四例结核病并发IgA肾病患者的临床病理分析

IgA肾病是我国最常见的原发性肾小球疾病,发病10～20年后20%～30%的患者会走向终末期肾病[1].其病因和发病机制尚不清,可能与黏膜免疫有关.结核菌感染是否能引起IgA肾病尚不清楚,国外有结核病并发IgA肾病的个案报道[2].     

肾舒胶囊对5/6肾切除大鼠残余肾脏的保护作用及机制

目的　探讨肾舒胶囊对 5 / 6肾切除大鼠残余肾脏的保护作用及机制。方法　制作大鼠 5 / 6肾切除模型 ,1周后随机分为模型组、肾舒胶囊治疗组、苯那普利治疗组 ,同时作假手术对照。肾舒胶囊治疗组及苯那普利治疗组分别给予肾舒胶囊及苯那普利灌胃。术后 12周检测大鼠体重、血压、2 4h尿蛋白定量、肾功能 ,观察肾脏组织病理学改变 ,检测肾组织中血小板源性生长因子 (PDGF)、转化生长因子 β1(TGF β1)、Ⅳ型胶原 (Col Ⅳ )mRNA表达。结果　肾舒胶囊能显著降低 5 / 6肾切除大鼠 2 4h尿蛋白量 ,改善肾功能 ,抑制PDGF、TGF β1、Col ⅣmRNA表达的上调 ,肾脏组织病理显示它能明显抑制残余肾脏的代偿性肥大 ,减轻肾小球硬化及肾间质纤维化 ,其效果和苯那普利相当。结论　肾舒胶囊能延缓 5 / 6肾切除大鼠残余肾脏的病变进展。其作用机制与抑制系膜细胞增殖及细胞外基质积聚有关。     

Omi/HtrA2 shRNA重组真核表达质粒的构建及其在大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型中的作用

目的 构建在哺乳动物细胞中表达的Omi/HtrA2短发夹RNA(shRNA)的表达质粒,观察其对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧/复氧模型中Omi/HtrA2表达的影响.方法 根据Genbank中Omi/HtrA2 mRNA分别设计2对多聚核苷酸序列,退火形成互补双链DNA,分别克隆至经双酶切后的载体Pgenesil-1上,构建Omi/HtrA2特异性的shRNA表达载体PGP1和PGP2,进行酶切和测序鉴定.制作NRK-52E缺氧/复氧模型,将表达质粒通过脂质体介导转染NRK-52E,Westernblot检测Orni/HtrA2蛋白质表达.结果 将合成的DNA片段退火后克隆至Pgenesil-1载体上,构建Omi/HtrA2特异shRNA表达载体PGP1和PGP2;经酶切和测序证实构建成功,无碱基突变发生.将表达质粒介导转染NRK-52E缺氧/复氧模型后,细胞Chai/HtrA2蛋白质表达显著降低.结论 成功构建针对大鼠Omi/HtrA2基因的shRNA表达载体PGP1和PGP2,它们能有效抑制NRK-52E缺氧/复氧模型中Ckni/HtrA2表达.     

异基因骨髓移植后肾病综合征的临床与病理分析

目的探讨异基因骨髓移植后肾病综合征的临床和病理特点。方法对1例异基因骨髓移植后发生肾病综合征患者的临床、病理资料及治疗进行综合分析。结果本例患者在骨髓移植后28个月发生肾病综合征，在此之前患者有皮肤、口腔和肝脏损害表现；肾脏病理表现为膜性肾病。糖皮质激素及霉酚酸酯治疗后肾病综合征完全缓解。结论异基因骨髓移植后肾病综合征是慢性移植物抗宿主病的肾脏表现，可能为自身免疫性疾病，是移植物对宿主产生的一种排斥反应。肾穿刺活检对该病的诊断和预后判断具有重要价值，免疫抑制剂治疗有效。     

