VEGF基因修饰兔骨髓间充质干细胞的研究**☆

背景：血管内皮生长因子的应用是组织工程组织血管化的有效手段。但是，血管内皮生长因子价格昂贵，并且半衰期非常短，很难在体内保持有效的作用浓度。故本实验将其转入组织工程的种子细胞——骨髓间充质干细胞中，使骨髓间充质干细胞能够有效地分泌血管内皮生长因子，从而达到促进血管生成的目的。 目的：探讨应用人血管内皮生长因子165进行基因修饰的可行性，为血管化组织工程组织的构建及缺血性疾病的治疗奠定实验基础。 设计：观察对比实验。 单位：吉林大学第一医院和吉林大学再生医学科学研究所。 材料：实验于2003-06/2004-08 在吉林大学再生医学科学研究所吉林大学重点实验室（生物安全实验室二级）完成。健康新西兰大耳白兔由吉林大学实验动物中心提供。4.0~5.0 月龄，体质量215~315 kg，雌雄兼用，实验过程中对动物处置均在麻醉状态、无菌条件下完成，符合动物伦理学标准。实验药品及试剂：Ham F12 培养基( GIBCO公司)，噻唑蓝(MTT) ( Sigma 公司)，pLXSN-KDRp-VEGF165 与pcDNA3.0 载体由本实验室自备, ELISA 检测试剂盒(深圳晶美生物公司)，感受态大肠杆菌DH5α、限制性内切酶BamH I、Xho I、HandIII、EcoR I 和标准DNA 分子( Promega 公司) 。 方法：分离、培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞。构建并鉴定pcDNA3.0-VEGF165 真核表达载体，利用脂质体介导其转染骨髓间充质干细胞，采用ELISA 方法检测转基因骨髓间充质干细胞的人血管内皮生长因子蛋白表达，MTT 法检测转基因骨髓间充质干细胞表达物对血管内皮细胞增殖活性的影响，设单纯培养骨髓间充质干细胞及pcDNA3.0 转染骨髓间充质干细胞组为对照组。 主要观察指标：①重组质粒双酶切和基因测序分析。②ABC-ELISA 法观察质粒转染后的骨髓间充质干细胞的人血管内皮细胞生长因子蛋白表达。③通过MTT 法检测人血管内皮生长因子165 基因转染骨髓间充质干细胞培养上清对血管内皮细胞增殖的影响。 结果：①构建的质粒用Hind III 和Xho I 双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定结果与预期完全相同，PCR 和酶切鉴定正确后行测序鉴定，测序结果正确，证明所构建的质粒为pcDNA3.0-VEGF165 重组质粒。②ABC-ELISA 法检测结果表明，人血管内皮生长因子165 基因重组载体转染骨髓间充质干细胞后24 h，即有较高水平的人血管内皮生长因子165 蛋白表达，48 及72 h 呈下降趋势，但与对照组比较，差异显著( P < 0.05) 。③MTT 法检测人血管内皮生长因子165 基因转染骨髓间充质干细胞培养上清对血管内皮细胞增殖的影响，结果显示，含2%, 4%, 8%, 16%和32%转染人血管内皮生长因子165 基因的骨髓间充质干细胞培养上清促血管内皮细胞增殖率均高于对照组 ( P < 0.05) 。 结论：人血管内皮生长因子165基因可成功地转染至骨髓间充质干细胞中，并可进行有效地表达。     

岩斜区脑膜瘤12例显微手术治疗分析

目的：探讨岩斜区脑膜瘤显微手术的治疗效果。方法：对12例行显微手术治疗的岩斜区脑膜瘤患者的临床资料及手术效果进行分析总结。结果：7例全切,3例次全切,2例大部分切除,术中去骨瓣减压1例,无手术死亡。结论：岩斜区脑膜瘤显微手术的治疗效果良好。     

丘脑胶质瘤的临床特征与手术治疗的分析

目的研究丘脑胶质瘤的临床特征、诊疗方法和手术技巧。方法回顾性分析我院经手术治疗的39例丘脑胶质瘤患者的临床表现、肿瘤影像学特点和手术治疗效果。结果丘脑不同类型胶质瘤影像学表现、全切率不尽相同。病程7d～3．5年，平均3．1月。肿瘤颅内压增高症状最为常见（90％），轻偏瘫56％，不自主运动10％，智力减退或精神症状30％；全组患者肿瘤手术全切率为53％，次全切率为29％，部分切除率为18％；出院时好转、稳定者占79％，恶化及出现新体征者占21％；手术死亡率为0。结论MRI是目前诊断丘脑肿瘤的最好检查方法。肿瘤的病理分类与临床症状、影像特征及手术效果均有关。     

