DN肾小球硬化及肾小管间质纤维化的形成.     

Hsa-microRNA-138慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的:构建hsa-microRNA-138慢病毒表达载体。方法:PCR扩增pri-miR-138-2前体序列,克隆至plenti-GFP慢病毒表达载体,双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测;构建成功后感染人胰腺癌细胞PANC-1,48 h后Real-time Q-PCR检测miR-138的表达。结果:酶切、测序鉴定证明插入序列正确,测定病毒滴度为1×109TU/ml,病毒感染48 h后的PANC-1胰腺癌细胞观察可见绿色荧光,Real-time Q-PCR显示被感染细胞的miR-138表达量较未感染细胞显著增高。结论:建立了高效稳定表达hsa-miR-138的慢病毒转染系统。     

全反式维A酸对恶性黑素瘤A375细胞上皮-间质转化相关分子表达的影响

【摘要】 目的 研究全反式维A酸（ATRA）对人恶性黑素瘤A375细胞中上皮-间质转化（EMT）相关分子表达的影响。方法 用含10 μmol/L ATRA的DMEM培养基和DMEM培养基分别处理A375细胞24和48 h作为ATRA-1组和ATRA-2组、对照1组和对照2组,采用实时定量PCR法检测EMT相关基因上皮钙黏着蛋白、神经钙黏着蛋白、波形蛋白、β联蛋白mRNA的表达。Western印迹法检测ATRA-1组、ATRA-2组、对照1组中上述蛋白的相对表达量,直接免疫荧光法检测上皮钙黏着蛋白和波形蛋白的荧光强度。统计分析采用两因素方差分析、单因素方差分析及LSD-t检验。结果 ATRA-1组和ATRA-2组分别与对照1组和对照2组相比,上皮钙黏着蛋白mRNA的表达均显著增加（F = 13.148、31.529,P < 0.05）,而神经钙黏着蛋白、波形蛋白、β联蛋白mRNA的表达均显著降低（均P < 0.05）;ATRA-2组上皮钙黏着蛋白mRNA的表达显著高于ATRA-1组（F = 13.148,P < 0.05）,而其他3种蛋白mRNA的表达显著低于ATRA-1组（均P < 0.05）;对照1组与对照2组上述蛋白的mRNA表达差异无统计学意义（均P > 0.05）。Western印迹法显示,与对照1组相比,ATRA-1组和ATRA-2组上皮钙黏着蛋白表达上调,而神经钙黏着蛋白、波形蛋白、β联蛋白表达均下调（均P < 0.05）;与ATRA-1组相比,ATRA-2组上皮钙黏着蛋白表达上调（P < 0.05）,神经钙黏着蛋白、波形蛋白、β联蛋白表达下调（均P < 0.05）。直接免疫荧光显示,ATRA-1组、ATRA-2组上皮钙黏着蛋白的荧光强度（6.23 ± 0.08、10.37 ± 0.13）显著高于对照1组（2.37 ± 0.14,均P < 0.05）,而波形蛋白的荧光强度（15.17 ± 0.18、10.29 ± 0.03）显著低于对照1组（50.16 ± 0.26,均P < 0.05）,抑制上皮向间质转化。结论 ATRA可上调A375细胞中上皮钙黏着蛋白的表达,降低神经钙黏着蛋白、波形蛋白、β联蛋白的表达,可能抑制A375细胞发生EMT现象。     

黄芪皂甙和丹参酮ⅡA对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后胚胎型肌球蛋白重链和波形蛋白表达的影响

目的:观察黄芪皂甙和丹参酮ⅡA对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后胚胎型肌球蛋白重链(embryonic Myosin Heavy Chain,MHC-emb)和波形蛋白(vimentin)表达的影响。方法:80只雄性Wistar大鼠(体重180～200g)随机分为A组(黄芪皂甙组)、B组(丹参酮ⅡA组)、C组(黄芪皂甙+丹参酮ⅡA组)、D组(黄芪丹参注射液组)、E组(生理盐水对照组),每组16只。采用打击装置造成右侧腓肠肌中段钝挫伤模型,分别于损伤局部注射相应药物,并于损伤后4、7、14和28天进行腓肠肌损伤部位取材。Western Blotting方法检测各组MHC-emb和波形蛋白表达量的变化。结果:①与生理盐水组相比,各干预组MHC-emb表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),这种情况一直持续到伤后28天;其中又以C组和D组升高最为明显;②与生理盐水组相比,各干预组波形蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),这种情况一直持续到伤后28天;其中又以C组和D组降低最为明显。结论:在急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,黄芪皂甙、丹参酮ⅡA均能促进MHC-embmRNA表达,抑制波形蛋白mRNA表达,联合使用时效果最佳,与黄芪丹参复方成分基本一致。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血周围皮质与纹状体区波形蛋白表达的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠缺血周围皮质纹状体区波形蛋白(vimentin)的影响。方法:雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型组、电针组。采用改良线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。术后第1天开始电针大鼠患侧肢体"曲池"、"足三里"穴30min,1次/天,至动物处死。对各组大鼠在电针干预前后进行神经行为学评分,同时在电针干预第3天、第7天后,分别对3组大鼠进行CatWalk步态分析系统的运动行为学检测,免疫组化检测大鼠缺血周围皮质与纹状体区vimentin表达。结果:电针干预第3天、第7天后,与相同时间点模型组比较,电针组的神经功能缺损症状明显改善(P0.05或P0.01);Cat Walk步态分析系统结果显示,电针组运动速度增加,持续时间减少,差异均有显著性意义(P0.05);在大鼠缺血周围皮质和纹状体区,电针组vimentin表达均显著增加(P0.05)。结论:电针能明显促进局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血周围皮质纹状体区vimentin的增殖,改善脑缺血大鼠的神经功能缺损及运动功能。