肾上腺髓质素对大鼠肾缺血再灌注损伤中肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 Wistar大鼠32只,随机分为4组:假手术组和IRI组各6只,转染空质粒组和转染AM质粒组各10只.大鼠右肾切除后1周,用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠AM真核表达质粒转染大鼠肾脏,1周后采用免疫组织化学方法检测转染效率.转染成功后夹闭左肾动脉45 min制作肾IRI模型,于再灌注24 h后留取肾组织标本.TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,RT-PCR检测肾组织Bcl-2、Bax和Fas的mRNA表达,蛋白质印迹法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白质表达.结果 转染AM质粒组的AM表达显著高于转染空质粒组(0.51±0.09和0.23±0.05,P＜0.05).与假手术组相比,IRI组肾组织细胞凋亡率明显增加[(38.79±7.52)%和(2.89±0.52)%,P＜0.05];肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达上调,分别为0.72±0.18和0.23±0.04、0.80±0.12和0.38±0.06、1.24±0.25和0.39±0.09、0.76±0.13和0.38±0.08、0.92±0.14和0.32±0.06、0.89±0.12和0.42±0.09(P＜0.05),Bax/Bcl-2升高(0.91±0.18和0.61±0.08,P＜0.05).转染AM质粒组肾组织凋亡细胞数、Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达下调,分别为(19.36±6.78)%、0.48±0.11、0.62±0.07、0.53±0.08、0.46±0.08、0.51±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);Bcl-2表达进一步上调为1.23±0.25,Bax/Bcl-2降低为0.44±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染空质粒组和IRI组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 AM能减轻肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡,其部分机制可能是通过抑制caspase依赖的内、外源性凋亡途径实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effect and mechanism of adrenomedullin (AM) on apoptosis of renal tubular epithelial cell in rats induced by renal ischemia reperfusion injury. Methods Thirty-two Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control group, IRI group, empty plasmid group and AM group. One week after removing the right kidney, eukaryotic expression vector encoding rat AM gene was transfected into the left kidney using an ultrasound-microbubble mediated system. After 1 week the transfer efficiency was detected by immunohistochemical method . Renal IRI model induced by clamping left renal arteries for 45 min followed by reperfusion for 24 h. Tubular cell apoptosis was detected by TUNEL assay. Bcl-2, Bax and Fas expressions were examined by RT-PCR. The expressions of caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were determined by Western bolt analysis. Results The expression of AM in the AM group was significantly higher than the empty plasmid group (0.51±0.09 vs 0.23±0.05; P<0.05). Compared with the control group, the apoptosis rate of renal tubular cell in the IRI group was significantly higher [(38.79±7.52)% vs (2.89±0.52)%; P<0.05]. The expressions of Bax, Bcl-2, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were also significantly increased (0.72±0.18 vs 0.23±0.04, 0.80±0.12 vs 0.38±0.06, 1.24±0.25 vs 0.39±0.09, 0.76±0.13 vs 0.38±0.08, 0.92±0.14 vs 0.32±0.06, 0.89±0.12 vs 0.42±0.09; P<0.05). Bax/Bcl-2 was also significantly increased (0.91±0.18 vs 0.61±0.08; P<0.05). Compared with the IRI group, AM pretreatment significantly decreased the apoptosis rate of renal tubular cells [(19.36±6.78)% vs (38.79±7.52)%; P<0.05]. AM inhibited the up-regulation of Bax, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9, while promoting the up-regulation of Bcl-2 (0.48±0.11 vs 0.72±0.18, 0.62±0.07 vs 1.24±0.25, 0.53±0.08 vs 0.76±0.13, 0.46±0.08 vs 0.92±0.14, 0.51±0.12 vs 0.89±0.12, 1.23±0.25 vs 0.80±0.12; P<0.05). Bax/Bcl-2 significantly decreased (0.44±0.12 vs 0.91±0.18; P<0.05). The above parameters had no significant diffe-rence between the empty plasmid group and the IRI group (P>0.05). Conclusion AM can reduce apoptosis of renal tubular epithelial cell induced by renal IRI, the mechanism of which might be achieved by inhibiting caspase-dependent intrinsic and extrinsic pathways.     

intermedin预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤修复和再生过程的作用

目的 探讨intermedin （IMD）预处理对大鼠肾脏缺血再灌注（IR）损伤修复和再生过程的作用。 方法 将Wistar大鼠按随机数字表法分为4组：假手术组（sham）、IR组、转空质粒组和转IMD组。在切除右肾后,转IMD组用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将IMD真核质粒转染到大鼠肾组织,用RT-PCR和Western印迹法检测转染效率。转染成功后,制作肾脏IR损伤模型,分别于再灌注后1 d、2 d、3 d、4 d、7 d和14 d 6个时间点各取6只大鼠,留取血清及肾组织标本,常规检测血清BUN和Scr;HE和PAS染色观察肾组织的病理变化;免疫组化法观察肾小管上皮细胞的增殖程度。 结果 （1）转IMD组比转空质粒组的IMD蛋白和mRNA表达均增多（均P < 0.05）,且转IMD组7 d时表达最多,与转IMD组4 d时差异无统计学意义;（2）与sham组相比,IR组1 d和2 d时Scr和BUN均显著增高（P < 0.05）;与IR组相比,转IMD组显著下降（P < 0.05）;转空质粒组与IR组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。（3）IR组、转空质粒组和转IMD组大鼠的肾小管均受损,但转IMD组的损伤较轻,均以2 d时病理损伤最重。（4）sham组肾小管和肾小球内几乎没有增殖细胞核抗原（PCNA）阳性细胞的表达;IR组和转空质粒组的PCNA阳性数在IR损伤1 d时开始增加,7 d时最多;转IMD组的PCNA阳性细胞数在IR损伤1 d时开始增加,3 d时最多。与IR组1~4 d相比,转IMD组的PCNA阳性细胞数显著增加（P < 0.05）;与IR组7 d相比,转IMD组7 d的PCNA阳性细胞数显著减少（P < 0.05）。 结论 IMD预处理可以促进肾小管上皮细胞增殖,加速肾脏IR损伤修复和再生。     

