胱硫醚β-合酶与动脉粥样硬化

高同型半胱氨酸血症是动脉粥样硬化的一个独立的危险因素,其发生与胱硫醚β－合酶基因突变所造成的酶活性下降有关。胱硫醚β－合酶催化蛋氨酸循环过程中产生的同莳地胱所酸与丝氨酸缩合成胱硫醚,在调节血液同型半胱氨酸浓度方面起重要作用。本文介绍了胱硫醚β－合酶的结构,功能和活性调节等生物化学特性及其与动脉粥样硬化发生的关系。     

新生小牛血清,碱性成纤维细胞生长因子和肝素对大鼠血管平滑肌细胞 …

为探讨新生小牛血清和碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞迁移与肝素抑制新生小因清促血管平滑肌细胞迁移的分子机制,采用反转录聚合酶链反应方法合成骨桥蛋白ｃＤＮＡ探针,以羟基脲抑制新生小牛血清、碱性成纤维细胞生长因子对血管平滑肌细胞的促增殖作用后,观察其对骨桥蛋白基因表达及能量转换的影响。结果发现,新生小牛血清、碱性成纤维细胞生长因子均能显著诱导血管平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达,在两种因素作用下肌酸激     

研究生分子生物学课程体系构建和教学内容优化的研究与实践

为适应培养高层次创新型人才的需要,我们从1990年起,为博士和硕士研究生开设“医学分子生物学理论与实验技术”课程。面对该学科领域蓬勃发展的新技术、层出不穷的新理论但又缺乏统一模式的课程体系与教学内容和系统反映学科理论与应用的合适教材的现状,课题组本着在以探索和研究为基础的教学（研究型教学）过程中培养研究生的科研能力与创新能力的指导思想,     

脱氢表雄酮抑制血管平滑肌细胞增殖的体外研究

目的研究脱氢表雄酮(DHEA)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖过程中的作用及机制。方法 AngⅡ处理体外培养的VSMC,再用DHEA处理VSMC,MTS、细胞计数检测DHEA对AngⅡ诱导的VSMC增殖的影响。定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测DHEA对AngⅡ诱导的VSMC中增殖细胞核抗原(PCNA)、Krüppel样因子5(KLF5)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测DHEA对AngⅡ诱导的VSMC的培养基中过氧亚硝基阴离子(ONOO~-)浓度的影响。用小干扰RNA(siRNA)内源性敲低iNOS,Western blot检测VSMC中PCNA的表达。结果 MTS和细胞计数结果显示,DHEA能显著抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖(P0.05)。qRT-PCR和Western blot结果显示,在mRNA和蛋白质水平,DHEA显著抑制AngⅡ诱导的VSMC中PCNA、KLF5和iNOS表达(P0.05)。ELISA结果显示,DHEA显著减少AngⅡ处理的VSMC培养基中ONOO~-的浓度(P0.05)。内源性敲低iNOS后,Western blot结果显示,DHEA对AngⅡ诱导的PCNA蛋白表达无影响(P0.05)。结论 DHEA可能通过抑制iNOS产生的ONOO~-,使KLF5的表达下调,进而发挥抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖的作用。     

不要低估血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化斑块形成中的作用

血管内皮细胞、平滑肌细胞(SMC)和巨噬细胞共同参与动脉粥样硬化(As)斑块形成。近年研究表明,SMC来源的细胞占As斑块中细胞总数的70%以上。As斑块中的SMC通过自分泌细胞因子促进自身的增殖、迁移和炎症反应,通过旁分泌激活单核/巨噬细胞并将其募集到As损伤部位,同时通过其细胞膜表面表达的脂蛋白受体摄取脂质形成泡沫细胞。SMC在As斑块形成中扮演十分重要的角色,应进一步深化对SMC在As发生发展中的作用及作用机制的研究。     

