Cyclin D1启动子在养精胶囊促进小鼠精原干细胞增殖中的作用※

目的 研究养精胶囊促进小鼠精原干细胞（SSCs）增殖的分子机制。方法 将不同浓度的养精胶囊提取物加入SSCs中培养48 h，CCK-8检测细胞的增殖活性，流式细胞仪检测细胞周期，荧光素酶报告基因检测Cyclin D1启动子的活性，qRT-PCR以及免疫荧光检测Cyclin D1的表达。之后进行阻断实验，在加入养精胶囊前预先加入siRNA-Cyclin D1，同样的方法检测细胞的增殖活性、细胞周期、Cyclin D1启动子的活性以及Cyclin D1的表达情况。结果 低、中、高浓度的养精胶囊可以促进SSCs的增殖，提高S期细胞的比例，增强Cyclin D1启动子的活性，促进Cyclin D1的表达。阻断Cyclin D1后，SSCs的增殖活性降低，S期细胞比例减少，Cyclin D1启动子的活性降低，Cyclin D1的表达减少。结论 养精胶囊通过增强Cyclin D1启动子的活性提高Cyclin D1的转录和翻译水平，进而促进SSCs增殖。     

南苜蓿总皂苷对HepG2细胞及糖尿病大鼠外周组织胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的考察南苜蓿总皂苷提取物对体内外降糖作用的特点。方法采用胰岛素持续作用于HepG2细胞复制细胞胰岛素抵抗模型。测定单位细胞葡萄糖的消耗量,检测细胞内丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。将10只SD大鼠设为对照组、其余60只大鼠采用高糖高脂饮食和链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,成模后进行分组,随机分为模型组、二甲双胍组、南苜蓿总皂苷高、低剂量组(以提取物计分别为1.4、0.7 g/kg),每组10只。各给药组灌胃相应药物,连续给药30 d。末次给药后,取肝脏和骨骼肌组织检测MDA、SOD、GSH-Px、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用Western blot法检测骨骼肌组织磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)、葡萄糖转运体4(GLUT4)蛋白的表达。结果与模型组比较,200、100μg/mL浓度组能增加胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量和SOD、GSH-Px含量,降低MDA含量(P0.05或P0.01);与模型组比较,高剂量组能使模型大鼠的肝脏和骨骼肌中IL-1β、TNF-α、MDA水平降低;升高SOD、GSH-Px水平(P0.05);骨骼肌组织中p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、GLUT4的蛋白表达量升高(P0.05)。结论南苜蓿总皂苷体外促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗;体内通过减少对肝脏和骨骼肌细胞的氧化损伤和炎症反应,增强骨骼肌中胰岛素介导的信号传导,达到减轻胰岛素抵抗的作用,可能是其体内降糖机制。     

加味黄连解毒汤灌肠辅助治疗重症肺炎合并胃肠功能障碍临床研究

目的:观察加味黄连解毒汤灌肠辅助治疗重症肺炎痰热壅肺证合并胃肠功能障碍的临床疗效。方法:选取64例重症肺炎痰热壅肺证合并胃肠功能障碍患者,依据不同的治疗方法分为治疗组和对照组,每组32例。对照组给予抗菌药、胃肠功能保护药、机械通气等对症治疗,治疗组在对照组基础上联合加味黄连解毒汤灌肠治疗。比较2组临床疗效、治疗前后中医证候积分及血清降钙素原(PCT)水平,记录不良反应发生情况。结果:治疗组总有效率93.75%,高于对照组的71.88%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组中医证候积分均较治疗前降低,治疗组中医证候积分比对照组下降更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗3天与治疗7天,治疗组PCT水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,治疗组发生不良反应5例,对照组发生不良反应4例,未经处理均自行缓解。结论:加味黄连解毒汤灌肠辅助治疗重症肺炎痰热壅肺证合并胃肠功能障碍,可以有效减轻患者的临床症状,改善胃肠功能,抑制炎症反应。     

基于1H-NMR的人参总皂苷治疗缺血性脑中风的血清代谢组学研究

课题组基于1H-NMR研究人参总皂苷对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠血清代谢组的影响。实验将48只Wistar雄性大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、阳性药组(6 mg·kg-1·d-1)和人参总皂苷高、中、低剂量组(200,100,50 mg·kg-1·d-1)。实验采用预给药,造模前连续给药5 d,末次给药后2 h,开始造模,采用改良的Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,假手术组只暴露左侧血管不做插线处理,所有大鼠只栓塞左侧大脑中动脉。2 h后轻轻撤出线栓,术后观察大鼠的外观,反应和活动情况,并进行神经症状评分。术后24 h各组眼后静脉丛采血,一定方法处理后采集1H-NMR谱,并用主成分分析方法对其进行分析。与假手术组比较,模型组的乳酸、谷氨酸、牛磺酸、胆碱、葡萄糖、蛋氨酸的含量显著升高(P<0.05),3-羟基丁酸、脂质和磷酸肌酸/肌酸的含量显著性降低(P<0.05)。与模型组比较,人参皂苷组的脂质、3-羟基丁酸酯、磷酸肌酸/肌酸含量显著增加(P<0.05),柠檬酸、胆碱、牛磺酸、葡萄糖和蛋氨酸的含量有变化,但没有显著性差异,乳酸和谷氨酸显著性降低(P<0.01)。结果表明人参总皂苷对大鼠脑缺血再灌注有保护作用,也可以调节代谢紊乱,促进新陈代谢回归表型到正常范围。     