抗病毒药物的肾脏损害

新型有效的抗病毒药物的问世为许多难治性病毒感染性疾病,如人类免疫缺陷病毒(HIV)感染、免疫缺陷患者的巨细胞病毒(CMV)感染等的治疗带来福音。但同时我们也观察到,许多抗病毒药物具有潜在的肾脏毒性作用,如药物引起的急性肾     

Intermedin对血管紧张素Ⅱ诱导的NRK- 52E细胞纤维化的影响及机制研究

目的观察Intermedin(IMD)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞系NRK- 52E纤维化的影响,并探讨其机制。 方法体外培养的NRK- 52E细胞,随机分为4组：正常对照组、Ang Ⅱ组(10^－6mol/L)、转染IMD质粒＋Ang Ⅱ组、转染空质粒＋Ang Ⅱ组。采用Fugene HD转染试剂,将pIRES2- EGFP空质粒和pIRES2- IMD真核表达质粒分别转染至NRK- 52E细胞,应用流式细胞仪检测转染效率,转染成功48 h后用Ang Ⅱ(10^－6mol/L)干预24 h。用real- time RT- PCR检测各组细胞中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的表达;Western印迹法检测Col Ⅰ、E-钙黏蛋白(E- cadherin)的表达;ELISA法检测细胞培养上清液内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)的浓度。采用SPSS 17.0软件包进行统计学处理,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果与正常对照组相比,Ang Ⅱ组Col Ⅰ的表达显著上调(mRNA水平t＝4.835,P＝0.008;蛋白质水平P<0.001),E-钙黏蛋白的表达显著下降(t＝4.284,P＝0.013);转染IMD质粒后Col Ⅰ的表达较Ang Ⅱ组明显下降(mRNA水平t＝3.032,P＝0.039;蛋白质水平P<0.001),E-钙黏蛋白的表达明显上调(t＝6.054,P＝0.004);而转染空质粒后Col Ⅰ、E-钙黏蛋白的表达与Ang Ⅱ无明显差别(Col Ⅰ mRNA水平t＝0.951,P＝0.395;蛋白质水平t＝1.208,P＝0.294;E-钙黏蛋白蛋白质水平t＝1.613,P＝0.182)。与正常对照组相比,Ang Ⅱ组细胞上清液eNOS、cGMP的浓度显著增加(eNOS t＝20.718,P<0.001;cGMP t＝8.324,P＝0.001);与Ang Ⅱ组相比,IMD质粒＋Ang Ⅱ组的浓度进一步增加(eNOS t＝10.682,P<0.001;cGMP t＝18.974,P<0.001);而转染空质粒组＋Ang Ⅱ组eNOS及cGMP的浓度与Ang Ⅱ组无明显差别(eNOS t＝2.039,P＝0.111;cGMP t＝1.469,P＝0.216)。 结论IMD对Ang Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞纤维化有抑制作用,可能通过eNOS- cGMP途径阻断Ang Ⅱ的作用实现的。     

表观遗传修饰在急性肾损伤向慢性肾脏病转变中的作用

急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)后即使肾功能完全恢复也可能会发展为慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD),但AKI向CKD转变的机制尚不清楚。作为基因表达的重要调控者,表观遗传修饰可能在AKI向CKD转变中发挥重要作用。表观遗传变化由缺氧诱导,进而促进炎性因子相关基因的表达和胶原蛋白分泌。本文就表观遗传修饰在AKI转化为CKD中的作用、表观遗传学标志物在诊断AKI慢性转归中的价值,以及靶向干预表观遗传在防治AKI向CKD转变中的潜在作用进行综述。