原发性心脏恶性肿瘤的外科治疗

心脏原发性肿瘤相当罕见,尸检显示其发生率仅为0.05%,心脏原发性恶性肿瘤更为罕见[1]。自2002年9月~2004年4月,本院外科治疗原发性心脏恶性肿瘤3例,现报告如下。1临床资料本组3例病患:病例1,女,58岁,术前1个月出现间断发热及贫血,血小板计数减少,继而出现活动后气促、下肢水肿,有休克和晕厥史。心脏查体未见异常。心动超声示右心房内上腔静脉入口处可见3.3 cm×1.8 cm的异常回声光团,形态不规则,分叶状,伴少量心包积液,心室舒张功能受限。MRI和胸部CT显示右心房占位,大量心包积液,双侧胸腔积液。病例2,男,41岁,术前反复出现发热、关节肿痛…     

人脑胶质瘤组织中P21WAF/CIP1的异常表达及其病理学意义

目的探讨人脑胶质瘤组织P21WAF/CIP1的表达水平与胶质瘤恶性度的关系。方法免疫组化方法检测人脑胶质瘤标本41例,并对其表达水平进行评价。结果P21WAF/CIP1表达水平随胶质瘤恶性程度的升高呈下降趋势,但与组织学分级无相关性,全部受检标本P21WAF/CIP1染色强度无差异。结论胶质瘤组织P21WAF/CIP1表达呈异质性,与胶质瘤分级无相关性,但可参与胶质瘤的发生、发展。     

绒癌肺转移误诊2例

绒毛膜上皮细胞癌(简称绒癌)是发生于滋养细胞的恶性肿瘤。肿瘤的恶性程度高,肺转移多见,但对化疗高度敏感。采用大剂量化疗可使大多致病例获愈,手术治疗绒癌的肺转移瘤仅限于少数经反复多个疗程化疗,肿瘤吸收至一定程度不再缩小或产生耐药的病例。孙成孚、王元萼等关于肺切除治疗绒癌肺转移已作报道。本文报道2例绒癌肺转移误诊误治的教训。例1 45岁。咳嗽、咯黄痰2年,右下肺发现一肿物7月余伴憋气入院。9年前曾患葡萄胎做过刮宫术,以后月经正常,3～4/10天。此后顺娩2胎,无不规则阴道出血史。查体,右下胸部呼吸音     