黄酮甙类药物可能通过抑制核因子-κB信号通路改善Alzheimer病大鼠模型学习记忆障碍

目的:1,观察Alzheimer病(AD)模型大鼠核因子-κB(NF-κB)表达变化;2,研究黄酮甙类药物(葛根素)对AD模型大鼠NF-κB表达的影响。方法:wistar雄性大鼠18只,随机分为药物组、模型组、对照组,每组各6只。药物组和模型组双侧海马注射Aβ制成AD模型,对照组行假手术,双侧海马注射生理盐水。药物组按150mg/(kg.d)经腹腔注射葛根素治疗14d后处死;模型组和对照组给予3.75ml/(kg.d)生理盐水假治疗14d后处死。用Morris水迷宫评测学习记忆能力。westernblot分析和免疫组化两种方法检测大鼠海马NF-κB的表达,并作HE染色,观察病理改变。结果:模型组与对照组比较,平均逃避潜伏期延长,单位时间内跨越原平台次数减少,学习与空间记忆力受损(P<0.05)。葛根素治疗可使学习记忆力改善(P<0.05)。模型组大鼠NF-κB表达增强(P<0.01)。葛根素治疗可使过量表达的NF-κB水平下降(P<0.01)。结论:NF-κB可能参与了Aβ引发的AD大鼠模型的发病过程,黄酮甙类药物可能通过抑制NF-κB信号传导通路改善Alzheimer病模型大鼠学习记忆障碍。     

收缩蛋白在血管新生内膜形成过程中的表达变化及其对血管收缩力的影响

目的：为了探讨两种收缩蛋白SM α-actin和SM22α在新生内膜形成过程中的表达变化及与血管收缩反应性之间的关系。方法： 在建立大鼠颈总-胸腹主动脉血管内皮剥脱后内皮增生模型的基础上，用Western blot和免疫组化检测两种收缩蛋白的动态变化，用透射电镜观察VSMC肌丝和用生物法测定血管收缩反应性。结果： 血管内皮剥脱后，中膜SM α-actin和SM22α的表达下降，以术后7-14 d最低，VSMC内肌丝由致密变为稀疏，由束状变为网状，但是血管的收缩反应性显著高于对照组（P<0.05）。结论： 内皮剥脱后，VSMC的增生及新生内膜的增厚可引起受损血管收缩反应性的升高，这是内皮损伤促发动脉硬化的重要原因。     

β3整合素在生长因子促血管平滑肌细胞粘附和迁移中的作用

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)对β₃整合素表达的影响及β₃整合素在PDGF促血管平滑肌细胞(VSMC)粘附、迁移和增殖中的作用。方法:用抗β₃整合素胞外域抗体封闭VSMCβ₃整合素后,通过-TdR掺入、细胞粘附、细胞迁移分析及RT-PCR等方法,检测PDGF对β₃整合素表达及对VSMC粘附、迁移和增殖的影响。结果:阻断β₃整合素与细胞外基质(ECM)蛋白相互作用后,可在一定程度上抑制PDGF刺激的VSMC增殖,使-TdR掺入率降低39%;在β₃整合素抗体浓度为10mg/L时,PDGF引发的细胞粘附和迁移受到显著抑制(P＜0.05);PDGF作用于VSMC6h,β₃整合素基因表达活性达到峰值,比对照细胞高87%。结论:PDGF可显著诱导β₃整合素在VSMC中表达;β₃整合素与ECM蛋白相互作用在PDGF促VSMC粘附、迁移方面发挥重要作用。     

利用聚合酶链反应扩增红细胞生成素基因片段

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增红细胞生成素（ＥＰＯ）基因片段时，通过用３２Ｐ－ｄＣＴＰ取代反应体系中的ｄＣＴＰ，直接合成３２Ｐ标记的ＥＰＯ基因探针．以此为探针经斑点印迹杂交技术证实慢性肾功能衰竭贫血大鼠肾脏ＥＰＯ因表达活性增强。