NT-proBNP联合肾小球滤过率对慢性心功能不全患者心衰程度的预测价值

目的: 研究N末端B型利钠肽原（NT proBNP）联合估算肾小球滤过率（eGFR）对慢性心衰患者心衰程度的预测价值。方法: 收募有慢性心衰病史、入院完善NT proBNP和eGFR的临床心功能下降患者124例，并按照心功能等级及eGFR进行分组，分析肾功能正常及减低患者间血浆NT proBNP水平差异，Pearson相关分析NT proBNP与eGFR的相关性，二元Logistic回归分析纳入心衰程度的危险因素并构建预测模型，受试者工作特征（ROC）曲线评估NT proBNP与预测模型对慢性心衰程度的预测效能。结果： 肾功能减低组血浆NT proBNP水平较肾功能正常组明显增高（P<0.01）。对心功能Ⅲ级和Ⅳ级分别进行亚组分析，结果显示肾功能正常组与肾功能减低组患者NT proBNP亦有统计学差异（P均<0.01）。Pearson相关性分析显示，慢性心衰患者的血浆NT proBNP水平与eGFR呈负相关（r=-0.499，P<0.01)。Logistic回归分析后纳入NT proBNP、肾功能分期以及两变量乘积建立模型，ROC曲线分析提示预测模型比单用NT proBNP对慢性心衰患者心功能恶化程度预测性更好（曲线下面积分别为0.808和0.751）。结论： 慢性心衰患者血浆NT proBNP水平与eGFR呈负性关联，且NT proBNP联合eGFR对慢性心功能不全患者心衰程度具有较高的预测能力。     

β-纤维蛋白原-455G/A基因多态性与胆囊癌的相关性研

目的 通过检测胆囊癌患者β-纤维蛋白原（Fgβ）-455G/A基因，探讨Fgβ-455G/A基因多态性与胆囊癌的相关性。方法 采集50 例胆囊癌患者（胆囊癌组）和50 例胆囊结石伴慢性胆囊炎患者（胆囊炎组）的静脉血，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）方法对Fgβ-455进行基因分型。 结果 Fgβ-455 基因GA杂合型和AA纯合子在胆囊癌中的频率显著高于胆囊炎组，显著增加胆囊癌发生的危险性，OR值（95%CI）分别为2.526（1.052～6.068）和4.306（1.177～15.749）。结论 Fgβ-455G/A位点G/A单个碱基的改变可能在胆囊癌的发病中起着重要的作用。     

三七HPLC指纹图谱及5种成分测定

目的 建立三七HPLC指纹图谱,并测定5种成分的含有量.方法 三七70%甲醇提取物的分析采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.5 mL/min;柱温25℃;检测波长203 nm.结果 15批样品指纹图谱中有5个共有峰,相似度均大于0.99.三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd分别在0.000 76~0.567 64(r=0.9999)、0.002 69~2.017 43 (r=0.9998)、0.000 38~0.283 82 (r=1.000 0)、0.002 83~2.12483 (r=0.999 8)、0.000 78~0.582 98 mg/mL (r=0.999 8)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为101.78%、97.22%、102.14%、98.96%、101.73%,RSD分别为1.58%、1.31%、2.17%、1.55%、1.80%.结论 该方法简便、快速、准确,可用于三七的质量控制.     

不同来源鸡血藤化学特征与抗肿瘤作用差异研究

目的:评价不同来源鸡血藤生物活性、化学特征差异性,探讨正品鸡血藤优势,为鸡血藤的质量评价体系完善提供实验基础。方法:利用UPLC建立不同来源鸡血藤乙酸乙酯部位指纹图谱;利用香草醛-盐酸法、分光光度法及MTS法分别测定鸡血藤粗提物原花青素含量、DPPH·自由基清除率及人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)IC_(50)。结果:指纹图谱相似度、DPPH·自由基清除率及原花青素含量结果在不同来源鸡血藤之间具有显著差异;UPLC指纹图谱相似度可区分广西鸡血藤、越南鸡血藤、云南鸡血藤与四川鸡血藤,DPPH·清除率及原花青素含量可区分广西鸡血藤、越南鸡血藤、云南鸡血藤与四川鸡血藤;相关性分析结果表明,DPPH·自由基清除率与原花青素含量呈明显正显著相关,自由基清除能力与抑制肿瘤细胞活力呈正显著相关(P<0.05或P<0.01)。结论:正品来源鸡血藤无论是在提取率、原花青素含量还是抑制乳腺肿瘤细胞活力都存在明显优势,原花青素含量可能是区分不同基源鸡血藤抗肿瘤作用的重要指标。