VEGF基因修饰兔骨髓间充质干细胞的研究

背景:血管内皮生长因子的应用是组织工程组织血管化的有效手段.但是,血管内皮生长因子价格昂贵,并且半衰期非常短.很难在体内保持有效的作用浓度.故本实验将其转入组织工程的种子细胞--骨髓间充质干细胞中,使骨髓间充质干细胞能够有效地分泌血管内皮生长因子,从而达到促进血管生成的目的.目的:探讨应用人血管内皮生长因子165进行基因修饰的可行性,为血管化组织工程组织的构建及缺血性疾病的治疗奠定实验基础.设计:观察对比实验.单位:吉林大学第一医院和吉林大学再生医学科学研究所.材料:实验于2003-06/2004-08在吉林大学再生医学科学研究所吉林大学重点实验室(生物安全实验室二级)完成.健康新西兰大耳白兔由吉林大学实验动物中心提供.4.0～5.0月龄,体质量215～315 kg,雌雄兼用,实验过程中对动物处置均在麻醉状态,无菌条件下完成,符合动物伦理学标准.实验药品及试剂:Ham F12培养基(GIBCO公司),噻唑蓝(MTT)(Sigma公司),pLXSN-KDRp-VEGF165与pcDNA3.0载体由本实验室自备,ELISA检测试剂盒(深圳晶美生物公司),感受态大肠杆菌DH5α、限制性内切酶BamH Ⅰ、Xho Ⅰ、HandⅢ、EcoR Ⅰ和标准DNA分子(Promega公司).方法:分离、培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞.构建并鉴定pcDNA3.0-VEGF165真核表达载体,利用脂质体介导其转染骨髓间充质干细胞.采用ELISA方法检测转基因骨髓间充质干细胞的人血管内皮生长因子蛋白表达,MTT法检测转基因骨髓间充质干细胞表达物对血管内皮细胞增殖活性的影响,设单纯培养骨髓间充质干细胞及pcDNA3.0转染骨髓间充质干细胞组为对照组.主要观察指标:①重组质粒双酶切和基因测序分析.②ABC.ELISA法观察质粒转染后的骨髓间充质干细胞的人血管内皮细胞生长因子蛋白表达.③通过MTT法检测人血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞培养上清对血管内皮细胞增殖的影响.结果:①构建的质粒用Hind Ⅲ和Xho Ⅰ双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定结果与预期完全相同,PcR和酶切鉴定正确后行测序鉴定,测序结果正确,证明所构建的质粒为pcDNA3.0-VEGF165重组质粒.②ABC-ELISA法检测结果表明,人血管内皮生长因子165基因重组载体转染骨髓间充质干细胞后24 h,即有较高水平的人血管内皮生长因子165蛋白表达,48及72 h呈下降趋势,但与对照组比较,差异显著(P＜0.05).③MTT法检测人血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞培养上清对血管内皮细胞增殖的影响,结果显示,含2%,4%,8%,16%和32%转染人血管内皮生长因子165基因的骨髓间充质干细胞培养上清促血管内皮细胞增殖率均高于对照组(P＜0.05).结论:人血管内皮生长因子165基因可成功地转染至骨髓间充质干细胞中,并可进行有效地表达.     

内质网应激途径介导同型半胱氨酸致血管内皮细胞凋亡的研究进展

<正>在人体中,血管内皮细胞具有调节物质代谢、防止血栓形成和维持血流通畅等非常重要的生理功能。内质网(Endoplasmic reticulum,ER)可以调节细胞内蛋白质的正确折叠,是维持钙稳态及凋亡发生等功能的重要亚细胞器。近年来国外研究表明,同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)可通过内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)途径参与血管     

上腔静脉和无名静脉的切除及重建治疗纵隔肿瘤

目的　探讨分析纵隔肿瘤根治性切除 ,重建上腔静脉和无名静脉的手术意义及技术方法。　方法　回顾性分析北京协和医院 2 0 0 1～ 2 0 0 3年 11例纵隔肿瘤引起上腔静脉综合征患者的治疗及预后。根治性切除肿瘤 9例 ,其中 2例行心包修补静脉壁成形术 ,7例人工血管置换重建上腔静脉和无名静脉 ;2例部分切除。术中对左、右无名静脉分次阻断 ,单侧阻断时间 2 2 .15± 6 .2 9min,手术出血量 1342 .86± 6 92 .4 8ml。　结果　侵袭性恶性胸腺瘤 4例 ,胸腺癌5例 ,纵隔小细胞癌 2例。术后早期患者静脉梗阻症状即改善 ,无神经系统并发症 ,1例死于肺部感染 ,其余 10例全部健在 ,存活时间已达 6～ 30个月。　结论　上腔静脉和无名静脉的重建可以有效地消除上腔静脉综合征 ,其手术是安全的 ;但应注意病变的范围 ,争取根治性切除是提高生存率的关键。     

PULMONARY LEIOMYOSARCOMA

Three cases of pulmonary leiomyosarcoma were presented. The characteristic clinical features were described with review of literature. In comparison with bronchogenic carcinuma, the leiomyosarcoma has some characteristics: 1) On chest X-ray, it usually appears as a sharply demarcated, even density round mass, growing rapidly within the lung, it unusually accompanies with hilar or mediastlnal lymph node metastasis; 2) The preoperative cytological or pathological diagnosis is difficuh either by sputum smear or by bronehoscoplc biopsy or by fine needle percutaneous aspiration biopsy; 3) Pathological differential diagnosis of leiomyosarcoma of lung from anaplastie lung cancer is difficult. In conclusion, the primary pulmonary leiomyosarcoma is a rare malignant tumor, detect ing the present illness seriously, paying attention to the chest X-ray films characterize, early surglcal resection is the only way to get diagnosis and effective treatment method.