TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达

目的:构建携带绿色荧光蛋白的TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体,转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)。方法:设计含有GM-CSF信号肽序列和BglⅡ及HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增TNFα-Tumstatin,将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组。筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒,酶切鉴定并测序。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,经过包装、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基因的表达。结果:重组腺病毒质粒经PCR和PacⅠ酶切鉴定,证实含有TNFα-Tumstatin融合基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因。结论:成功构建了TNFα-Tumstatin融合基因的腺病毒表达载体,能高效率感染hUCMSCs,为进一步研究融合基因修饰的hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基础。     

中药治疗复发性口腔溃疡17例观察

目的:观察中药治疗复发性口腔溃疡的临床疗效。方法:34例随机分为中药组和对照组各17例,中药组给予中医辨证施治,对照组给予甘露聚糖肽片治疗。结果:总有效率中药组94.1%、对照组64.7%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:采用滋阴补阳法组方治疗RAU,疗效显著,未见明显不良反应。     

腹腔镜子宫楔形切除术并术后阴道置放曼月乐治疗子宫腺肌病效果观察

目的观察腹腔镜子宫楔形切除术并术后阴道置放左炔诺孕酮宫内缓释系统(曼月乐)治疗子宫腺肌病的效果。方法子宫腺肌病患者57例,行腹腔镜子宫楔形切除术+术后阴道置放曼月乐治疗33例(A组),采用腹腔镜子宫楔形切除术治疗24例(B组)。分别于术后3、6、12、18、24个月比较各组子宫体积、痛经评分、月经量、血清CA125水平、血红蛋白,术后24个月记录复发和妊娠情况。结果 A组术后各时点子宫体积较术前明显减小,痛经评分降低,月经量减少,血清CA125水平降低(P均<0.05);A组术后24个月子宫体积小于B组,痛经评分、月经量少于B组(P均<0.05)。B组术后子宫体积减小,痛经评分、月经量、血清CA125水平降低,但随着治疗后时间延长,子宫体积有增大趋势,痛经评分升高,血清CA125水平升高。术后24个月A组无复发(0%),B组复发2例(8.3%),A、B组复发率相比,P>0.05。结论腹腔镜子宫楔形切除术并术后阴道置放曼月乐治疗子宫腺肌病疗效较好,可更有效地缓解症状。     

超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法同时测定肋柱花药材中5种活性成分含量

目的 建立同时测定肋柱花药材中5种活性成分含量的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法。方法 色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C18柱（100 mm×2.1 mm,1.9μm），流动相为甲醇-含5 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸水溶液（梯度洗脱），流速为0.25 mL/min，柱温为30℃，进样量为5μL；离子源为电喷雾电离（ESI），电离模式为ESI-（木犀草素、芒果苷）和ESI+（异荭草苷、獐牙菜苦苷、当药黄素），多反应监测（MRM）模式，喷雾电压为3 500 V（正离子模式）和3 000 V（负离子模式），雾化温度为300℃。采用SIMCA 14.1软件进行主成分分析。结果 木犀草素、异荭草苷、獐牙菜苦苷、芒果苷、当药黄素的质量浓度分别在0.404 1～12.931 2 mg/L、0.392 2～12.550 4 mg/L、0.283 8～9.081 6 mg/L、0.305 5～9.776 0 mg/L、0.356 7～11.414 4 mg/L范围内与峰面积线性关系良好（R2≥0.999 0）；检测限分别为0.521 0,1.319 8,0.813 3,1....     

高速逆流色谱法提取分离天然产物中生物碱的应用

生物碱类化合物在植物中广泛存在，具有一系列药理活性，并已被广泛用于治疗各种疾病。由于生物碱通常存在于多组分混合物中且含量较低，较难通过传统方法进行提取分离。高速逆流色谱法是一种不存在固态支撑相的液-液色谱技术，具有进样量大、成本低、不存在不可逆吸附等优势。相比于传统的生物碱提取分离方法，高速逆流色谱法可选的溶剂体系和洗脱模式可以保证一次性分离多种不同极性生物碱，可实现生物碱类化合物的高回收及大量制备。该研究通过借鉴相关文献，讨论了高速逆流色谱(HSCCC)相比于传统分离手段的优缺点，并对近年来采用高速逆流色谱法分离生物碱类化合物所用的溶剂系统和洗脱模式进行了总结，旨在为生物碱类化合物的高速逆流色谱分离提供一些参考。